Иммуноферментный анализ
Метод был разработан в начале 70-х гг независимо друг от друга тремя группами учёных. Метод напоминает РИА, но в его основу положено маркирование Аг или Ат, вступающего в реакцию, ферментом. Взд метки с субстратом обычно сопровождается изменением окраски среды. В настоящее время созданы многочисленные модификации этого метода, но наибольшее распространение получил гетерогенный ИФА на твёрдой фазе (твердофазный). Различают:
1) ПРЯМОЙ ТВЕРДОФАЗНЫЙ ИФА. В этом случае:
1. сыворотку с Ат инкубируют с Аг, фиксированным на твёрдом субстрате (чаще всего это пластиковая микропланшетка).
2. Ат, не связавшие Аг, удаляют многократным промыванием.
3. Вносят меченную ферментом сыворотку к Ат, связавшим Аг.
4. Определяют ко-во фермента–маркёра, связавшегося с Ат.
2) КОНКУРЕНТНЫЙ ТВЕРДОФАЗНЫЙ ИФА.
1. Вносят сыворотку. Если в ней есть специфические Ат, то они связываются с Аг, фиксированном на твёрдом субстрате. Если специфических Ат нет, то Аг оказывается не связанным.
2. При добавлении специфических к фиксированному Аг Антител в первом случае им будет не с чем взаимодействовать (большинство Аг уже связаны) Þ содержание маркёра низкое. Во втором случае специфические Ат будут связываться с Аг и при отмывании они не будут смываться Þ высокое содержание маркёра.
Аналогично м.б. фиксированы АНТИТЕЛА, и различные фирмы выпускают именно планшеты с уже фиксированными Ат.
По сравнению с классическими методами выявления Аг этот метод позволяет непосредственно регистрировать их взаимодействие с Ат, а не вторичные проявления (агглютинацию, преципитацию или гемолиз). Метод очень ЧУВСТВИТЕЛЕН (достаточно концентрации 1нг/мл).
Определяют: Хламидии, клостридии, ВИЧ и др.
Дата добавления: 2015-09-03 | Просмотры: 476 | Нарушение авторских прав
1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 |
|