АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Конъюгационное картирование

Когда производится картирование мерозигот типа F^–, образовавшихся при конъюгации с клетками Hfr, полезно знать порядок попадания фланкирующих маркеров в клетку F^–. Картирование выполняется посредством отбора по дистальному маркеру С (рис. 8.14). Эта процедура гарантирует участие в конъюгации всех интересующих нас маркеров. Частота появления неселективных маркеров у отобранных рекомбинантов используется для определения расстояния на карте от неселективного маркера до С, как это изображено на рис. 8.14. Например, тесно сцепленные мутации, влияющие на способность утилизировать лактозу в качестве источника углерода (lac Y, lac Z и lac I) в реципрокных скрещиваниях 6 и 7 передаются определенным штаммом Hfr после маркера pro ⁺, но до маркера ade ⁺.

Скрещивание 6: Hfr, Y^–_R Z ⁺₄ I ⁺₃ ade ⁺ str^S x

F^–, Y⁺_R Z^–₄ I^–₃ ade ^– str^R

Скрещивание 7: Hfr, Y⁺_R Z ^–₄ I ^–₃ ade⁺ str^S x

F^–, Y^–_R Z ⁺₄ I ⁺₃ ade ^– str^R.

Рекомбинанты ade ⁺ str* отбираются при посеве на агар с глюкозой и стрептомицином. Представленные в табл. 8.3 данные основаны на анализе генотипа более чем 10000 таких рекомбинантных колоний, от-

Таблица 8.3. Частоты неселективных маркеров среди рекомбинантов ade+strR, образуемых мерозиготами
Скрещивание 6	Скрещивание 7
По Jacob F., Wollman E.L. 1961. Sexuality and the Genetics of Bacteria, Academic Press, New York, p. 229.

Скрещивание 6

Скрещивание 7

Рис. 8.15. Образование селективных и неселективных рекомбинантных генотипов в скрещиваниях 6 и 7 из таблицы 8.3. Все рекомбинанты содержат ген ade + (кроссинговер обозначен цветной стрелкой). Другие возможные обмены обозначены черными стрелками. Пунктирными стрелками обозначены кроссинговеры, положение которых по отношению к гену lacI не определено.

8. Бактериальный геном 249

Рис. 8.16. Генетическая карта /ас-области Е. coli.

печатанных на чашки с питательной средой, позволяющей идентифицировать различные фенотипы Lac. Самый многочисленный класс рекомбинантов, полученных в этих скрещиваниях, позволяет определить расстояние на карте между ade и lacZ. В шестом скрещивании это расстояние оценивается в 22 единицы, в реципрокном седьмом скрещивании - в 26 единиц; такое соответствие можно считать удовлетворительным. На рис. 8.15 схематически изображены кроссинговеры, необходимые для возникновения рекомбинантов этого и других типов, представленных в табл. 8.3. Рекомбинанты классов В, С и D, полученные в скрещивании 6 (рис. 8.15), позволяют сделать вывод, что lad лежит между lac Z и ade, поскольку четырехкратный кроссинговер, в результате которого образуются классы С и D, должен происходить много реже двойного. Сравнение классов С и D с классом В показывает, что по аналогичной причине lac Ζ должен лежать между lacI и lac Y. Реципрокное скрещивание 7 подтверждает установленную в скрещивании 6 последовательность расположения генов. Полученные в этих скрещиваниях частоты четырехкратного кроссинговера свидетельствуют о существовании высокой отрицательной интерференции (см. гл. 14). На рис. 8.16 изображена рекомбинационная карта, построенная по данным, приведенным в табл. 8.3, и другим данным, полученным при использовании в качестве маркера аллелей локуса pro.

Сопоставление физической карты, полученной методом прерванной конъюгации, и генетической карты, построенной на основании данных о частоте рекомбинаций, показывает, что 1 минута продолжительности конъюгации соответствует 20 единицам генетической карты. Полная длина хромосомы Е. coli составляет 100 минут или 2000 единиц генетической карты. Одна единица карты соответствует примерно 1 600 н. п. Очевидно, что рекомбинационное картирование удобно лишь при малых расстояниях между исследуемыми локусами, поскольку маркеры, удаленные друг от друга более, чем на 3 минуты, расщепляются практически независимо, т.е. ведут себя как несцепленные гены.

Дата добавления: 2015-12-16 | Просмотры: 521 | Нарушение авторских прав