АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Практическая работа.

Задание 1. Изучить патоморфологические изменения красной крови от животных с экспериментальной постгеморрагической и гемолитической анемией. Ознакомиться с методами приготовления и окраски мазков крови.

Опыт 1. Изучение мазка красной крови у кролика с острой постгеморрагической анемией

Методика опыта. Берут кролика с острой постгеморрагической анемией, которую получают путем кровопускания (1,5%-1,8 % от веса тела) за 4-7 дней до опыта. Патоморфологию клеток красной крови изучают на мазках, кровь для которых берут из краевой вены уха.

Приготовление мазка. Для приготовление мазка каплю крови помещают на предметное стекло, взятое между большим и указательным пальцем левой руки (на 1-1,5 см от края стекла). В правую руку берут предметное стекло со шлифованными краями и узкий край его ставят на предметное стекло под углом 45º слева от капли крови. Движением вправо вводят стекло в соприкосновение с кровью так, чтобы капля расплылась по всему краю шлифованного стекла.

Равномерным движением ведут растекшуюся кровь вдоль стекла.

Приготовленный мазок высушивают на воздухе, фиксируют и окрашивают.

Окраска мазка по методу Романовского-Гимза. Мазок окрашивают смесью красителей (кислых и основных). Кислым красителем является эозин, основными - метиленовая синь и азур,

Различные элементы крови имеют сродство к определенным красителям (кислым или основным, или одновременно к тем и другим).

Окраска мазка по методу Романовского-Гимза включает:

1) фиксацию мазка и предварительную окраску красителем Май-Грюнвальд (смесь эозина и метиленовой сини, растаоренная в метиловом спирте);

2) дополнительную окраску красителем Гимзе (водный раствор эозина, метиленовой сини и азура).

Предварительная окраска. Высушенный мазок покрывают слоем красителя Май-Грюнвальд на 2 мин (количество капель считают); добавляют такое же количество капель дистиллированной воды и осторожным покачиванием стекла перемешивают краситель с водой. Предварительная окраска проводится в течение 2 мин. Далее краситель сливают, мазок промывают и высушивают фильтровальной бумагой, после чего производят дополнительную окраску.

Дополнительная окраска. На мазок наносят свежеприготовленный раствор красителя Гимза, который выдерживают на мазке 10-15 мин. После этого краситель сливают, мазок тщательно промывают водой и высушивают, а затем микроскопируют с иммерсией.

Результаты окраски. При предварительной окраске отчетливо окрашиваются все виды зернистости, кроме азурофильной. Ядра клеток окрашиваются слабо, структура их выделяется нечетко.

При дополнительной окраске ядра хорошо прокрашиваются, отчетливо выявляется их структура. В цитоплазме окрашивается и азурофильная зернистость.

При исследовании мазков крови от животных с постгеморрагической анемией, необходимо обратить внимание на морфологию и окрашиваемость эритроцитов. Найтив мазке анизоцитоз, пойкилоцитоз, полихроматофильные эритроциты.

В протоколе работы должны быть зарисованы изменения красной крови наблюдающиеся при постгеморрагической анемии и сделаны выводы.

Острая постгеморрагическая анемия через 4-7 дней после кровопотери характеризуется присутствием в мазках крови незрелых (регенеративных) форм эритроцитов, появлением полихроматофилов - 1-2 и более в каждом поле зрения; после обильной кровопотери могут появляться единичные нормобласты, эритроциты сбазофильной зернистостью и с тельцами Жолли. Появляется умеренный анизоцитоз – повышено содержание микроцитов и макроцитов. СДЭ (средний диаметр эритроцитов) нормален или понижен. Пойкилоцитоз и анизохромия выражены в небольшой степени.

Острая постгеморрагическая анемия характеризуется увеличением числа ретикулоцитов (до 3-5 и более в каждом поле зрения), умеренным анизоцитозом (увеличением макро- и микроцитов), нормальным или пониженным СДЭ.

Хроническая постгеморрагическая анемия (окраска азур-//-эозином), характеризуется присутствием гипохромных эритроцитов (гипохромия), наличием небольшого анизоцитоза (преобладают нормо- и микроциты) и пойкилоцитоза, появлением изредка полихроматофилов, единичных нормобластов. Сходная картина крови наблюдается при железодефицитных анемиях.

Опыт 2. Изучение мазка красной крови у крысы с гемолитической анемией.

Методика_опыта. Берут крысу с гемолитической анемией, которую получают путем удаления селезенки за 7 дней после операции, обусловленную бартонеллами, усиленно размножающимися при спленэктомии.

Изучение морфологических особенностей клеток красной крови ведут в мазках, кровь для которых берут. из кончика хвоста.

Окраску мазков проводят как в предыдущих опытах.

В мазках крови необходимо найти ядерные формы эритроцитов (нормобласты, эритробласты разного вида) и дифференцировать их. В протоколе работы должны быть зарисованы изменения красной крови, наблюдающиеся при гемолитической анемии и сделаны выводы.

Опыт № 3. Изучение функционального состояния костного мозга у животных с экспериментальной анемией.

Цель опыта. Изучить функциональное состоят костного мозга у животных с экспериментальной (постгеморрагической или гемолитической) анемией путем приготовления и подсчета мазка крови на ретикулоциты.

Ретикулоциты - молодые эритроциты. Нормальное содержание ретикулоцитов в крови у взрослого человека - 0,2-1%, у новорожденных детей 2,8-6%, у шестимесячных детей - 1,4%, у годовалых детей - 0,9 %.

В условиях стимуляции эритропоэза при анемиях количество их в периферической крови увеличивается. Если количество их не увеличивается, уменьшается или наблюдается полное их отсутствие свидетельствует об угнетении или прекращении эритропоэза.

Методика опыта. Изучение количества ретикулоцитов проводится у животных с постгеморрагической или гемолитической анемией.

Модель постгеморрагической анемии получают путем кровопускания. Гемолитическую анемию получают путем удаления селезенки (у белых крыс) или путем введения фенилгидразина (у собаки). Солянокислый фенилгидразин (4% 20,0-40,0) вводят внутривенно одно-двукратно на 3-5 дней до занятия.

Для выявления ретикулоцитов используется прижизненная окраска их в нефиксированном влажном мазке крови или в пробирке.

При окраске на предметном стекле, на него предварительно наносят тонкий слой окраски бриллиант крезилблау (1,2% р-р в абсолютном спирте). На подготовленном стекле делают обычный мазок крови и быстро помещают его во влажную камеру (чашка Петри с влажной фильтровальной бумагой) на 10 мин. За это время сухая краска, предварительно нанесенная на стело, прокрашивает эритроциты, ocобенно их базофильный компонент, который содержится в молодых эритроцитах. Базофильные субстанции выпадают в виде сеточки (ретикулума) или зерен. После 10 мин. окрашивания во влажной камере, мазок вынимают и высушивают на воздухе, а затем микроскопируют при иммерсионном увеличении. При данном методе окраски эритроциты окрашиваются в зеленый цвет, а зернисто-нитчатая субстанция - в темно-синий.

При окраске в серологической пробирке, в последнюю, предварительно отмеряют пипеткой для СОЭ 25 делений краски (1% р-р бриллиант крезилблау на физиологическом растворе), а затем 35 делений крови. Тщательно перемешивают и оставляют на 25 мин. После этого из смеси крови и краски делают мазки на предметных стеклах.

Просматривая мазок сосчитываю в ограниченном поле зрении все эритроциты и ретикулоциты. Считают до тех пор, пока не будит сосчитано 1000 эритроцитов и соответствующее им количество ретикулоцитов Количество ретикулоцитов выражают в процентах (%) или в промилях (0/00). Ограничение поля зрения достигается путем вкладывания вырезанной бумажной диафрагмы внутрь окуляра.

В протоколе работы зарисовывают ретикулоциты, приводят цифры подсчета ретикулоцитов и делают заключение об интенсивности эритропоэза у исследуемого животного.

Острая постгеморрагическая анемия (суправитальная окраска), через 4-7 дней после кровопотери характеризуется рядом особенностей. Для нее характерно увеличение количества ретикулоцитов (до 3-5 и более в каждом поле зрения).

Зад ание 2. Изучить патоморфологические изменения красной крови по мазкам больных с анемией.

Опыт 1. Изучение картины крови по мазкам крови и рисункам больного с мегалобластической анемией.

Методика опыта. Берем готовый окрашенный мазок крови от больного мегалобластической анемией.

Микроскопируем под малым, а затем под большим увеличением с иммерсией. Изучаем рисунок крови. Зарисовываем, анализируем, делаем вывод.

Картина крови при мегалобластической анемии характеризуется выраженным анизоцитозом - присутствуют эритроциты большого размера: мегалоциты (11-15 микронов) и макроциты (8,1-10 микронов), наряду с ними имеются микро и нормоциты. СДЭ увеличен. Форма эритроцитов изменена, наряду с круглыми встречаются овальные и грушевидные эритроциты, в основном мегалоциты и макроциты, отличаются более высоким содержанием гемоглобина, т.е. являются гиперхромными. Встречаются в небольшом количестве полихроматофилы и другие регенеративные формы эритроцитов.

Опыт 2. Изучение картины крови по мазкам' крови и рисункам от больного с железодефицитной анемией

Методика опыта. Берем готовый окрашенный мазок крови от больного железодефицитной анемией. Микроскопируем под малым, а затем под большим увеличением с иммерсией. Изучаем рисунок крови с железодефицитной анемией.. Зарисовываем, анализируем, делаем вывод.

Картина крови при железодефицитной анемии характеризуется присутствием гипохромных эритроцитов (гипохромия), наличием небольшого анизоцитоза (преобладают нормо- и микроциты) и пойкилоцитоза.

Опыт 3. Изучение картины крови по мазкам крови от больного с апластической анемией

Методика опыта. Берем готовый окрашенный мазок крови и рисунок от больного с апластической анемией Микроскопируем под малым, а затем под большим увеличением с иммерсией. Изучаем рисунок крови с апластической анемией. Зарисовываем, анализируем, делаем вывод.

Kapтинa крови при апластической анемии характеризуется макроцитозом, нормохромией, снижением ретикулоцитов, гемоглобина, нормальным цветным показателем

Дата добавления: 2015-09-27 | Просмотры: 662 | Нарушение авторских прав