АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Тесты in vitro для диагностики lgЕ-опосредованных заболеваний

ЛАБОРАТОРНЫЕ ТЕСТЫ

ПРИСТ - прямой радиоиммуносорбентный тест

Тест для определения общего IgE в сыворотке крови. Используют технику, при которой нерастворимые иммуносорбенты с "пришитыми" антиIgЕ-антителами в течение 16 часов инкубируют либо со стандартом, либо с исследуемой сывороткой. Затем несвязанные IgE-антитела сыворотки удаляют отмыванием, после чего в течение 2-4 часов инкубируют с меченными 125J aнтиIgE-антителами. Несвязанные 125J антиIgЕ антитела снова удаляют отмыванием. По связанной радиоактивности определяют количество общего Ig E.
Радиоактивное мечение изотопом 131J, а в последнее время все чаще 125J - это многократно проверенный и надежный метод. Однако из-за того, что необходимые в этом случае реагенты опасны для здоровья и нестабильны в результате радиоактивного распада, были предложены и другие типы меток.
Успешно применяют ферменты, в частности пероксидазу и фосфотазу, которые при добавлении к реагирующим компонентам соответствующего бесцветного субстрата, называемого хромогеном, воздействуют на последний с образованием окрашенных продуктов реакции. На использовании ферментов основан, в частности, метод определения антител, а иногда и антигенов, называемый ELISA (от англ. enzyme linked immunosorbent assay) - твердофазный иммуноферментный анализ - ИФА.
Прямой метод выявления специфических Ig Е-антител:
Радиоаллергосорбентный тест (PACT)
Используют для количественной оценки антигенспецифических Ig Е-антител.
Принцип метода: содержание специфических Ig Е антител в сыворотке можно установить, используя их способность связываться с антигеном (аллергеном), находящимся на нерастворимом сорбенте-носителе. Если в используемой сыворотке содержатся соответствующие антитела, то после инкубации они взаимодействуют с аллергенами.
Несвязанные антитела сыворотки удаляют путем отмывания и оставшийся комплекс инкубируют с Ig Е-антителами, меченными 125J.
В том случае, если ранее (на 1 этапе реакции) произошло связывание реагинов с аллергенами, то молекулы 125J aнтиIgE взаимодействуют с этими реагинами. Несвязанные 125J aнтиIg E удаляют отмыванием.
Количество антигенспецифических антител определяют по связанной радиоактивности, используя соответствующие стандарты.
Преимущества PACT по сравнению с кожными пробами:
больной тратит меньше времени на исследование; на результаты не влияют принимаемые лекарственные препараты; выполнение теста не связано с риском развития у больного анафилаксии; есть возможность количественной оценки.
Недостатки PACT: не выявляет иных антител-реагинов, кроме IgE.
Примечание:
PACT хорошо коррелирует с другими пробами, особенно провокационными. По сравнению с внутрикожными пробами PACT является менее чувствительным, но более специфичным, то есть практически не дает ложноположительных результатов PACT предпочтителен у детей до 5 лет, у которых кожные пробы непрактичны, у больных экземой, которым они противопоказаны и при патологическом дермографизме, когда результаты проб ложноположительные.
Иммуноферментный анализ (ИФА)
ИФА может быть использован для количественной оценки общего Ig E в сыворотке крови. Метод основан на принципе "сандвича". К сорбированным на твердой фазе антиIgE-антителам добавляют испытуемую пробу сыворотки, инкубируют, отмывают. Затем сюда же вносят конъюгат антиIgЕ-антител с ферментом в расчете на то, что этот конъюгат может связаться со вторым свободным активным центром IgE-антител, находящихся в составе иммунных комплексов на твердой фазе. Затем стадии инкубации и отмывки, после чего вносят субстрат (хромоген), соответствующий использованному ферменту. О превращении субстрата свидетельствует изменение цвета в лунке или в пробирке с твердой фазой, причем окрашивание происходит только при наличии в составе сендвич-комплексов на твердой фазе, а соответственно и в исследуемой сыворотке крови иммуноглобулина E. Интенсивность цветной реакции оценивают спектрофотометрически относительно положительной и отрицательной контрольных проб.

Вопрос

Дата добавления: 2014-12-12 | Просмотры: 1456 | Нарушение авторских прав