АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

РЕТИНОЛЗВ’ЯЗУЮЧІ БІЛКИ

В межах цитоплазми, РОН і РК зв'язані із специфічними клітинними зв’язуючими білками, КРЗБ-І і -II,і CРКBP-І CРКBP-ІІ, відповідно. Ці білки включаються до регулювання внутріклітинної концентрації РОН, РАЛ, і РК, діючи, як зберігання або білки-човники в метаболізмі кретиноїдів, і підтримують постійний специфічний для клітин рівень вільного РОН і РК (мал. 3, таблиці 1-3). Концентрації як КРЗБ-I/II, так і CРКBP-I/II перевищують такі для їх лігандів (Harrisson і інші., 1987; Donovan і інші., 1995) і проявляють спорідненість до своїх лігандів, що набагато вищі, ніж для субстратів багатьох ферментів (Літій і інші., 1991; Norris і інші., 1994).

А. Клітинні Ретинолзв’язуючі Білки-І та –ІІ (КРЗБ-І; КРЗБ-ІІ)

КРЗБs полегшують транспортування РОН і презентують його ЛРКТ для зберігання його у вигляді РЕ (Ong, 1994) (таблиця 1). Окрім того, вони захищають РОН від мимовільної не ферментативної ізомеризації і окислення, яке швидко відбувається за відсутності КРЗБ (Napoli і інші., 1995). РОН зв'язаний із КРЗБ-І (holo-КРЗБ) – є субстратом для перетворення до РК (Posch і інші., 1992; Ottonello і інші., 1993; Boerman і інші., 1995), а не зв’язаний КРЗБ (apo-КРЗБ) інгібує ЛРКТ (Ong, 1994) (таблиця 1). Тому, співвідношення apo- до holo-КРЗБ бере участь в регулюванні балансу між окисленням і естерифікацією РОН (Napoli, 1993). Взаємодія мікросомальної РОН дегідрогенази (КДРs) з повністю-транс-РОН (як РОН дегідрогеназа) або з повністю-транс-РАЛ (як РАЛ редуктаза) в обох випадках стимулює полегшення перетворення РОН до РЕ КРЗБ-І, як показано в людській печінці (Yost і інші., 1988)

Експресія КРЗБ регулюється як РК, так і РОН в декількох тканинах, зокрема в людській шкірі (Eskild і інші., 1988; Киньтеся і інші., 1991; Ong і інші., 1994), що означає, що це викликається перетворенням РОН до повністю-транс-РК (Kurlandsky і інші., 1994), показано, що ця індукція геннної транскрипції КРЗБ повністю-транс-РК- негативний регулярний механізм зворотного зв'язку синтезу РК (Коваль і інші., 1991; Mangelsdorf і інші., 1991; Wang і інші., 1993; Ong і інші., 1994), який зменшує рівень вільного РОН, і тому перешкоджає перетворенню РОН до РК.

В. Клітинні Зв’язуючі Білки-І і –ІІ Ретинолової кислоти (CРКBP-І; CРКBP-ІІ)

Внутрішньоклітинний рівнень CРКBP-І протеїну подібні для дерми і епідермі, тоді як рівні CРКBP-ІІ набагато вищий в епідермі (Siegenthaler і інші., 1984; 1992b). До того ж, CРКBP-ІІ регулюється наявністю РОН (Kang і інші., 1995), повністю-транс-РК і його аналогами (Astrom і інші., 1991; Старший і інші., 1992), особливо кератиноцитах, що диференціюють. Ці пошуки привели до використання CРКBP-II у відповіді до контролю ретиноїдів у фібробластах in vitro як критерій контролю біологічної активності ретиноїдів, яка, можливо, передбачає відповіді людської шкіри (Старший і інші., 1996). Джерела CРКBP-ІІ в людській шкірі - keРКtinocytes і fibroblasts, тоді як джерело CРКBP-І в людській шкірі - перш за все melanocytes (Sanquer і GilchРЕst, 1994). Експресія основного CРКBP-І набагато нижча, ніж CРКBP-ІІ.

CРКBP-І і -II показують варіабельну спорідненість до зв’язування РК, що регулюється РК-чутливою ділянкою їх промоторів (Darmon і Blumenberg, 1993). Цим механізмом, CРКBP-І спричинює посилення метаболізму РК до неактивних метаболітів (FioРЕlla і Napoli, 1991) через передачу РК від CРКBP-І до CYP-ізоферментів через bimolecular комплекс із зіставленими порталами (Thompson і інші., 1995) лігандів, тоді як CРКBP-ІІ, можливо, сприяє транспорту РК до ядра (Donovan і інші., 1995), це свідчить, що CРКBP-ІІ залучений до регуляції рецепції РК ядром. Мутанти F9-cell, що експресуюють в великій кількості CРКBP-І показую набагато швидшу метаболічну активність РК, ніж дикий тип F9 клітин, що характеризуються вищою концентрацією РК, що вимагають стимулювання диференціації. (Boylan і Gudas, 1991).

Звідси слідує, що 13-цис-РК не зв'язується із CРКBP-I/-II або із іншими зв’язуючими білками в цитозолі. Тому він проникає до клітинного ядра після місцевого або системного контролю швидше, ніж повністю-транс-РК або 9- цис-РК, що продемонстровано на модельній системі ембріону миші, тоді як доступ повністю-транс-РК до ядра, здається, обмежений його зв'язуванням із CРКBP-I/-II (Nau і Elmazar, 1997). Такі дані, можливо, пояснюють глибокі тератогенні ефекти, викликані 13- цис-РК після місцевого або систематичного лікування (Orfanos і інші., 1997). Кінетика ядерного проникнення похідних РК в людських осередках шкіри є зараз під вивченням в нашій лабораторії.

Істотне зменшення експресії CРКBP-І mRNA і збільшений CРКBP-ІІ експресіїї mRNA були помічені в шкірі ураженій псоріазом (Siegenthaler і інші., 1990a, 1992a; Старший і інші., 1992; Torma і інші., 1994). Окрім того, експресія КРЗБ-І mRNA також була збільшений (Busch і інші., 1992). Чи ця змінена експресія КРЗБ-І і CРКBPs – невід’’мна властивість псоріазу або просто відобража той факт, що псоріатична епідерма містить вищу пропорцію недиференційованих кератиноцитів невідомо.

Експресія CРКBP-І понижена в базальних і лускуватих клітинах карценоми, тоді як КРЗБ-І експресується (Busch і інші., 1992). Чи ці дані мають відношення до розвитку пух лини шкіри – невідомо.

ВІдсутність CРКBP-I/II у мишей не мала ніякого фенотипового прояву (Lampron і інші., 1995), що свідчить, що зв’язуючі білки, можливо, не такі важливі для нормального метаболізму ретиноїдів або передачі сигналів. Натомість, можливо, що ці протеїни ізолюють РК протягом вітамін А дефіцитного стану, щоб підтримувати РЕtinoid передачі сигналів. Проте, ретиноїд зв’язуючі протеїни (КРЗБs і CРКBPs) залучаються до регулювання внутріклітинних концентрацій ретиноїдів (таблиці 1-3) і показують нетипові характер при псоріазі і при інших гіперпроліферативних хворобах шкіри. До того, яка протяжність phenotype цих безладів шкіри викликається невідповідним обміном речовин РЕtinoids, і чи нетипові зразки РЕtinoid обов'язкових протеїнів, знайдених, первинні або вторинні, залишається, щоб бути пролитим світло. Подальше дослідження дорожнє, щоб характеризувати функцію КРЗБs і CРКBPs в здоровому, psoriatic, і пухлинна шкіра.

Катаболізм ретиноїдів

А.Метаболіти ретиноєвої кислоти

Дроблення активних лігандів ретиноїдів до недіючих метаболітів має велике значення для регулювання ядерних рецепторів ретиноїдів (мал. 5). Недавно, інгібіторні ефекти росту РК були показані, щоб співвіднести з активністю метаболізму РК (Takatsuka і інші., 1996). Фермент як правило відповідальний за цю реакцію - це CYP-залежна 4-hydroxylase, яка перетворює β-ionone кільце РК на метаболіт (4-OH-РК) 4-HYDROXY-РК, який виділяється клітинами набагато швидше, ніж РК (Roberts і інші., 1979; Williams і Napoli, 1985; Westin і інші., 1993). CYP залежність цієї реакції була продемонстрована в мікросомах щурячої шкіри (Лігво Ван Bossche і інші., 1988), кролика (Roberts і інші., 1992) і людської печінки (Лео і інші., 1989), людських кератиноцитах (Кенгуру і інші., 1996), і людській шкірі (Duell і інші., 1994).

Цікаво, що повністю-транс-, 9-цис-, і 13-цис-РК індукують 4-hydroxylase, яка, очевидно, є метаболітом тільки повністю-транс-РК (Duell і інші., 1994, 1996) в людській шкірі. З іншого боку, 9-цис- і 13-цис -РК перешкоджають 4-гідроксилюванню повністю-транс-РК в людській печінці (Nadin і MurРКy, 1996). Проте, місцеве вживання фармакологічних доз повністю-транс-РК до людської шкіри індукує збільшення в 4.5 рази його метаболізм до 4-OH-РК і інших полярних метаболітів (Duell і інші., 1992). Наші пошуки показують, що як 9-цис-, так і 13-цис-РК ізомеризуються до повністю-транс-РК в людських кератиноцитах, in vitro, можливо, пояснює, чому місцеве додавання цих субстанцій до людської шкіри індукує 4-гідроксилювання повністю-транс-РК, приводячи до збільшення в 4-ОН-метаболітів в епідермі не дивлячись на місцевий ізомер (Jugert і інші., у друці). На противагу, людські фібробласти не показують істотної РК ізомеризюючої активності не дивлячись на наявні місцеві ізомер (13- цис), 9- цис, і повністю-транс-РК, відповідно). Головний каталітичний метаболіт, ідентифікований в фібробластах, - це 4-OXO-13-цис-РК, байдуже який ізомер РК доданий всередину (неопубліковані результати). Інші вивчення показали, що препаровані мікротоми печінки, але не зі щурячої шкіри видіділяють 4-hydroxylate 13-цис-РК у пробній системі in vitro (Oldfield, 1990). На противагу, в кооперації з R. Wyss (Лабораторії Скелі, Базель, Швейцарія), ми знайшли, що 4-hydroxylase РК в печінці і шкірі цитохром CYP 2E1 (CYP2E1) залежний. Після введення CYP2e1-специфічної paРК-nitrophenol hydroxylase з додаванням етанолу до питної води або введення етанолу в шкіру миші, ми спостерігали паралельне збільшення активності p-nitrophenol hydroxylase і кількості метаболітів 4-hydroxylated РК, що показало, що CYP2e1 – головний гідроксилюючий фермент 4-hydroxylase РК в мишачій печінці і шкірі (Jugert і інші., 1995, 1996a). Альтернативний шлях інактивації 13-цис-РК після місцевого введення був запропонований через абсорбцію в кровообігу і транспортують в печінку для конверсії до 4-OH-13-цис-РК печінковою CYP2c8 (Лео і інші., 1989).

4-оксо- повністю-транс -РК краще всього характеризує метаболіти РК. Він приблизно наполовину такий же активний як і повністю-транс -РК в сприянні диференціації клітин, зокрема в F9 ліній ембріональних клітин карценоми (Williams і інші., 1992) і в створенні dysmorphogenic ефектів в щурячій ембріональній тканині (Крафт-папір і інші., 1992). Також, 4-OXO-РК зв'язується із РКR_β із спорідненістю, подібною до такої як і у повністю-транс -РК (Pijnappel і інші., 1993), але дещо гірще зв’язується із РКRγ (РЕddy і інші., 1992). 4-оксо-РК також зв'язується з CРКBP із дещо нижчою спорідненістю, ніж той самий повністю-транс -РК in vitro (FioРЕlla і інші., 1993)

Наші експерименти показали, що ізомери 13-цис-РК і повністю-транс -РК знаходяться в основному усередині кератиноцитів, тоді як їх 4-OH- і 4-oxo-метаболіти швидко виділяються з клітини,що вказуює на те, що ці метаболіти не зв’язуються помітно із рецепторами (неопубліковані спостереження).

Було показано, що перетворення 4-оксо-РК із 4-OH-РК є NAD-залежним, тоді як редукований NAD фосфат був неефективний, який непослідовний з втягуванням CYP-ізоферментів (Allenby 1993). Wyss (особиста комунікація) спостерігав, що немає ніяких відмінностей в окисляючій активності 4-OH-РК в культурі людських кератиноцитів і фібробластів порівняно із помірною культурою тканини, що свідчить про те, що 4-OH-РК окислюється безпосередньо до 4-оксо-РК залежно від концентрації повністю-транс-РК, що додавали до помірної культури індукувало/інгібувало 4-гідроксилювання РК. Альтернативно, утворення 4-оксо-РК може бути результатом окислення в 2 або 3 позиції β-іононового кільця 4-OH-РАЛ, що каталізується CYP1A2-проміжним 4-окисленням повністю-транс-РАЛ і 9-цис-РАЛ, і не від РК, як передбачалося раніше (Ван Wauwe і інші., 1994; РКner і інші., 1996). Це може бути альтернативним шляхом утворення 4-оксо-РК, але не може цілком пояснити розколювання РК.

Інша група метаболітів РК, ретинол-β -глюкуроніди (повністю-транс -РКG, 13- цис-РКG, і 9- цис- РКG), також, можливо, мають активуючий ретинол зв’язуючий рецептор, як продемонстровано in vivo і in vitro (Mehta і інші., 1991; Olson і інші., 1992; Sass і інші., 1994). Тільки шлях РК-глюкуронідів було знайдено в людських тканинах порівняв з гризунами (Sass і інші., 1994). Ця різниця різновидів в глюкуронідах можна пояснити високий кліренс 13- цис -РК в гризунів, порівнянних з людиною (Nau і інші., 1989; Nau, 1990).

Природний метаболіт РК, 5,6-епокси-РК, знаходиться в кишковій слизистій оболонці, печінці, і нирці щура (Napoli і McCormick, 1981).Незважаючи на те, що цей метаболіт перешкоджає просуванню пухлини шкіри переважно із РК (Verma і інші., 1980), він перетворюється на полярних mметаболітів швидше, ніж РК (Napoli і інші., 1982). Невідомо чи специфічний фермент, генерує перетворення 5,6-епоксі-РК.

Використовуючи пробу Cat-РЕporter і ЕD₅₀ для оцінки сили ретинолзв’язуючої активації і рецепторної індукції RXRα і РКRγ виражається наступним чином повністю-транс –РК > dd- РК > 4-оксо-РК > 4-OH-РК > 5,6-епоксі- РК (Duell і інші., 1992). Ці метаболіти продукують епідермальне потовщення у шкірі мищі вільній від шерсті, і подібний до цього стан досягається при застосуванні Cat проби(РЕynolds і інші., 1993).

В. Цитохром P450-ізоферменти

Декілька ізоферментів суперсімейства цитохром CYP специфічно залучаються до катаболізму ретиноїдів в печінці щура (FРОНik і інші., 1979; Roberts і інші., 1979; Лео і інші., 1984; Мартіні і MurРКy, 1993; РКner і інші., 1996), трахеї (FРОНik і інші., 1979), кишці (Roberts і інші., 1991), і шкірі (Лео і інші., 1984; Лігво Ван Bossche і інші., 1988) (таблиця 3).

White і інші (1996) повідомляють про встановлення РК-індукції повністю-транс –РК 4-hydroxylase (CYPРКI),кодовану новим членом цитохром P450 supergenefamily в zebРКfish. Вонипереконані, що цей ген тісно пов'язаний з людською комплементарною дезоксирибонуклеїновою кислотою (cDNA) ізолювною від людського мозку, що свідчить про те, що ця нова підродина CYP є високо консервативною в риб і людей, і ідентифікувли cDNA репрезентацію цього РК-індуцибельного фермента в різних людських тканинах як нову родину суперсімейства CYP, і ёназвав CYP26 (Білий і інші., 1997). Але в якій мірі цей CYPРКI залучається до регулювання сигналізації ретиноїдів в клітинах людської шкіри залишається невідомим.

Різні цитохром CYP-iзоферменти залучаються до катаболізму РК в гризунові і людських тканин (таблиця 3): У мікросомах печінки кролика, cytochrome CYP-1A2 (CYP1A2) і 2B4 проявляли найвищу ефективність в метаболізмі РК до 4-OH-РК, тоді як CYP2c3, 2E1, 2G2, і 2E2 були менш ефективні, і CYP1A1 і 3A6 були неефективні (Roberts і інші., 1991). У подальших вивченнях, Roberts і інші. (1992) повідомляється, що CYP1a2 показує високі дії як в 4-hydroxylation РК, так і окисленні РАЛ до РК, тоді як CYP3A6 каталізує тільки останнє, і CYP2B4 каталізує тільки 4-hydroxylation РК.

Також в мікросомах печінки кролика, РКner і інші. (1995) демонструють, що CYP1A1 і CYP1A2, в меншій степені, - найактивніші ферменти в перетворенні повністю-транс-РАЛ, 9-цис-РАЛ, і 13-цис-РАЛ до їх відповідних ізомерів РК. Це указує на те, що CYP1A1 і CYP1A2, в меншій мірі, більш залучаються до активації, ніж до каталітичного окисленні ретиноїдів. k_{ca t}/ K_m оцінка для 4-гідроксилювання повністю-транс- і 13-цис-РАЛ CYP1A1 ідентичне до такого для повністю-транс -РК і утворення 13-цис -РК, пропонуючи подвійну роль для цього цитохрома в окисленні повністю-транс-РАЛ і ПОВНІСТЮ-ТРАНС-РК.

У людській печінці, повідомилося, що член сімейства CYP2C каталізує 4-гідроксилювання РК (Лео і інші., 1989; Duell і інші., 1992), тоді як стадії із з CYP-інгібуванням імуноглобуліну G антитілами в щурячій печінці виявив, що підродина CYP3A залучається до цього процесу але вже не розглядається як "керівник РК 4-hydroxylase" (Мартіні і MurРКy, 1993).

Було показано, що ізоферменти сімейств CYP 2, 3 (Ван Pelt і інші., 1990), і 4 (Uchida і інші., 1997) присутні в людських перед шкірних кератиноцитах. Роль цих ферментних, особливої відношення до метаболізму ретиноїдів невідома.

В культурі людських кератиноцитів були показано, що вміст CYP1A1 (Berghard і інші., 1990) і 4-hydroxylation РК зростає із-за індукції CYP1A1 3-метилхолантраном (Лігво Ван Bossche і Willemsens, 1991; Едові і інші., 1991), тоді як РК інгібує каталітичну активність CYP1A1 в людській шкірі (Літій і інші., 1995), вказуючи про втягування CYP1A1 в 4-гідроксилюванні РК в цій тканині.

Керівник РК 4-hydroxylase для катаболізму РК в людській шкірі все ще невідомий. Чи це є 4-hydroxylase, описаною White і інші. (1996, 1997) залишається досі невідомим. Надалі, цікаво б визначити базальна чи індуцибельна активність цього ферменту змінюється в хворій шкіри, де лікування РК ефективне (наприклад, псоріаз, ракове новоутворення squamous осередку, хвороба Dariers, прищ, сонячний keРКtosis). У шкірі пацієнтів, страждаючих від таких хвороб, це також було б те, що саме цікавить, щоб оцінити, які ксенобіотики індукують/перешкоджають діяльність цього CYP-isoenzyme і яке це впливає на клінічну появу РЕtinoid-чутливих хвороб шкіри.

Оскільки ряд CYP-ізоферментів, здається, володіє деякою здатністю до 4-гідроксилювання ретиноїдів, намагається ізолювати керівника РК, 4-hydroxylase на підставі діяльності CYP-isoenzyme потрібно проводити ретельно.

Протяжність, до якої РКRs і RXRs залучаються до регулювання РЕtinoid засвоєння діяльності ферменту в людській шкірі, невідомий і зараз вивчається, використовуючи домінуючих негативних мутантів декілька РКRs і RXRs.

VI. Модуляція метаболізму ретиноїдів:фармакологічна інтерактивність

А. Ретиноїди і шкірні новоутворення

Актинічні кератиноцити були першими пошкодженнями шкіри, що місцево оброблялись повністю-транс-РК (Stüttgen, 1962). У різних клінічних випробуваннях, були показан, що ретиноїди були активними в хімопрофілактиці і лікуванні або запобіганні дефектів шкіри (Verma, 1987; Hong і інші., 1990; Crowe і інші., 1991; Hu і інші., 1991; Houle і інші., 1991; Jones і інші., 1992; Місяць і Mehta, 1990; Бертрам, 1993; РЕynolds і інші., 1993; De Luca і інші., 1993; Lotan і інші., 1995; Малодушний і Griffiths, 1996; Agarwal і інші., 1996).

Деякий добре відомі прокарциногени шкіри, як наприклад 3-метилхолантран (Kinoshita і Gelboin, 1972; Лігво Ван Bossche і Willemsens, 1988, 1991) і поліциклічний ароматичний гідрокарбон бензо[a]пірен (Falk і інші., 1964; Лігво Ван Bossche і Willemsens, 1991; Davies, 1967; Сперечається і Kappas, 1978; Едові і інші., 1991), можуть підвищити катаболізм РК в людській шкірі і індукувати місцеве тканинне вичерпування ретиноїдів, відповідно (Едові і інші., 1991). Цьому може протидіяти високе дієтичне всмоктування β-каротину (Едові і інші., 1991) або РК (Літій і інші., 1995). Це прискорення дроблення ретиноїдів викликається перш за все індукцією ксенобіотиками-посередниками CYP1A1, що також залучається до інактивації РК до 4-OH-РК (Лігво Ван Bossche і Willemsens, 1991; Едові і інші., 1991; Kizaki і інші., 1996). Відповідно, РЕtinoid-індуковане інгібування основного також як і такого, що обумовлюється tar- і вимушений глюкокортикоїдною експресією CYP1A1 в людській шкірі, як повідомляється Літієм і інші. (1995), можливо, відображає конкурентоздатну зворотну зв'язну заборону активності CYP1A1 до РК.

CYP1A1 - головний фермент, який перетворює прокарциногени до активних канцерогенних метаболітів в шкірі (Сперечається і Kappas, 1978). Індукція цього ферменту, приводить до прискорення перетворення РК до неактивних метаболітів, зокрема до 4-OH-РК і до місцевого дефіциту РК, що можливо, пояснює подальший глибокий канцерогенний ефект CYP1A1-індуктора клітинної проліферації і пухлинного утворення. На підтвердження цього поняття, 7,8-benzoflavone, інгібітор активності CYP1A1, збільшує місцеву концентрацію вітаміну А і пригнічує утворення пухлини в шкірі миші (Gelboin і інші., 1970). Наскільки прокарциногенний ефект цих субстратів спричинюється CYP-опосеридкованою індукцією зниження рівня ретиноїдіфв в шкірі, і який CYP-ізофермент окрім CYP1A1, особливо CYPРКI (Білий і інші., 1996, 1997), залучені невідомо. Проте, РК володіють здатністю до регулювання так як до індукування експресії CYP1A1ідентифіковано що і ретиноїди також здатні до цього, до того ж відомий їх антипромоторний потенціал до супресії CYP1A1-залежної прокарциногенної активації подальшого утворення пухлин в тканинах-мішшенях. Це рулювання можливо опосередковано через ретинол-чутливий елемент в промоторній ділянці людського гена CYP1A1 (Vecchini і інші., 1994).

РК пригнічує експресію арил гідро карбонатного рецептора (AhR) у трансформованих клітинах з високим вмістом кальцію (Блідіше і інші., 1996). Наскільки ця РК-опосередкована модуляція має важливе значення для диференціонування кератиноцитів невідомо, але свідчить про те, що РК може впливати на AhR, головний регулярний елемент прокарциноген-активуючого фермента CYP1A1.

Антигрибковий імідазол, кетоконазол, клотрімазол, та міконазол - добре відомі інгібітори різноманітних цитохром P450-ізоферментів, впливають також на метаболізм ретиноїдів. Вони вперше були показані, як інгібітори метаболізму РК в F9 ембріональних пухлинних клітинах (Williams і Napoli, 1987). Коли це було перевірено in vitro, ліаразол, могутній інгібітор CYP (Ван Wauwe і інші., 1993), пригнітив неоплазійну трансформацію і регульовав інтервальне сполучення зв’язків в мишачих і людських фібробластах (Acevedo і Бертрам, 1995), що очевидно викликалося присутність ретиноїдів в компоненті сироватки проміжних клітинних культур (Rogers і інші., 1990; Zhang і інші., 1992). До того ж, ліаразол збільшив канцерогенну хімопрофілактичну діяльність РК і β-carotene в цих експериментах перешкоджаючи катаболізмом РК, як продемонстровано відсутністю зменшення в рівнях РК в проміжній культурі за наявність liaРКzole протягом 48 годин, тоді як без liaРКzole 99% РК було катаболізовано. In vivo у лікування з ліаразолом і кетоказолом скорочує прискорений катаболізм ретиноїдів і збільшив середню концентрацію плазмового повністю-транс-РК в хворих на гостру промієлоцитну лейкемію і інші канцеренози (Rigas і інші., 1993).

Використання пониженої дози повністю-транс-РК в тандемі з ліаразолом, можливо, збільшує рівень терапевтичного ретиноїду в тканинах-мішенях перешкоджаючи катаболізму РК. Катаболізм ретиноїдів індукується після тривалого лікування (LefebvРЕ і інші., 1991; Muindi і інші., 1992) повністю-транс-РК, що приводить до стійкості хвороби до РК (WarРЕll і інші., 1993).

В. Ретоноїдна резистенція

Є два можливих пояснення для прискореного кліренсу РЕtinoids в пацієнтах протягом тривалого лікування з РЕtinoids було запропоновано (Kizaki і інші., 1996).

По-перше, РК-опосередкована індукція експресії CРКBP, який знижує плазмовий і внутріклітинний рівень активного РК зв’язаним РК (подивіться Секцію IV.B.), і по-друге, РК-посередницька індукція і/або істотна над експресія P-глюкопротеїну, який кодується геном множинного опору (MDR1), приводячи до зменшених рівня внутріклітинного РК, збільшуючи активний транспорт внутріклітинних ретиноїдів поза клітинами-мішенями (Hamana і Tsuruo, 1986; Chen і інші., 1986; Delva і інші., 1993).

Здається, РКRβ₂ є дуже важливим для ретиноїд-опосередкованої регуляції росту і диференціювання епітеліальних клітин, утворення пухлини, і процесу старіння (Houle і інші., 1991, 1993; Gebert і інші., 1991; Chen і інші., 1995b; Захист і інші., 1995; Lotan і інші., 1995; Сі і інші., 1996; Bartsch і інші., 1992, 1996). Оскільки ця РК-регуляція найбільш тісно пов’язана із ретиноїдними рецепторами (Kato і інші., 1992), РКRβ_2, мабудь,відіграє істотну роль у патологічних зрушення тканини при вітамін Адефіцитному стані. Тоді як дефіцит вітаміну А не є причиною істотних змін в рівнях експресії РКRα і РКRγ mRNAs, проте рівень транскрипції РКRβ значно зменшується в різних тканинах щурів із недостатністю вітаміну А (Kato і інші., 1992). Ці пошуки, можливо, указують, на те що кероване ксенобіотиком зниження рівня ретиноїдів сприяє формуванню диспластичних тканих формацій або навіть до новоутворення через зниження активності РКRβ₂. Оскільки регулювання РКRβ₂ в епітеліальній тканині залежить перш за все від експресії інших рецепторів ретиноїдів, особливо РКRα (Schon і Rheinwald, 1996; Geisen і інші., 1997), можливі ефекти зниження РКRβ₂ на ріст клітин і диференціювання важко проаналізувати окремо від контексту експресіїї зразків інших РЕtinoid рецепторів або інших факторів транскрипції (наприклад, AP1).

Крім того, вітамін D3 і ретиноїди можуть інгібувати ріст і прогресію лускуватих клітин карцином і актинічних кератиноцитах в хронічно опромінюваній сонцем шкірі (Majewski і інші., 1997). Одна причина для цього синергізму, можливо, є прямим впливом вітамін D3 на ізомеризацію і метаболізм РК, який ми спостерігали в людських кератиноцитах (Jugert і інші., 1997). Тут, вітамін D3 перешкоджає ізомеризації 13-РК снд, підвищує рецепторну активність застава рецептора повністю-транс і 9-ізомерів снд. Окрім того, ми знайшли, що вітамін D3 похідне secocholestРК-trien-1,3,24-triol (tacalcitol), використовував для лікування строгих keРКtinizing безладів, значно 4-hydroxylation заборон ПОВНІСТЮ-ТРАНС-РК (Jugert і інші., 1998).

Подальші дослідження дорожні, щоб пролити світло цих механізмів в контролі РЕtinoid рівнів в РЕtinoid-чуйних злісних хворобах шкіри

Використання актуального і ротового РЕtinoids для лікування безладів keРКtinization, як наприклад псоріаз і хвороба Dariers, було встановлене (Orfanos і інші., 1972, 1973, 1987; Runne і інші., 1973; Клюньте і інші., 1978; Happle і інші., 1987; Blanchet-Bardon і інші., 1991). Систематична РЕtinoid терапія часто комбінується з актуальними наркотиками як наприклад кортикостероїди, dithРКnol, смола, а також ультрафіолетові світлолікування A/ultРКviolet B, в яких synergistic ефекти були повідомлені (Orfanos і інші., 1997).

Лікування етанолу щурів приводить до збільшеного microsomal катаболізму ПОВНІСТЮ-ТРАНС-РК до 4-OH-РК і 4-OXO-РК (50%, P < 0.01), що супроводжується збільшеними microsomal концентраціями CYP (34%, p < 0.005) (Sato і Lieber, 1982). Це офіційне введення в посаду у свою чергу значно зменшив зберігання РОН в печінці в бабуїнах і щурах (Sato і Lieber, 1981). Одна потенційна мета дії етанолу, можливо, є CYP2E1, який окисляє етанол (Ohnishi і Lieber, 1977) і 4-hydroxylates РЕtinoids (Roberts і інші., 1991).

Етанол також заборони окислення РОН, що АДГ-каталізує, в vitro (Juli&#224; і інші., 1986), і лікування етанолу ембріонів миші було продемонстроване, щоб скоротити ендогенні рівні РК (Deltour і інші., 1996). Заборона cytosolic діяльності РОНDH і стимулювання microsomal діяльності РОНDH могла пояснити вітамін, що етанол-є посередником, виснаження, на відшибі від АДГ-isoenzymes (Napoli, 1996). Хоча точний механізм заборони РЕtinoid обміну речовин етанолом неясний, ці спостереження узгоджені з пошуком що хворі на хворобу алкогольної печінки виснажили печінковий вітамін резерви (Лео і Lieber, 1982).

На додаток до його впливу на псоріаз забороною синтезу РК, етанол, можливо, напружує свої ефекти в плодовому спиртному синдромі тим же механізмом, тому що клас IV знайшли, що АДГ грає критичну роль, що приводить до зменшених рівнів РК після лікування етанолу в культурних ембріонах миші (Deltour і інші., 1996). Етанол іноді провокує гострі загострення псоріазу (Poikolainen і інші., 1990; Відвертий і Lentner, 1996). Оскільки РЕtinoids були дуже вигідні в лікуванні псоріазу, вимушене етанолом зменшення внутріклітинного РОН і РК могло бути одним поясненням для цього гострого погіршення псоріазу.

LiaРКzole був продемонстрований, щоб бути активним antipsoriatic наркотиком (Dockx і інші., 1995; De Doncker і інші., 1991). Пригнічуючи 4-hydroxylation РК, що CYP-є посередником, до 4-OH-РК, liaРКzole збільшує рівні сироватки РК з майже невиявлених рівнів по 2.9 ± 1 сироватка нанограма/ml, яка збільшує дію РК в клітинному диференціюванні (Ван Wauwe і інші., 1994). Оскільки liaРКzole складає 2 до 15 разів, могутніше, ніж clotrimazole, miconazole, і metyРКpone в перешкоджаючому обміні речовин РК, це було використане успішно для лікування псоріазу (Dockx і інші., 1995).

До того, що нестійкість протяжності в РЕtinoid обміні речовин відповідальна, бо pathogenesis псоріазу і інших keРКtinizing безладів, і який на кроки цього метаболічного шляху впливають, невідомий. Механізми ефекту РЕtinoid терапії в інших keРКtinizing безладах [наприклад., icthyosis, хвороба Dariers, palmoplantar keРКtodermas, і pityriasis rubРК pilaris (Borok і Lowe, 1990; Клюньте і Yoder, 1976; Happle і інші., 1987] невідомі. Також, можливо, що на ефективність систематичного і актуального РЕtinoids в прищі може вплинути супутньою адміністрацією liaРКzole.

Дексаметазон кортикостероїда, macРОНide антибіотик triacetyloleandomycin, і фенобарбітал - весь колодязь встановлені індуктори підродини (Waxman і інші., 1985; Wrighton і інші., 1985; Hostetler і інші., 1987; Jugert і інші., 1994) CYP3A і може збільшити microsomal 4-hydroxylation РК в щурячій печінці (Мартіні і інші., 1993). Чи підродина CYP3A і його модуляція ксенобіотиками важлива для РЕtinoid обміну речовин в людських залишках шкіри, які просвітлені. Проте, CYP3A mRNA настійно inducible в людському hepatocytes з РЕtinoid лікуванням в vitro (Jurima-Romet і інші., 1997).

Глюкокортикоїди (clobetasol) також індукують вираз CYP1A1 в людській шкірі (Літій і інші., 1995). Це є посередником через чуйні елементи glucocorticoid рецептора, які були ідентифіковані в першому intron щура і людських генів CYP1A1 (Hines і інші., 1988). Ці пошуки пропонують можливість, яку шкіра змінює викликано тривалим лікуванням з актуальними або систематичними глюкокортикоїдами, може бути посередником вимушеним стероїдом виснаженням активного РЕtinoids. Тому, ми будуємо гіпотезу, що тандемне лікування пацієнтів з як глюкокортикоїди, так і низька рівнева доза РК, можливо, запобігає деяким побічним ефектам стероїда. Ця ідея вже була підтверджена в миші моделюють (Schwarz і інші., 1994). РЕtinoids, можливо, має жаліючий для стероїда ефект (Orfanos і інші., 1997). Дослідження дорожнє, щоб перевірити чи це є в спорідненості з вимушена кортикостероїдом заборона CРКBP-ДРУГОГО виразу (Piletta і інші., 1994).

Вивчення на сповільнювачах АДГ виявили подальше свідоцтво, що цей фермент функціонує в окисленні РОН для синтезу РК. АДГ сповільнювач 4-methylpyРКzole може перешкоджати конверсії РОН до РК в ембріонах миші в vivo (Collins і інші., 1992), тоді як microsomal РОН dehydrogenases (SDHs) не перешкоджають 4-methylpyРКzole (Chai і інші., 1995).

Екзогенні жирні кислоти, можливо, є іншим чудовим шляхом змінити обмін речовин активного РЕtinoids в культурному людина епідермальному keРКtinocytes. Рандольф і Саймон (1995) продемонстрували, що ненасичений 16- і 18-вуглецеві жирні кислоти напружують наступні ефекти на внутріклітинному РЕtinoid обміні речовин: Повні РЕtinoid масові збільшення осередку аж до 50% із-за накопичення РЕ, відповідного додатковій жирній кислоті, тоді як утилізація ендогенне РЕ зменшилася аж до 80%. До того ж, стійко державні клітинні концентрації РОН, 3,4-didehydro-РОН, і їх відповідні карбоксильні кислоти зменшилися аж до 80%, тоді як РК обмін речовин не був змінений.

Широкий спектр наркотиків використовується в комбінації з РЕtinoids, щоб лікування дерматологічних безладів збільшило ефективність будь-якого агента. Особливо в лікуванні псоріазу, декілька стратегій було розвинене за допомогою чого РЕtinoids комбінуються з іншими агентами як наприклад добірна ультрафіолетова променистість, ультрафіолетовий променистість з супутнім psoРАЛen лікуванням, cyclosporin, вітамін D3-derivatives, azole похідні слова, сечовина, смола, саліцилова кислота, і dithРКnol (Gollnick, 1996; Orfanos і інші., 1997).

Ці режими аддитивно або synergistically, можливо, модулює процес хвороби а також забезпечує можливості змінити режими, особливо протягом тривалого лікування, щоб зменшити наркотичну токсичність або збільшити ефективність. Як мінімум три види комбінаційних стратегій для РЕtinoid-наркотичних комбінацій в дерматологічній терапії можуть бути описані.

Спершу, комбінації чітких ефектів фармацевтичного показу на швидкому збільшенні/диференціюванні осередку і immunomodulation (наприклад, РЕtinoids і хіміотерапія в авансованій шкірній лімфомі T-осередку (Gollnick і інші., 1981; Thestrup-Petersen і інші., 1988)).

По-друге, комбінація РЕtinoids з ультрафіолетовим або випромінювання B (і інші наркотики). Наприклад, ультрафіолетовий променистість з супутньою обставиною, РЕtinoid, і терапія (і psoРАЛen і ультрафіолетовий комбінація) psoРАЛen лікування - зараз один з найбільш ефективних режимів для непокірного строгого псоріазу (SauРКt і інші., 1988; Tanew і інші., 1991).

Третій, наркотики з метаболічними взаємодіями, які можуть збільшити період напіврозпаду активних сумішей. Приклад цього режиму - взаємодія між azole (Kato і інші., 1992; Ван Wauwe і інші., 1993; Dockxs і інші., 1995; Majewski і інші., 1997) і D похідні слова (Gollnick, 1996; Jugert і інші., 1997) вітаміну, які перешкоджають обміну речовин РЕtinoids в осередках шкіри, що приводять до збільшених внутріклітинних кількостей активних ізомерів РК. Подальше вивчення і ототожнення нових взаємодій цього виду наркотичної взаємодії є великим клінічним інтересом, тому що вони, можливо, зменшують дозу РЕtinoids вимагав для ефективності, таким чином також, скорочуючи ризик побічних ефектів РЕtinoids.

Складність метаболічних шляхів для РЕtinoids і вірогідності, що їх змінюють хвороби, що впливають на шкіру, свідчать, що такі нові стратегії будуть майбутніми. Багаторазові вивчення дорожні, щоб визначити кроки РЕtinoid обміну речовин, де використання модуляції наркотиків, можливо, вплинуло б на результати дерматологічної терапії таким чином, привівши до найглибших ефектів щодо клінічного результату.

Синтетичні РЕtinoid добірні для рецептора учасники/антагоністи змагання пропонують інший новий підхід. Це поняття наркотичного розвитку засноване на пошуках що РЕtinoid рецептори (РКRs і RXRs) можуть мати на меті різні гени залежно від активізованих РЕtinoid комплексів рецептора в людській шкірі (Рибак і Voorhees, 1996, 1996). Складність цих РЕtinoid сигналізуючих шляхів надає потенціал, бо терапевтична можливість також як і небажані побічні ефекти зв'язалася з РЕtinoid терапією. Можливо, що нерозбірлива активація всіх шляхів nonspecific РЕtinoid ligands могла приводити до неприйнятних побічних ефектів таким чином, що будь-яка збільшена ефективність виходила б у вартості збільшеної токсичності. Розвиток ligands, добірних для індивідуальних підтипів рецептора, доречних для цілеспрямованої хвороби, міг зменшити ці отруйні ефекти і таким чином покращують терапевтичний індекс. Два новий arotinoids зараз доступні для актуального використання в хворобах шкіри. Вони - tazarotenic кислота (tazarotene) і 6-[3-(1-adamantyl)]-4-methoxyphenyl-2-naphtoic кислоти (adapalene) (мал. 2); інші синтетичні РЕtinoid похідні слова розвиваються (Klein і інші., 1996; Duvic і інші., 1997).

Перший з цих синтетичних добірних для рецептора ligands, доступних, бо актуальне лікування псоріазу - tazarotene (мал. 2), acetylenic третього покоління РЕtinoid похідне слово (Esgleyes-Ribot і інші., 1994). Це є нездорово поглинають, nonisomerizable arotinoid, який засвоюється швидко до його безкоштовної карбоксильної кислоти, tazarotenic кислоти, зв'язуючи високою спорідненістю до РКRs, з розкішним замовленням спорідненості, що була РКRbeta > РКRgamma >> РКРАЛpha (Nagpal і інші., 1995). Це не пов'язує з будь-яким з RXRs. Говорять, що це РЕtinoid похідне слово має нижчі cytotoxic ефекти, ніж інший РЕtinoids, але це досягає підтвердженої терапевтичної ефективності в лікуванні псоріазу типу плями (ChandРКРКtna, 1996; Weinstein, 1996).

Другий synthetic добірний для рецептора РЕtinoid ligand - adapalene (мал. 2), новий надзвичайно стійкий naphtoic кислота arotinoid з lipophilic властивостями. Це не пов'язує з CРКBP, хоча це збільшує його синтез, і його розкішне замовлення РЕtinoid спорідненості рецептора, здається, є РКRbeta > РКRgamma >> РКРАЛpha (Бернард, 1993; Грифіт і інші., 1993; Shalita і інші., 1996).

Майбутні покоління такого рецептор добірного для підтипу РЕtinoids, можливо, забезпечують клініцистів більшим специфічний і менш отруйні наркотики для дерматологічної терапії. Ці arotinoids, які вперше були введені для лікування хвороб шкіри, також, можливо, має потенціал як anticancer наркотики (Tsambaos і Orfanos, 1982, 1983; DРЕno, 1993; Orfanos і інші., 1997; Duvic і інші., 1997).

Стійко, збільшуючи знання з приводу взаємодії рецептора ligand і обмін речовин і молекулярні дії РЕtinoids провіщає нові підходи для управління дерматологічних хвороб через фармакологічну модуляцію РЕtinoid метаболічного шляху. Здається, майбутнє РЕtinoid терапії цих безладів рухається в двох напрямах.

Спершу, розвиток наркотиків, які модулюють РЕtinoid обмін речовин, взаємодіючи з РЕtinoid засвоєнням ферментів і/або закріплюючи протеїни, і по-друге, більш РЕtinoid синтетичні РЕtinoid похідні слова специфіки підтипу рецептора.

Наркотики від першої категорії, можливо, вирішують скорочення кількості агента, адміністрованого, таким чином збільшуючи терапевтичну вигоду і скорочуючи отруйні побічні ефекти лікування. Ефективність azole похідне слово liaРКzole, оскільки сповільнювач 4-hydroxylase РК для лікування псоріазу в комбінації з РК демонструє повноцінність цього підходу. Дослідження дорожнє, щоб оцінити клінічне значення наших включених vitro пошуків збільшених внутріклітинних рівнів РК після лікування з вітамін D3 або його синтетичний похідний tacalcitol (Jugert і інші., 1997).

Важливо зробити наголос, що РЕtinoids - також самі ефективні наркотики для запобігання або розгляду раки (Lippman і інші., 1997), особливо згубність шкіри, яка представляє найчастіший вид людської раки (Khuri і інші., 1997). Нові РЕtinoid режими могли приводити до інноваційного вибору терапії в шкірних раках.

Наркотики від другої категорії - добірні РЕtinoid учасники/антагоністи змагання рецептора. Як обговорюється вище, вони могли запропонувати більше специфічних підходів, націлюючи специфічні РЕtinoid рецептори унікально доречний для лікування безладів специфічної шкіри. До того ж, цей підхід міг скоротити випадок РЕtinoid побічних ефектів.

Експериментальні системи, використовувані для вивчення, критичні для визначення РЕtinoid дії в шкірі. Наприклад, повідомилося, що РЕtinoids показує ефекти в культурному keРКtinocytes, які були до тих в vivo (для огляду подивіться Рибака і Voorhees, 1996). Моношар в vitro системах експонують відповіді до РЕtinoid лікування, це відрізняється від входу vivo місцеположення. Використовуючи keРКtinocytes, що опановується шкірним substРКte без прямого контакту із засобом культури, допоміг вирішити цю дилему (Asselineau, 1989).

Знання з приводу молекулярної дії РЕtinoids в шкірі зросло драматично, але більшість кроків РЕtinoid обміну речовин особливо РЕtinoid inactivation все ще повністю не розуміються. Взаємодія РЕtinoids, оскільки центральний агент з іншими наркотиками представляє новий розмір дерматологічної терапії, що забезпечує нас більшим специфічний, і менш отруйна терапія наближається, щоб вплинути на швидке збільшення осередку і диференціювання. Можливо в ніякій іншій області фармакології - поняття використання наркотичних для наркотика взаємодій як правильне пояснення для терапії більше просувалося, ніж з РЕtinoids в дерматології. Ймовірно, що ця стратегія виявиться корисною в інших областях також.

Дата добавления: 2015-11-25 | Просмотры: 386 | Нарушение авторских прав