АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Основные биологические свойства стрептококков

САМР-тест. Большая часть стрептококков группы В (S. agalactiae) продуцирует экстрацеллюлярный протеин (САМР-фактор), который при взаимодействии с бета-лизином золотистого стафилококка вызывает синергическое усиление лизиса эритроцитов. Для постановки САМР-теста через центр чашки с кровяным агаром сплошной линией наносят суточную бульонную культуру продуцирующего бета-лизин S. aureus (АТСС 33862). Испытуемые штаммы стрептококков наносят перпендикулярно к линии посева стафилококка не доходя 2-3 мм. В качестве контрольных используют штаммы S. agalactiae (положительный контроль) и S. pyogenes (отрицательный контроль). При обнаружении в месте пересечения посевов стрептококка и стафилококка спустя 18 ч инкубации при температуре 37 ^○С зоны синергического увеличения гемолиза в виде «крыла бабочки» делают вывод о наличии в пробе S. agalactiae.

Гидролиз гиппурата натрия. В основе данного теста лежит способность стрептококков группы В вызывать гидролиз гиппурат натрия. Для его постановки петля чистой культуры исследуемого штамма суспендируется в 0,4 мл 1% водного раствора гиппурата натрия. Спустя 2 ч инкубации при температуре 37^оС добавляют 0,2 мл 3,5% раствора нингидрина в смеси бутанола и ацетона (1:1). При положительном результате после повторной инкубации в течение 10 мин появляется пурпурное окрашивание.

Желчно-эскулиновый тест. Используется для предварительной идентификации стрептококков группы D (S. bovis), которые растут на желчно-эскулиновом агаре с образованием комплекса темно-коричневого или черного цвета. Исследуемую культуру стрептококка засевают на питательный агар, содержащий 40% желчи, 0,1% эскулина и 0,05% цитрата железа. Учет результатов производят через 24-48 ч инкубации при температуре 37 ^оС.

Рост в бульоне с 6,5% раствором NaCl. Простой и доступный тест для предварительной дифференциации стрептококков группы В, которые в отличие от других стрептококков устойчивы к высокой концентрации хлористого натрия. Учет результатов производят через 24-48 ч инкубации при температуре 37 ^оС.

PYR-тест. В основе метода лежит обнаружение фермента пирролидонилариламидазы (PYR), который имеется у большинства штаммов

S.pyogenes и не встречается у других стрептококков. Небольшое количество (0,2 мл) питательного бульона, содержащего 0,01% L-пирролидонил-бета-нафтиламида, инокулируют полной петлей исследуемой культуры и инкубируют при температуре 37 ^оС в течение 4 ч. После добавления одной капли коммерческого реактива (диметиламиноациннамальдегид) в положительных случаях появляется ярко-красное окрашивание.

Для биохимической идентификации стрептококков могут использоваться коммерческие тест системы различных фирм, а также хромогенные среды для выделения стрептококков группы B (S. agalactiae).

Иммунологическая дифференциация стрептококков. Основана на обнаружении полисахаридного антигена клеточной стенки (группоспецифического полисахарида С). Выпускаемые в настоящее время диагностикумы обеспечивают серологическую идентификацию стрептококков групп А, В, С, F, G.

Антиген получают путем экстракции группового полисахарида стрептококка азотной кислотой. Исследуемую культуру выращивают в 3 мл бульона для стрептококков (37 ^оС, 18-24 ч), центрифугируют (2000-3000 об/мин, 30 мин), надосадочную жидкость максимально удаляют. К осадку добавляют 40 мкл 3М раствора азотистокислого натрия и 9 мкл ледяной уксусной кислоты, смесь взбалтывают и оставляют при комнатной температуре на 20-30 мин. Затем в присутствии 5 мкл индикатора фенолового красного (0,4% водный раствор) заранее подобранным объемом 5-10 нормального раствора едкого натрия рН доводят до 7,2-7,5 (различные оттенки оранжевого цвета). При отсутствии микропипеток экстракцию проводят в капельном варианте: 7 капель 3М раствора азотистокислого натрия, 3 капли ледяной уксусной кислоты, 1 капля индикатора. Техника постановки реакции та же.

Реакцию иммунопреципитации в агаре ставят на стекле размером 9х12 см (отмытая от эмульсии фотопластинка). Стекло заливают 15-17 мл 1% осветленного голодного агара на 0,85% растворе хлористого натрия. Стекло должно находиться на строго горизонтальной поверхности. В застывшем агаре по трафарету делают центральные лунки для диагностической сыворотки (диаметр 6 мм) и вокруг них, на расстоянии 9 мм - периферические лунки для антигенов (диаметр 3 мм). Реакция протекает при комнатной температуре в условиях влажной камеры, поэтому штатив со стеклами помещают в герметически закрывающийся полиэтиленовый пакет, содержащий комок влажной ваты или крышку чашки Петри с водой. Учет результатов реакции осуществляют через 12-18 ч. Специфичность образующихся линий преципитации проверяют по их совпадению с линиями контрольных антигенов.

Липопротеиназной активностью обладают только стрептококки группы А. Следовательно, бета-гемолитические стрептококки, вызывающие помутнения сыворотки, могут быть сразу отнесены к группе А.

Реакцию помутнения сыворотки ставят следующим образом: к осадку исследуемой культуры, полученному вышеописанным способом, добавляют 0,5-1,0 мл (в зависимости от диаметра пробирки) коммерческой сыворотки крупного рогатого скота с мертиолятом (конечная концентрация 1:2000); смесь энергично встряхивают и затем инкубируют 24-48 ч при температуре 37^оС. После центрифугирования при 2000-3000 об/мин в течении 20 мин производят визуальную оценку результата относительно интактной сыворотки. Каждую серию сыворотки предварительно проверяют с контрольным липопротеиназным штаммом.

Серологическая диагностика стрептококковых инфекций в лабораторных отделениях чаще всего ограничивается определением титра антител к экстрацеллюлярным продуктам стрептококка – стрептолизину-О и ферменту гиалуронидазе. Для проведения исследований используют парные сыворотки больных, взятые с интервалом в 7-10 дней. Титры анти-стрептолизина-О у практически здоровых людей не превышают 250 международных единиц (АЕstO). При острых и хронических стрептококковых инфекциях они возрастают, причем при наличии ревматизма или нефрита с первых дней заболевания отмечаются очень высокие титры антител (500 AEstO и выше). Определение титра анти-гиалуронидазы (АЕНуS) широко используется в диагностике активности ревматического процесса. У практически здоровых людей они, как правило, не превышают 300 единиц (AEHyS), а у больных ревматизмом достигают 1000 единиц и более.

Дата добавления: 2016-03-26 | Просмотры: 1686 | Нарушение авторских прав