АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Получение аминокислот щелочным гидролизом.

Получение аминокислот кислотным гидролизом.

Получение аминокислот щелочным гидролизом.

Выделение из белковых гидролизатов.

u Дешевизна – сырье отходы мясо и рыбообработки, кровь, растительный белок

u Можно получать любые аминокислоты

Получение аминокислот кислотным гидролизом.

Получение аминокислот щелочным гидролизом.

Гидролиз:

а) Кислотный

6 Н соляная или 8 Н серная к-ты, +110 С (в автоклаве) 12-300 часов. Около гидролизуется около половины белка. Полностью разрушается три, частично сер, три, цис

б) Щелочной

В автоклаве 6 Н соляная кислота. Полностью разрушается сер, тре, арг,цис. Частично – три.

в) Ферментативный

Самый мягкий процесс. а\к не разрушаются. Однако требуется несколько протеаз – лучший препарат – проназа. Остается негидролизоваными 10-15% пептидов.

При получении аминокислот белки прежде всего расщепляют с помощью основного, кислотного или ферментативного гидролиза [54]. В классическом методе кислотного гидролиза [55,56] используют 6 н. НCl (tкип=110⁰ С)или 8 н. H2SO4. Время реакции от 12 до 72 ч в зависимости отстроения белка. Очень устойчивы к гидролизу пептидные связи, образованные лейцином, изолейцином и вал ином. При этом триптофан разрушаетсяполностью, серии и треонин до 10%.

Потери аминокислот, обусловленные присутствием углеводов, могут

быть снижены, если работу проводят в вакууме и применяют большой из-

быток кислоты (белок: НСl = 1:10000).

В других методах кислотного гидролиза используют смесь пропионовой кислоты с 12 н. НС1 [57] (время реакции при 160 ⁰ С 15 мин, при 130 ⁰ C 2ч), 3 н. 4-толуолсульфокислоту [58] или 3 н. меркаптоэтансульфоновую кислоту [59] (время реакции при 110 ⁰ C 24 ч). Последний метод используется специально для аналитических целей. Триптофан при этом сохраняется на 95%.

При щелочном гидролизе с 6 н. раствором гидроксида бария в автоклаве (давление ~ 700 кПа) разрушаются гидроксиаминокислоты и цистеин, в

то время как триптофан сохраняется.

Очень легко протекает ферментативный гидролиз белков. Для осуществления полного гидролиза необходимо применение комбинации нескольких ферментов, что связано с высокой специфичностью протеаз. На практике применяют протеиназы животного и бактериального происхождения (эндопептидазы), такие, как трипсин, пепсин и папайи в комбинации со специфическими амино- и карбоксипептидазами [60]. Нередко хорошие результаты получают, используя неочищенный фермент (сырой препарат), например панкреатин, который содержит все пищеварительные ферменты поджелудочной железы (его используют при получении аспарагина и глутамина).

Выделение отдельных аминокислот из белкового гидролизата не сопровождается никакими затруднениями в тех случаях, когда они содержатся в достаточно высоких концентрациях и заметно отличаются друг от друга по свойствам.

Глутаминовая кислота, например, кристаллизуется прямо из концентрированного гидролизата, насыщенного хлористым водородом, цистин и тирозин отделяют благодаря их плохой растворимости в воде. Селективное отделение ароматических аминокислот удается выполнить с помощью адсорбции на активированном угле. Полученную при гидролизе смесь аминокислот лучше всего разделить хроматографически. Выделению отдельных компонентов предшествует обычно разделение на кислые, основные и нейтральные группы аминокислот, при этом большое значение имеют электрофорез и специфические ионообменники. Раннее распространенные методы разделения, такие, как фракционная перегонка эфиров (по Фишеру), экстракция моноаминокарбоновых кислот н-бутиловым или амиловым спиртом (по Дакину), осаждение ≪гексоновых оснований≫ лизина, аргинина и гистидина фосфорновольфрамовой кислотой или флавиановой кислотой, теперь имеют только второстепенное значение.

Дата добавления: 2015-12-15 | Просмотры: 1102 | Нарушение авторских прав