АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ФАГОЦИТАРНОЙ АКТИВНОСТИ

Реакция фагоцитоза – в основе лежит опсонизация возбудителя.

Из крови выделяют фракцию фагоцитов, к ним добавляют гонококков и сыворотку обследуемого больного (Ат + С). Через определённое время мазки просматривают и подсчитывают не менее 100 фагоцитов. Из них определяют % ##, захвативших микробов. В N ФАГОЦИТАРНЫЙ ПОКАЗАТЕЛЬ=40-80%.

ФАГОЦИТАРНОЕ ЧИСЛО – подсчитывают число захваченных микробных клеток, суммируют и делят на кол-во фагоцитов, получают число микробных ##, поглощённых одним фагоцитом. В N ФЧ=1-5.

18. Гиперчувствительность немедленного типа, природа, механизм проявления, методы диагностики.

Иммунный ответ Ò – это механизм защиты, но в ряде случаев он м.б. причиной патологических процессов. Как правило, это происходит при повторном контакте АГ с Ò, ранее сенсибилизированным этим АГ. Такой антиген, способный вызвать сенсибилизацию организма и индуцировать в нем аллергическую реакцию, называют АЛЛЕРГЕНОМ.

Выделяют 4 основных типа аллергических реакций.

Реакции 1 типа (анафилактические) – вызывают экзогенные аллергены: пыльца цветущих растений, органические компоненты пыли, пищевые аллергены и др. Эти аллергены способны при первом контакте с Ò активировать особую субпопуляцию классоспецифических Т-хелперов, которые в свою очередь активируют В-лимфоциты, вырабатывающие IgE (реагинами или гомоцитотропные АТ).

Для развития анафилактических реакций большое значение имеет атопия – наследственная предрасположенность к гиперпродукции IgE в ответ на сенсибилизацию определенным аллергеном. Это связано с наследуемыми иммунодефицитными состояниями, при которых избирательно ↓ активность Т-супрессоров, контролирующих синтез IgE к данному АГ, т.к. атопии часто сочетаются с иммунодефицитными состояниями (например, с дефектом синтеза SIgA и др). Атопия может проявиться в виде атопического дерматита, атопической бронхиальной астмы и др. IgE способны связываться с Fc-рецепторами клеток-«мишеней» – тучных клеток, базофилов, – сенсибилизируя их к соответствующему аллергену.

Повторно попадающий аллерген вступает в реакцию со специфическими IgE, фиксированными на клетках-«мишенях» → деформация молекулы Ig → цепная реакция в клетке-«мишени» приводит к выделению медиаторов (гистамина, серотонина, кининов, гепарина, факторов хемотаксиса) → медиаторы воздействуют на другие типы клеток: ГМ, кровеносных сосудов, желез внутренней секреции и др, что и обусловливает клиническую картину.

Реакции II типа (цитотоксические, точнее цитолитические). В их основе – выработка IgG, направленных против компонентов мембран ## организма. В качестве таких АГ могут выступать аутоантигены клеток и тканей Ò и АГ, вторично фиксированные на клеточных мембранах (лекарственные аллергены). IgG в комплексе с АГ связывают и активируют комплемент по классическому пути. Основным механизмом повреждения и гибели клеток-«мишеней» является комплементзависимый цитолиз. Иммунный цитолиз наблюдается при некоторых формах лекарственной аллергии (к пенициллину – анемия, к сульфаниламидам – агранулоцитоз и др.), переливании крови и аутоиммунных заболеваниях.

Реакции III типа (иммунных комплексов). В этом случае чужеродные АГ выводятся из Ò, разрушаются при участии фагоцитирующих клеток. Захват иммунных комплексов фагоцитами опосредован Fc- и С3-рецепторами. В случаях дефекта фагоцитов иммунные комплексы накапливаются и циркулируют в кровяном русле. Их длительная персистенция приводит к активации комплемента по классическому пути и закреплению на Fc- и С3-рецепторах иммунокомпетентных клеток.

При активации комплемента в сыворотке и тканях накапливаются биологически активные пептиды – фракции С3а и С5а (анафилатоксины), способные вызывать расширение сосудов и нарушать проницаемость сосудистой стенки.

В реакции, индуцированные ЦИК, вовлекаются гранулоциты, тромбоциты, выделяющие биогенные амины, белки систем свертывания крови, кининообразования. При этом могут возникать повреждения самой разной локализации: кожи, суставов, артерий, почек, мышц и др. Болезни иммунных комплексов носят системный характер (например, сывороточная болезнь, СКВ), часто болезни иммунных комплексов развиваются при участии аутоАГ и аутоАТ, но роль пускового фактора может сыграть любой АГ инфекционной природы.

Реакции IV (клеточного) типа - реакции ГЗТ. В отличие от аллергических реакций первых трех типов, они х-ся не только более поздним проявлением, но и принципиально иными механизмами. В основе реакции ГЗТ лежит не гуморальный, а клеточный иммунный ответ.

Лабораторная диагностика аллергии проводится с учетом механизмов. Для этого пытаются определить преимущественный тип аллергии, а также определить аллерген.

Для этого при реакциях анафилактического типа ставят кожно-аллергические пробы с аллергенами из стандартных наборов: пылевых, пыльцовых, пищевых, лекарственных и др. На месте введения через 20–30 мин возникает покраснение, может образоваться волдырь. Выраженность кожной реакции зависит от степени сенсибилизации организма. Лабораторная диагностика при реакциях I типа основывается на выявлении АТ, относящихся к классу IgE, фиксированных на клетках (базофилах, тучных клетках) и содержащихся в сыворотке.

При аллергических реакциях II типа основные методы лабораторной диагностики применяются с целью выявления в сыворотке крови антиэритроцитарных, антилейкоцитарных и антитромбоцитарных АТ, оказывающих цитолитическое действие в присутствии комплемента на соответствующие клетки-«мишени».

При аллергических реакциях III типа основное внимание уделяется методам выявления ЦИК в крови или фиксированных в тканях органа-«мишени».

19. Гиперчувствительность замедленного типа, природа, формы проявления, методы диагностики.

Иммунный ответ Ò – это механизм защиты, но в ряде случаев он м.б. причиной патологических процессов. Как правило, это происходит при повторном контакте АГ с Ò, ранее сенсибилизированным этим АГ. Такой антиген, способный вызвать сенсибилизацию организма и индуцировать в нем аллергическую реакцию, называют АЛЛЕРГЕНОМ.

Реакции IV (клеточного) типа – реакции ГЗТ. В отличие от аллергических реакций первых трех типов, они х-ся не только более поздним проявлением, но и принципиально иными механизмами. В основе реакции ГЗТ лежит не гуморальный, а клеточный иммунный ответ.

Аллергия клеточного типа развивается при многих инфекциях: туберкулезе, бруцеллезе, микозах и др. Сенсибилизацию клеточного типа могут вызывать живые вакцины, например вакцина БЦЖ. Сенсибилизация при этом связана с преимущественной пролиферацией Т-лимфоцитов, несущих специфические для данного аллергена распознающие рецепторы. После этого в организме надолго сохраняется размножившийся клон сенсибилизированных Т-лимфоцитов, который вступает в реакцию с АГ при повторном его попадании. Специфическая активация Т-лимфоцита индуцируется реакцией антигена с антигенраспознающими рецепторами на его мембране. Основным следствием такого взаимодействия является активация Т-эффекторов реакции ГЗТ с усилением выработки и секреции лимфокинов. Различают лимфокины, активирующие другие лимфоциты или макрофаги (к ним относится ряд факторов хемотаксиса, угнетения миграции макрофагов, активации макрофагов, γ-интерферон). Кроме того, лимфоциты секретируют цитотоксины, повреждающие разные клетки-«мишени».

В реакциях типа ГЗТ участвуют: Т-эффекторы, продуцирующие лимфокины; мобилизованные ими макрофаги, продуцирующие и секретирующие медиаторы-монокины; Т-киллеры – цитотоксические клетки-эффекторы, способные убивать клетки-«мишени», несущие на мембране специфические антигенные эпитопы.

Примером аллергической реакции клеточного типа может служить кожная проба на внутрикожное введение аллергена (туберкулина) в специфически сенсибилизированный (инфицированный или вакцинированный) организм. На месте введения аллергена образуется мононуклеарный инфильтрат, величина которого зависит от степени сенсибилизации и достигает максимума через 24-48 ч. Иммунопатогенетическая роль этих аллергических реакций особенно велика при некоторых хронических инфекциях и аутоиммунных заболеваниях.

Лабораторная диагностика. Для изучения клеточно-опосредованной сенсибилизации при аллергии IV типа используют кожные пробы с предполагаемыми аллергенами, результаты которых учитывают через 24–48ч, а также используют ряд тестов: РБТЛ, РТММ.

20. Иммунодефицитные состояния, классификация. Роль инфекции в развитии иммунодефицитов человека.

ИММУНОДЕФИЦИТНЫЕ СОСТОЯНИЯ – это нарушения иммунного статуса и способности к нормальному иммунному ответу на разные АГ, обусловленые дефектами одного или нескольких звеньев иммунной системы.

КЛАССИФИКАЦИЯ:

1) Иммунодефициты подразделяют на врожденные и приобретенные. Врожденные (первичные) часто связаны с нарушением развития иммунной системы в ОГ, с нарушением пролиферации и дифференциации иммунокомпетентных ##.

Приобретенные (вторичные) – вследствие нарушения регуляции, после инфекций, травм, лечебных воздействий и др причин.

2) По дефектному ЗВЕНУ иммунной системы. Чаще встречаются преимущественные дефекты либо Т-, либо В-системы. Наиболее тяжелые – комбинированные дефекты Т- и В-систем иммунитета. Пример врожденного дефекта Т-системы – синдром аплазии тимуса.

Дефекты В-системы выявляются как синдромы гипо– или агаммаглобулинемии, причем в сыворотке могут ↓ все классы Ig, либо избирательно – 1-2 класса. Чаще – избирательная недостаточность SIgA, что приводит к нарушению местной защиты слизистых оболочек.

Для некоторых иммунодефицитных состояний характерна высокая избирательность дефекта. Например, СПИД возбудитель – HIV – избирательно поражает только Т-хелперы, но этот дефект отражается и на клеточных, и на гуморальных механизмах защиты организма, так как Т-хелперы являются одной из иммунорегуляторных субпопуляций Т-лимфоцитов.

Нужно учитывать, что один и тот же синдром м.б. следствием дефекта РАЗНЫХ ЗВЕНЬЕВ иммунной системы. Например, гипогаммаглобулинемия м.б. вызвана дефектом В-лимфоцитов, дефект антигенпрезентирующей функции макрофагов или дефектом Т-хелперов.

3) По ПРИЧИНАМ ВОЗНИКНОВЕНИЯ иммунодефицитов. Врождённые иммунодефициты выявляются в основном у детей первых месяцев жизни, которые редко доживают до года без лечения.

Чаще встречаются приобретенные иммунодефициты инфекционной природы – вследствие размножения возбудителей в ## иммунной системы, что приводит к разрушению или нарушению функций этих ##. Например, В! СПИДа репродуцируется в Т-хелперах, В! инфекционного мононуклеоза Эпстайна–Барра поражает В-лимфоциты. Инфицированные клетки разрушаются под действием самого возбудителя, его компонентов или продуктов (токсинов, ферментов), а также в результате специфической иммунной реакции организма, направленной против АГ мкÒ в # мбне.

Большую группу составляют иммунодефициты, которые развиваются при нарушении иммунорегуляции. Даже сравнительно небольшое нарушение соотношений регуляторных субпопуляций Т-хелперов и Т-супрессоров может вывести иммунную систему из строя. Временное ↑ доли Т-супрессоров и повышение их функциональной активности при большинстве инфекций – нормальная иммунорегуляторная реакция, но активация Т-супрессоров часто приобретает стойкий характер и не поддается обратному развитию.

Часто причиной вторичных иммунодефицитных состояний являются метаболические или гормональные нарушения (при диабете, ожирении, атеросклерозе, уремии, истощении), иммунопролиферативные заболевания, а также применение иммуносупрессоров (при лечении опухолей или иммунопатологических процессов).

Чаще всего иммунодефициты приводят к возникновению ОППОРТУНИСТИЧЕСКИХ ИНФЕКЦИЙ, вызванных условно-патогенными мкÒ. На фоне преимущественных дефектов В-звена иммунитета преобладают бактериальные (стафилококковые, стрептококковые и др.) инфекции. На фоне преимущественных дефектов клеточного иммунитета (Т-звена, макрофагов) проявляются в основном вирусные инфекции (герпес, ЦМВ и др.), кандидозы, микобактериозы и др.

При иммунодефицитах нарушается и противоопухолевый надзор Þ частые опухоли (саркома Капоши у больных СПИДом). Иммунодефициты могут проявляться также в виде аллергических и аутоиммунных заболеваний.

Для лабораторной диагностики иммунодефицитов состояний проводится поэтапная оценка иммунного статуса организма с целью выявления уровня дефекта и уточнения дефектного звена.

21. Оценки иммунного статуса организма человека (клинико-лабораторные методы).

Оценка иммунного статуса Ò начинается с ОРИЕНТИРОВОЧНОГО КЛИНИЧЕСКОГО (ПЕРВОГО) ЭТАПА – собирают и оценивают иммунологический анамнез: частоту инфекционных заболеваний, характер и выраженность их течения, наличие очагов хрон инфекции. Оцениваются результаты клинического анализа крови: содержание гранулоцитов, моноцитов, лимфоцитов. С помощью бактериологических, вирусологических и серологических исследований выявляется бактерио- или вирусоносительство.

На ВТОРОМ ЭТАПЕ В иммунологической ЛАБОРАТОРИИ проводится исследование крови с использованием иммунологических тестов 1-го и 2-го уровней.

Тесты 1-го уровня позволяют выявить грубые нарушения со стороны иммунной системы, в крови определяют процентное содержание и абсолютное кол-во Т- и В-лимфоцитов.

Для подсчета Т-ЛИМФОЦИТОВ используют реакцию розеткообразования с эритроцитами барана (Е-РОК). У здоровых людей количество Т-лимфоцитов (Е-РОК) среди всех лимфоцитов периферической крови составляет 40–70%. Более точные методы – выявление Т-лимфоцитов с помощью специфических анти-Т-сывороток (например, с использованием меченых моноклональных АТ в иммунофлюоресцентном тесте).

Тесты для количественного подсчета В-ЛИМФОЦИТОВ основаны на обнаружении некоторых поверхностных маркеров, к/х нет на Т-, но есть на В-лимфоцитах (поверхностных Ig, С3- рецепторов, специфических В-АГ). Количество В-лимфоцитов определяется по наличию на них рецепторов к СЗ-компоненту комплемента методом ЕАС–розеткообразующих клеток (ЕАС-РОК), которое в норме составляет 10–30% общего числа лимфоцитов.

Для определения концентрации СЫВОРОТОЧНЫХ ИММУНОГЛОБУЛИНОВ IgM, IgG и IgA (по Манчини) испольуется реакция преципитации в геле (тест иммунодиффузии) между АТ исследуемой сыворотки и АТ к IgM, IgG и IgA. Уровень сывороточных Ig отражает состояние В-системы иммунитета.

Для оценки факторов неспецифической защиты определяют ФАГОЦИТАРНУЮ АКТИВНОСТЬ НЕЙТРОФИЛОВ крови. О фагоцитарной активности судят по проценту фагоцитирующих клеток и среднему количеству микробных частиц, поглощенных одним лейкоцитом.

Тесты 2-го уровня позволяют провести более тщательный анализ иммунного статуса организма человека, позволяют уточнить характер дефекта, выявленного на предыдущем этапе с помощью ориентировочных тестов. К ним относят определение субпопуляций регуляторных Т-лимфоцитов (Т-хелперы / Т-супрессоры), оценку функциональной активности регуляторных и эффекторных субпопуляций Т-лимфоцитов и др. Большинство тестов 2-го уровня весьма трудоемки, результаты их могут быть получены не ранее чем через 3–7 сут.

22. Реакция агглютинации. Механизм, практическое использование.

Агглютинацией называется склеивание бактерий при действии на них специфических антител в присутствии электролита. Ее используют: 1) для определения вида и серовара выделенных бактерий (СЕРОТИПАЖ), 2) для обнаружения антител в сыворотке крови больного (СЕРОДИАГНОСТИКА).

Для постановки реакции агглютинации (РА) необходимы три компонента: Аг (агглютиноген), Ат (агглютинин) и электролит (изотонический раствор натрия хлорида). В качестве Аг в РА применяют взвеси живых и убитых бактерий (ДИАГНОСТИКУМЫ).

Для получения агглютинирующих сывороток обычно иммунизируют кроликов. При этом им 5–7 раз подкожно, а затем внутривенно с интервалами 2–7 суток в возрастающих дозах вводят взвесь убитых, а в конце – 2–3 раза живых бактерий. Через неделю после иммунизации определяют титр сыворотки, или максимальное ее разведение, которое агглютинирует гомологичный микроорганизм. Если титр сыворотки недостаточен, иммунизацию продолжают. Полученные таким образом агглютинирующие сыворотки называются неадсорбированными, поскольку содержат групповые агглютинины и могут в небольших разведениях склеивать родственные в антигенном отношении бактерии. Поэтому для опред-я вида б!! надо ставить развернутую реакцию с сывороткой, разведенной от 1:100 до ее титра. Сыворотка соответствует мкÒ-му в том случае, если как минимум агглютинирует его до половины титра.

Более достоверные результаты при определении вида или серовара бактерий дают адсорбированные (монорецепторные или типоспецифические) сыворотки, которые не имеют групповых агглютининов, вследствие чего нет необходимости разводить их. Реакцию агглютинации в них ставят на предметном стекле.

Ориентировочная, или пластинчатая, реакция агглютинации. Ориентировочную РА выполняют перед постановкой развернутой реакции для того, чтобы отобрать на среде агглютинирующиеся в сыворотке колонии бактерий (культуры) и исключить из дальнейших исследований неагглютинирующиеся. Ставят ее при комнатной температуре на предметном стекле. Для этого на его поверхность пастеровской пипеткой раздельно наносят 2–3 капли различных сывороток в разведениях 1:10–1:20 и каплю 0,5% раствора NaCl (контроль РА). В каждую каплю за исключением контрольной вносят подозрительные колонии (петлю культуры) и тщательно перемешивают до равномерного помутнения.

Результаты реакции учитывают через несколько минут невооруженным глазом. При положительной реакции в каплях с сывороткой появляются крупные или мелкие хлопья, при отрицательной – жидкость остается равномерно мутной.

Дата добавления: 2015-09-03 | Просмотры: 1326 | Нарушение авторских прав