АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Люминесцентный микроскоп

Принцип действия микроскопа основан на использовании явления люминесценции наблюдаемых объектов, возникающей под действием света определенного спектрального состава. Освещение объектов светом, возбуждающим люминесценцию, производится сверху через опак-иллюминатор и объектив.

В настоящее время в лабораториях лечебно-профилактических учреждений находится в эксплуатации несколько моделей отечественных специализированных люминесцентных микроскопов (ЛЮМАМ Р-8, МЛД-2, новый ЕС ЛЮМАМ РПО-11) и ряд моделей, среди прочих реализующие в том числе и метод люминесценции (универсальный исследовательский биологический микроскоп МБИ-15-2).

Люминесцентный микроскоп отличается от биологического (проходящего света) наличием осветителя падающего(отраженного)света и дополнительных узлов, связанных со светофильтрами. Спектральный диапазон возбуждения люминесценции обеспечивается в пределах от 400 до 550 нм, при этом спектральный диапазон исследуемой люминесценции лежит в пределах от 500 до 700 нм. При работе в свете люминесценции необходимо пользоваться только специальными люминесцентными объективами и нелюминесцирующими иммерсионными жидкостями (водная иммерсия и нелюминесцирующее масло).

Стереоскопическая микроскопия

Стереоскопический эффект. Особенность зрительного восприятия человека заключается в способности чувствовать глубину воспринимаемого зрением пространства — пространственное зрение или стереоскопический эффект, что может быть связано как с различным напряжением мышц, так и с обработкой разных изображений, полученных каждым из глаз. Стереоскопическое зрение заключается в способности видеть предметы объемными при наблюдении их двумя глазами. Так как каждый глаз смотрит на один и тот же предмет под различным углом, то изображение в одном глазу несколько отличается от изображения в другом. Психологическое восприятие этого факта вызывает объемное представление о предмете. Пластикой прибора называется его способность усиливать стереоскопический эффект по сравнению с тем стереоскопическим эффектом, который получается при наблюдении невооруженным глазом. Одним из простейших стереоскопических приборов является бинокулярная лупа — прибор с одноступенным изображением. В бинокулярных лупах стереоскопический образ совпадает с оптическим изображением, и пластика в таких лупах соответствует квадрату увеличения лупы. Основным отличием микроскопа от лупы является его двухступенчатое увеличение с помощью объектива и окуляра. Пластика в микроскопе равна увеличению микроскопа. Оптические элементы, кроме функций традиционных для объективов и окуляров, должны обеспечивать:

1) наблюдение объекта под разными углами.

2) получение правильного стереоскопического восприятия наблюдаемого пространства за счет прямого изображения предмета, которое обеспечивается оборачивающей призменной или линзовой системами;

3) обеспечение углового стереоскопического параллакса за счет устройств раздвижки по глазной базе наблюдателя обычно с помощью призменных систем и шарнирных механизмов раздвижки по базе.

Уход за микроскопом

Срок службы микроскопа рассчитан на 10 лет с учетом естественного старения. Для сохранения микроскопа необходимо выполнять следующие правила:

1. Объективы должны быть зафиксированы в револьверном устройстве.

2. Иммерсионный объектив должен быть вычищен. То же относится и к конденсору, если он работал с иммерсией.

3. Объективы должны быть опущены, но не касаться предметного стола.

4. Микроскоп должен быть покрыт чехлом для предотвращения попадания пыли.

Два раза в год представителями сервисной службы должна проводиться профилактическая чистка и смазка микроскопа.

Иммерсионные объективы обязательно должны после использования подвергаться чистке с помощью ватного тампона и спирт-эфирной смеси (или 70% спирта). Процесс чистки следующий:

— объектив вывинчивается из микроскопа (или устанавливается в положение, удобное для чистки),

— сухим тампоном одним движением руки снимают иммерсию с передней линзы объектива,

— следующий тампон смачивают в смеси, причем тампон должен быть чуть влажным. Кругообразным движением, без вдавливания линзы внутрь объектива (конденсора), аккуратно протереть линзу (операцию можно повторить дважды с вновь смоченным тампоном), последний раз линзу протирают сухим тампоном.

Операции следует проводить очень аккуратно и осторожно, следить за количеством смеси, которой должно быть ровно столько, чтобы протереть чуть влажным тампоном.

При плохо вычищенном объективе может произойти:

— резкое снижение контраста изображения, потеря четкости, резкости и разрешающей способности объектива, появление дополнительного рассеянного света.

Плохо вычищенный фронтальный компонент конденсора снижает освещенность поля на предмете, возможно появление дополнительной окраски и провалов в освещенности и изображении мелких элементов.

Точное выполнение изложенных приемов настройки освещения (по Келеру) является необходимым условием при специальных исследованиях (фазовый контраст, темное поле и т.д.), документировании (микрофотографии) или при выполнении работ, связанных с анализом изображения.

Средства пробоподготовки, классификация, характеристика групп.

Пробоприготовительные операции являются неотъемлемым элементом лабораторных методик. Для сокращения трудозатрат, времени, повышения качества исследований и достоверности результатов, улучшения условий труда лаборантов, а в ряде случаев и в целях обеспечения биологической безопасности большим числом фирм разрабатывается и внедряется в лабораторную практику широкий арсенал приспособлений, специализированных устройств и приборов пробоподготовки.

Операции, связанные с дозированием, играют важную роль в лабораторных технологиях. Аккуратное и точное выполнение операций дозирования оказывает существенное влияние на качество и точность результатов проводимых лабораторных исследований.

Основными режимами дозирования являются: прямое дозирование, обратное дозирование, многократное дозирование и режим разведения.

Прямое дозирование — наиболее распространенный режим дозирования, при котором весь забранный объем жидкости сбрасывается за один полный ход поршня. Этот режим в большей степени подходит для дозирования водных растворов.

Обратное дозирование — в большей степени, чем прямое дозирование, отвечает задачам дозирования биологических, вязких и пенящихся жидкостей, а также дозирования очень малых объемов. При этом в наконечник набирается несколько больший по сравнению с дозируемым объем жидкости. Остающийся в наконечнике некоторый объем жидкости нивелирует погрешность, связанную с образованием пены или мениска.

Многократное дозирование — предполагает повторяющиеся операции дозирования идентичных или различных объемов жидкости.

В первом случае наиболее целесообразно использовать электронные дозаторы — диспенсеры, что позволяет повторять дозирование после однократного заполнения наконечника. Применение электронных дозаторов избавляет оператора от многократно повторяющихся движений в локтевом и лучезапястном суставе, приводящих к возникновению профессиональных заболеваний.

Режим разведения жидкости. Эффективность режима может быть повышена, если в наконечник дозатора забирается первый объем, а затем перед забором второго создается воздушная подушка, и обе жидкости выливаются вместе.

Требования к дозаторам жидкости:

• высокая точность и воспроизводимость дозирования;

• широкий диапазон дозирования;

• высокая химическая стойкость деталей и узлов дозаторов, контактирующих с дозируемыми жидкостями;

• возможность дозирования биожидкостей и реактивов с различными физико-механическими свойствами;

• высокие эргономические характеристики, связанные с многократными манипуляциями в процессе выполнения большого числа дозирующих операций за рабочую смену;

• биологическая безопасность.

Дозирующие устройства, классификация, принципы построения, основные режимы дозирования. Электронные пипетки.

Классификация и принципы построения дозирующих устройств

1. По способу забора и выдачи доз дозирующие устройства подразделяются на пипе-точные, клапанные и перистальтические дозаторы.

А) Пипеточные дозаторы — это бесклапанные дозаторы, где забор и выдача пробы осуществляются через один и тот же наконечник дозатора. Забор дозирующей жидкости осуществляется в съемную насадку — наконечник, что обеспечивает высокую чистоту при выполнении операции дозирования, практически исключает загрязнение последующей пробы предыдущей. Перемещение дозируемой жидкости в насадке осуществляется путем передачи через воздушный тракт разрежения или давления воздуха, создаваемого в поршневой или плунжерной паре пипетки, при этом конструкция дозатора обеспечивает ход поршня на выдачу дозы больше, чем при заборе пробы, что улучшает условия полной выдачи дозы. Многие пипеточные дозаторы имеют устройства для сброса наконечников. Для повышения точности дозирования в конструкции корпуса некоторых пипеток предусмотрены теплоизолирующие кожухи, уменьшающие влияние температуры руки оператора на воздушный тракт дозатора. Принимаются меры для исключения или уменьшения воздушного зазора между поршнем и дозируемой жидкостью, используются прецизионные капиллярные трубки и т. д.

Пипеточные дозаторы нашли самое массовое применение в лабораторной практике.

Пипеточный диспенсер — осуществляет разовый забор дозируемого раствора в наконечник пипеточного дозатора и осуществляет через этот же наконечник многократное пошаговое дозирование.

Пипеточный дилютер осуществляет через наконечник последовательно забор различных жидкостей разных объемов и через этот же наконечник выдает весь суммарный объем жидкости, находящейся в нем.

Б) Клапанный дозатор имеет входной канал, куда поступает дозируемая жидкость, и выходной канал, через который выдается доза. Следует помнить, что всякая дозирующая система, заполненная жидкостью, при всех равных условиях, обладает потенциально более высокой точностью, чем система с воздушным трактом. К клапанным дозаторам относятся клапанный диспенсор и дозатор – дилютер.

В) Перистальтические дозаторы (насосы). Чаще всего они применяются в качестве дозатора-насоса подачи проб и реагентов в проточных анализаторах, как составная часть последних.

2. По способу установки дозы дозаторы подразделяются на дозаторы с фиксированным объемом дозы и дозаторы с регулируемыми переменными объемами дозы. При выполнении сотен стандартных дозирований наиболее надежными помощниками лаборантов являются дозаторы с фиксированными объемами дозирования, снабженные удалителем (сбрасывателем) наконечника или без него.

3. По количеству каналов дозирования дозаторы разделяются на одноканальные и многоканальные. Одноканальные дозаторы не привязаны к форме носителя проб и реакционной смеси, в связи с чем они универсальны. Многоканальные дозаторы ориентированы на специальные носители. Они наиболее удобны при работе с микропланшетами и стрипами.

Например, 8-канальный пипеточный дозатор с расстоянием между наконечниками 9±0,2 мм ориентирован на работу с 8-луночными стрипами или 96-луночным планшетом, используемым для проведения гетерогенного иммуноферментного анализа.

Существуют также так называемые вариканальные пипетки, в которых предусмотрена возможность варьировать в определенных пределах расстояние между каналами.

4. По способу управления дозаторы можно разделить на дозаторы с ручным приводом, автоматическим приводом и автоматическим приводом с микропроцессорным управлением — электронные дозаторы, среди которых наибольшее распространение получили электронные пипетки.

5. Пипетки с позитивным перемещением. Этот тип пипеток рекомендуется для работы с вязкими, агрессивными и летучими жидкостями, при анализе ДНК, включая методики ПЦР (PCR), дозировании масел и основных химических растворителей. В пипетках этой конструкции поршень через насадку приходит в непосредственное соприкосновение с жидкостью, что препятствует образованию воздушного слоя в наконечнике, который, сжимаясь и расширяясь, может влиять на точность дозирования.

6. Особые или специальные классы дозирующих устройств образуют разнообразные по конструкции устройства, встроенные в автоматические анализаторы, и робототехнические разливочные системы (дозирующие автоматы). Область применения и распространенность последних значительно меньше, чем традиционных дозирующих приборов.

Дата добавления: 2015-09-03 | Просмотры: 779 | Нарушение авторских прав