АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Метод гашения действия.

Метод основан на нейтрализации вируса и его болезнетворного действия.

РН - реакция нейтрализации.

Для проведения метода требуются

1. Вирус с выраженной инфекционной активностью.

2. Антисыворотка известная или исследуемая.

3. Биологический объект (лабораторное животное, культуры тканей, эмбрионы).

4. Растворители (физиологический раствор при работе с животными, среда 199, Игла, Эрла - для работы с культурой клеток).

Вируссодержащий материал (ВСМ) предварительно титруют, определяя конечное разведение, которое может вызвать повреждение тканей или инфицирование животных или эмбрионов.

Готовят 10-кратные разведения ВСМ в пробирках, используя для каждого разведения отдельную пипетку. Для этого, в пробирки вносят 1 мл растворителя и в первую пробирку 0,1 мл ВСМ. Из первой пробирки переносят во вторую 0,1 мл вируссодержащей жидкости, перемешивают, переносят 0,1 мл в третью и т.д. Каждое разведение вируса из пробирки вносят в несколько лунок, содержащих пласт клеток, по 0,2 мл. Наблюдают за культурой клеток 2-3 суток. Титр вируса выражают в 50 % дозе - ТКИД50, это гибель 50 % клеток.

Постановка опыта. В пробирках делают последовательные разведения испытуемых сывороток в объеме 0,5 мл. Во все лунки вносят по 100 ТКИД ВСМ, выдерживают смесь 1-2 ч при комнатной температуре, затем каждое разведение вносят в пласт клеток в лунках. Если вирус был нейтрализован антителами, то размножения в культуре не последует - это проявится отсутствием ЦПД (цитопатического действия). Там, где вирус оставался нативным, отмечено ЦПД.

Вариант с животными. Например, проводят выявление антител в сыворотках людей с подозрением на бешенство. К 10-кратным разведениям ВСМ в пробирках добавляют равный объем исследуемой сыворотки в разведении 1:10. Параллельно делают контрольный ряд (нормальная сыворотка). Пробирки оставляют на 1 ч при 37^о С. Смесь вводят в мозг молодым взрослым белым мышам и наблюдают 30 суток. Мыши, зараженные смесью вируса с антителами, не болевают, а зараженные смесью вируса с нормальной сывороткой погибают от энцефалита.

Цветная проба. Антисыворотки смешивают с вирусом по 0,4 мл (ТКИД50). Через 2 ч вносят 0,2 мл смеси в лунку с культурой клеток и наслаивают сверху вазелин 0,2 мл для изоляции от кислорода воздуха. На протяжении 6-8 дней регистрируют изменение цвета среды. В лунках, где был внесен нейтрализованный вирус, цвет среды изменится от красного к желтому. Там, где вирус был живым, клетки погибли, а цвет среды оставался красным.

Дата добавления: 2015-10-11 | Просмотры: 366 | Нарушение авторских прав