АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Теоретическая справка

Дизентерия вызывается различными видами бактерий, относящимися к роду Shigella.

Основной механизм передачи – фекально-оральный.

Шигеллы в течение суток могут оставаться в желудке, часть из них распадается, высвобождая эндотоксин, который защищает микроорганизмы от действия гуморальных и клеточных факторов иммунитета хозяина. Оставшиеся шигеллы продвигаются в тонкий кишечник, где могут задерживаться до нескольких суток и размножаться. После этого бактерии продвигаются в толстый кишечник. Пусковым моментом в патогенезе дизентерии являются адгезия и внутриклеточное паразитирование шигелл.

Проникновение шигелл в эпителиоциты генетически опосредовано наличием у шигелл белков наружной мембраны, взаимодействующих с рецепторами эпителиоцитов и побуждающих последние к поглощению возбудителей. Проникшие внутрь клеток шигеллы способны в них размножаться благодаря наличию у них факторов персистенции: АЛА, АИА и др.

В развитии хронической дизентерии важное значение имеют следующие механизмы: а) внутриклеточный паразитизм патогена; б) антигенная мимикрия шигелл; в) секреция факторов персистенции шигеллами; г) развитие дисбиоза; д) формирование ГЗТ и др.

Для лабораторной диагностики дизентерии используются два принципа:

1) обнаружение возбудителя бактериологическим методом;

2) обнаружение специфических изменений в организме серологическим методом в РПГА по нарастанию титра антител.

Выбор исследуемого материала для бактериологического метода определяется особенностью возбудителя, а именно, его внутриклеточным паразитированием: забор материала производят петлей, которая вводиться в прямую кишку на 10-20 см.

Второй принцип диагностики позволяет подтвердить диагноз острой дизентерии по нарастанию титра антител или по обнаружению в сыворотке больного иммуноглобулинов класса IgМ; при хронической дизентерии обнаруживаются иммуноглобулины класса IgG.

Самостоятельное практическое задание

Задание 1

Цель. Провести бактериологический и серологический методы диагностики дизентерии. Оценить их диагностическую ценность. Ознакомиться с ИБМП для лабораторной диагностики дизентерии.

Задача. В инфекционной больнице в течение 6 дней лечиться больной с диагнозом: «Острая дизентерия». Жалобы при поступлении на высокую температуру, частый жидкий стул со слизью и кровью, боли в животе. Для подтверждения диагноза проведено бактериологическое исследование парными сыворотками на 3-й и 6-й дни болезни. Учтите результаты бактериологического и серологические исследования.

Методика 1.

Бактериологический метод диагностики: выделение и идентификация чистой культуры.

1-й этап. Посев нативного материала. Или взятого с помощью петли из прямой кишки. Материал засевают на среду Плокирева или Левина или висмут-сульфит агар и помещается в термостат при температуре 37°С и инкубируется в течение 24-48 часов, петлю заливаем средой накопления (селенитовый или желчный бульоны).

2-й этап. Выделение чистой культуры. Через 24 часа инкубации в термостате с помощью петли отвить типичную для дизентерийных бактерий бесцветную колонию на скошенный МПА или среду Олькеницкого для выделения чистой культуры и поместить в термостат на сутки. Из сред накопления произвести высев на среды Плоскирева, Левина или висмут-сульфит агар.

3-й этап. Идентификация выделенной культуры: а) морфология; б) биохимические свойства; в) антигенная структура;

4-й этап: учесть чувствительность выделенной культуры к антибиотикам и бактериофагу.

Методика 2

Серологический метод диагностики.

Для серологического исследования при постановке РПГА берется: а) сыворотка больного; б) эритроцитарный диагностикум; в) физиологический раствор.

Протокол исследования

Цель…

Бактериологический метод

Серологический метод

Выводы

Задание 3

Цель. Изучить специфические препараты для диагностики дизентерии.

Методика.

Используя аннотации к диагностическим препаратам по теме «микробиология дизентерии», изучите препараты, применяемые при диагностике этой инфекции.

Протокол исследования

Цель…

Аннотация лечебно-профилактических и диагностическим препаратов по теме «Микробиология дизентерии»

Лечебные бактериофаги:

Бактериофаг дизентерийный поливалентный жидкий или в таблетках – стерильный фильтрат фаголизатов возбудителей бактериальной дизентерии: шигелл Флекснера 1,2,3,4,6- типов и шигелл Зонне

Интести-бактериофаг жидки – смесь стерильных фильтратов фаголизатов шигелл Флекснера 1,2,3,4,6-го серовариантов, шигелл Зоне; сальмонелл паратифа А, паратифа В, тифимуриум, инфантис, холерасуис, ораниенбург, энтеритидис; наиболее распространенных серовариантов кишечной палочки, протеус вульгарис и мирабилис, энтерококков, стафилококков, псевдомонас аеругиноза. Применяется для лечения кишечных инфекций.

Диагностические препараты

Адсорбированные агглютинирующие сыворотки для идентификации шигелл. Получены из крови животных, иммунизированных определенными видами шигелл. Используются в бактериологическом методе для идентификации чистых культур.

Дизентерийный диагностикум. Состоит из взвеси убитых бактерий Флекснера и Зоне. Используется в серологическом методе.

Дизентерийный эритроцитарный диагностикум состоит из взвеси эритроцитов, нагруженных антигенами Флекснера, Зоне и др. используются для постановки РПГА в серологическом методе.

Лабораторное занятие №6

Тема: Микробиологическая диагностика брюшного тифа и паратифов.

Цель. Изучить этиологию, эпидемиологию и патогенез брюшного тифа, паратифов и ПТИ. Овладеть основными методами лабораторной диагностики брюшного тифа, паратифов, и оценки результатов исследований. Научиться практически решать вопросы по специфической профилактике брюшного тифа.

Теоретическая справка

По последней классификации отмечают два вида сальмонелл: 1)Salmonella bogori содержит 10 очень редких сероваров; 2)Salmonella choleraesuis включает 2500 сероваров. Диагностическим лабораториям рекомендовано внутри рода Salmonella использовать названия сероваров, например: Salmonella typhi или Salmonella typhimurium. Природный резервуар сальмонелл – человек, животные и птицы. Основной путь передачи – водный и пищевой. Сальмонеллы высокоустойчивы в окружающей среде: в питьевой воде – до 120 суток, в комнатной пыли – до 560 суток, в замороженном мясе – до 13 месяцев. Сальмонеллы имеют сложную антигеннюую структуру: в соответствии с содержанием тех или иных О-АГ сальмонеллы разделяют на серологические группы, обозначаемые арабскими цифрами. По Н-АГ микроорганизмы делят на серовары, Vi-АГ – фактор вирулентности. При идентификации сальмонелл принимают во внимание 3 антигена: О, Н и Vi. Этот принцип положен в основу диагностической антигенной схемы Кауфмана-Уайта. Типичную клиническую картину брюшного тифа и характерные патологоанатомические изменения вызывают как брюшнотифозные бактерии, так и бактерии паратифа А и В. Остальные сальмонеллы вызывают заболевания с синдромом гастроэнтероколита.

Для лабораторной диагностики сальмонеллезов используют оба принципа:

1) обнаружение возбудителя – метод бактериологический;

2) обнаружение специфических изменений – метод серологический;

Самостоятельная практическая работа

Задание 1

Цель. Провести бактериологический и серологический методы диагностики брюшного тифа, паратифов.

Задача. В инфекционную больницу поступила женщина на 6-й день болезни. для подтверждения диагноза был сделан посев крови, мочи, испражнений больной для выделения чистой культуры. Поставлена серологическая реакция с сывороткой больной. Учтите результаты исследований, оформите протокол.

Методика 1

Бактериологический метод диагностики

Выделение и идентификация чистой культуры.

1-й этап. Посев материала. Материал для исследования в зависимости от условий задачи может быть различным: кровь, испражнения, моча. Кровь больного берется на первой неделе болезни в количестве 5-10 мл стерильно из локтевой вены и засевается у постели больного во флаконы с 50-100 мл 10-20% желчного бульона. Испражнения и мочу засевают на среду Плоскирева, висмут-сульфит агар и залить средами обогащения: магниевую среду и селенитовый бульон.

2-й этап. Выделение чистой культуры. Через сутки делается посев петлей с желчного бульона на среды Плоскирева и висмут-сульфит агар для выделения чистой культуры. Из чашки со средой Плоскирева петлей откалывают типичную для сальмонеллезных палочек бесцветную колонию на трехсахарный (Олькеницкого, Клиглера) агар. Посевы помещают в термостат при температуре 37°С на сутки.

3-й этап идентификация чистой культуры:

а) морфологические свойства;

б) подвижность;

в) биохимические свойства;

г) антигенная структура;

Положительная реакция агглютинации с одной из О-сывороток позволит определить групповую принадлежность выделенной культуры сальмонелл по таблице Кауфмана, после чего с соответствующими данной группе Н-монорецепторными сыворотками определяется серовар культуры.

Исследование выделенной культуры заканчивается определением фаготипа микроорганизмов. С этой целью выделенную культуру сеют на питательную среду и наносят петлей на засеянную поверхность брюшнотифозные фаги различных типов. Лизис культуры вызывается определенным фагом, что соответствует фаготипу культуры.

Методика 2

Серологический метод диагностики брюшного тифа. РНГА.

Ставиться по стандартной схеме в плашках или пробирках.

Протокол исследования

Цель…

Бактериологический метод

Выделение чистой культуры и её идентификация

Серологический метод

Вывод…

Задание 2

Цель. Провести исследования для диагностики брюшнотифозного бактерионосительства.

Задача. Больной перенес брюшной тиф. Перед выпиской из стационара он был обследован для выявления бактерионосительства: возбудитель обнаружен в испражнениях, из мочи и желчи микроорганизмы не выделены. Проведен серологический метод диагностики: поставлена реакция Vi-гемагглютинации. Учтите результат. Оформите протокол.

Методика.

Для серологического метода использованы ингредиенты: сыворотка больного, эритроцитарный Vi-диагностикум, физиологический раствор.

Протокол исследования.

Цель…

Вывод…

Задание 3

Цель. Изучить специфические препараты для диагностики сальмонеллезных инфекций.

Методика.

Из аннотации по теме «Микробиология брюшного тифа» внести в протокол перечень специфических диагностических препаратов.

Протокол исследования.

Цель…

Аннотация К лечебно-профилактическим и диагностическим препаратам по теме «Микробиология брюшного тифа».

Лечебно-профилактические препараты.

Вакцина брюшнотифозная спиртовая, обогащенная Vi-антигеном.

Вакцина брюшнотифозная Vi-полисахаридная.

Бактериофаг сальионеллезный.

Интести бактериофаг жидкий.

Бактериофаг брюшнотифозный.

Диагностические препараты.

Люминисцирующаю брюшнотифозная сыворотка.

Адсорбированные агглютинирующие сыворотки.

Эритроцитарный сальмонеллезный диагностикум

Лабораторное занятие №6

Дата добавления: 2015-07-23 | Просмотры: 924 | Нарушение авторских прав