АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Бактериологическое исследование

Жидкие исследуемые материалы сеют в нативном виде. Кусочки пораженных тканей и другие плотные материалы сначала гомогенизируют в фарфоровую ступку с песком, добавляя равный объем изотонического раствора хлорида натрия. Любой материал разделяют на 2 части; одну из них прогревают 20 мин при 80 ° С, вторую не подвергают термической обработке. Обе пробы параллельно высевают на специальные сердовища для культивирования анаэробных микроорганизмов. Для накопления анаэробов широко используют среду Китт-Тароцци. На нем С. perfringens растет с интенсивным помутнением и бурным газообразованием. Другие виды образуют помутнение и меньшее выделение газа или без него (С. histolyticwn). При посеве на стерильное обезжиренное лакмусовой молоко С. perfringens уже через 4-5 ч вызывает его звудження с образованием кирпичного цвета губчатого сгустка, который газ поднимает на поверхность пептонизованои жидкости. Классическим средой для получения изолированных колоний являются кровяное сахарный агар Цейслера (до МПА добавляют 1,5% дефибринированной крови и 2% глюкозы). Чашки с посевами выращивают в анаеростати. На этом агаре колонии основных возбудителей имеют гладкую дискообразной форму серого цвета с равными или бахромчатые краями и открытым центром, окруженные зоной гемолиза. На среде Уиллиса-Хоббса (МПА с лактозой, индикатором нейтральным красным, яичным желтком и обезжиренным молоком) колонии С. perfringens красного цвета и зоной опалесценции; колонии С. novyi бесцветные (не разлагают лактозы), но с зоной опалесценции; колонии С. septicum красные, вокруг колоний С. histolyticum есть зона просветления. Колонии С. histolyiticum, С. sordellii бесцветные, а ореол опалесценции имеют только колонии С. sordellii. На кровяном агаре с бензидином колонии С. novyi чернеют после пребывания на воздухе. При посеве материала уколом в столбик агара Вильсона-Блера уже через 3-4 часа в участках роста С. perfringens среду чернеет. Характерные особенности роста на молоке и среде Вильсона-Блера используют для экспресс-диагностики газовой гангрены, вызванной С. perfringens. Колонии, выросшие на дифференциально-диагностических средах, микроскопируют, пересевают на среду Китт-Тароцци, получают чистую культуру и идентифицируют ее по морфологическим, культуральным и биохимическим свойствам. Важное значение имеет определение типов экзотоксинов. При отсутствии анаеростатив и других приборов для создания анаэробных условий изолированные колонии, а значит и чистые культуры, можно получить путем посева различных разведений исследуемого материала в трубки Виньяль-Вейона методом Вейнберга. Материал разводят 1:10, 1:100, 1:1000 в растопленном и охлажденном до 45 ° С сахарном агаре, разлитом в пробирки по 10 мл. Из каждого разведения агар натягивают в трубки, а капиллярный конец запаивают на огне. После инкубации при 37 ° С трубки распиливают надфилем, столбик агара с характерными колониями анаэробов выталкивают в стерильную чашку Петри. Затем колонии петлей пересевают в среду Китт-Тароцци, выращивают чистые культуры и идентифицируют их. В ряде развитых стран оранизовани специальные лаборатории, в которых используются современные аппараты и тест-системы для культивирования и идентификации анаэробов, а также боксы, где все посевы, пересев и другие манипуляции проводят при полном отсутствии кислорода воздуха. Однако в рутинных бактериологических лабораториях выделения и полную идентификацию чистых культур проводят редко, поскольку весь процесс занимает много времени, требует сложных и дорогостоящих питательных сред и специальных приборов. В связи с этим для более быстрой диагностики анаэробной газовой инфекции и выбора соответствующих лечебных антитоксических сывороток проводят определение типов экзотоксинов с помощью реакции нейтрализации in vivo.

Дата добавления: 2015-09-18 | Просмотры: 351 | Нарушение авторских прав