1. Взятие материала и фиксация
| Материал берут очень маленькими кусочками (порядка 1 мм 3), а фиксацию осуществляют обычно в 2 стадии:
вначале глутаральдегидом (стабилизация белков),
затем - четырёхокисью осмия (стабилизация фосфолипидов и контрастирование ткани).
|
2. Уплотнение материала
| 1. Образцы, как обычно, обезвоживают, а для их дальнейшего уплотнения используют эпоксидные смолы.
2. а) Заливку производят в специальных формах,
б) затвердевание смеси происходит путём её полимеризации в термостате,
в) и затвердевшие блоки имеют вид маленьких свечей.
|
3. Приготовление срезов
| 1. Срез делают с помощью ультратома; их толщина - 30-50 нм (ср. с микротомными срезами - 10.000 – 20.000 нм).
2. Затем их переносят на сеточки (играющие роль предметного стекла).
|
4. Окрашивание срезов
| 1. а) Окрашивание срезов сводится к их контрастированию с помощью солей тяжёлых металлов (свинца, вольфрама, урана).
б) Эти соли осаждаются на фосфолипидах мембран и поглощают электроны.
2.Поэтому соответствующие места клетки выглядят более тёмными.
|