Оборудование:
1. Эритротест - цоликлоны Анти-А, Анти-В, Анти – АВ
2. Сухие чистые пипетки
3. Изотонический раствор хлорида натрия 0,9 %.
4. Сухая тарелка.
5. Скарификаторы
6. Стерильные марлевые шарики
7. Спирт
8. Стеклянные палочки
Ход работы:
1. Нанесите на планшет или пластину индивидуальными пипетками Цоликлоны Анти – А, Анти – В и Анти АВ по одной большой капле (0,1мл.) под соответствующими надписями.
2. Рядом с каплями антител нанесите по одной маленькой капле исследуемой крови (0,01-0,03мл.)
3. Смешайте кровь с реагентом.
4. Наблюдайте за ходом реакции с Цоликлонами визуально при лёгком покачивании пластины или планшета в течение 3 минут. Агглютинация эритроцитов с Цоликлонами обычно наступает в первые 3-5 сек, но наблюдение следует вести 3 мин. ввиду более позднего появления агглютинации с эритроцитами
5. Результат реакции в каждой капле может быть положительным или отрицательным. Положительный результат выражается в агглютинации (склеивании) эритроцитов. Агглютинаты видны невооруженным глазом в виде мелких красных агрегатов, быстро сливающихся в крупные хлопья. При отрицательной реакции капля остаётся равномерно окрашенной в красный цвет, агглютинаты в ней не обнаруживаются.
6. Интерпретация результатов реакции агглютинации исследуемой крови с Цоликлонами представлена в таблице.
Результат реакции* с Цоликлоном:
Анти-А Анти-В Анти-АВ
| Исследуемая кровь принадлежит к группе**
| -
| -
| -
| 0(I)
| +
| -
| +
| А(II)
| -
| +
| +
| В(III)
| +
| +
| +
| АВ(IV)
|
* Знаком плюс (+) обозначено наличие агглютинации, знаком минус (-) – отсутствие агглютинации.
** Окончательно АВО принадлежность устанавливается по результатам перекрёстного определения: антигенов А и В на эритроцитах и изогемагглютининов в сыворотке.
Определение резус–фактора – Rh0 (D) реакцией конглютинации с применением 10 % раствора желатина.
1. В 2 пробирки вводят по одной капле (0,05 мл.) исследуемых эритроцитов и по 2 капли 10 % раствора желатина, подогретого до разжижения в тёплой воде (46 – 480 С).
2. В одну из этих пробирок к смеси эритроцитов и желатина добавляют 2 капли сыворотки анти-резус. В другую пробирку эту сыворотку не добавляют; она служит контролем для исключения возможности проявления аутоагглютинации испытуемых эритроцитов.
3. Кроме того, для контроля параллельно исследуют стандартные резус-положительные эритроциты той же группы или группы 0(I) и резус-отрицательные эритроциты, одногруппные с испытуемой кровью.
4. Содержимое пробирок перемешивают путём встряхивания и помещают пробирки в водяную баню при 46-480 С на 10 мин. или в суховоздушный термостат при той же температуре на 30 мин.
5. После инкубации в пробирки добавляют по 5-8 мл. изотонического раствора хлорида натрия, перемешивают содержимое путём перевёртывания пробирок 1-2 раза и оценивают результат.
Дата добавления: 2015-09-27 | Просмотры: 344 | Нарушение авторских прав
|