 |
|
АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология |
II. Методы определения групп кровиГруппа крови – это сочетание нормальных иммунологических и генетических признаков крови, которое наследственно детерминировано и является биологическим свойством каждого индивидуума. В клинической практике используют понятие «группа крови по системе АВО». Группы крови передаются по наследству, формируются на 3-4 месяце внутриутробного развития и остаются неизменными в течение всей жизни. Считается, что у человека группа крови включает несколько десятков антигенов в различных сочетаниях. Этих сочетаний – групп крови - реально может быть несколько миллиардов. Практически они одинаковы лишь у однояйцовых близнецов, имеющих один и тот же генотип. В практической медицине термин «группа крови», как правило, отражает сочетание эритроцитарных антигенов системы АВО и резус-фактора и соответствующих антител в сыворотке. Определение групп крови проводят в крови (с консервантом, без консерванта, венозной или капиллярной) методом прямой гемагглютинации на плоскости с помощью стандартных изогемагглютинирующих сывороток, моноклональных антител и перекрестным методом. Определение группы крови больного в отделении проводится лечащим врачом, врачом, переливающим кровь, либо специально обученной процедурной медсестрой под наблюдением врача в процедурном кабинете при помощи стандартных сывороток двух различных серий каждой группы. Для определения групповой принадлежности используют кровь, взятую в количестве 4-5 мл в сухую пробирку. Результат определения группы крови немедленно вносится: - на пробирку для лабораторного исследования путем наклеивания марки соответствующей группы крови, на которой указывается номер медицинской карты стационарного больного, фамилия, инициалы больного и дата взятия крови; - в направление для лабораторного исследования в клиническую лабораторию, на котором указывается номер медицинской карты, фамилия, имя, отчество больного, дата и др. - на лицевую сторону медицинской карты с указанием даты исследования, серии сывороток и за подписью лечащего врача. У больных, реципиентов в донорской крови все первичные и повторные исследования групп крови проводятся при помощи стандартных сывороток двух различных серий каждой группы. Подтипы антигена А. Антиген А не является однородным, существует два основных его подтипа: А1 и А2. Эритроциты с подтипом агглютиногена А1 встречаются намного чаще, чем с подтипом А2 (88% и 12% соответственно). Поэтому при наличии агглютиногена А1 его обозначают просто А, а обозначение с индексом применяется только для относительно редкого агглютиногена А2. В соответствии с этим группа А (II) имеет две подгруппы А (II) и А2 (II), а группа АВ (IV) — АВ (IV) и А2В (IV). Агглютиногены А1 и А2 отличаются друг от друга по свойствам: • Подтип А1 обладает большей адсорбционной возможностью по сравнению с агглютиногеном А2, он сильнее адсорбирует агглютинин а из сыворотки, поэтому его называют сильным, а подтип А2 — слабым. • Эритроциты с агглютиногеном А2 имеют более низкую агглютинабельность. • Подгруппы с агглютиногенами А1 и А2 обладают и различными свойствами сывороток. Сыворотка подгрупп А2(II) и А2В (IV) довольно часто содержит агглютинин, названный Ландштейнером и Левиным экстраагглютинином а1, который дает агглютинацию только с эритроцитами А1 и не дает агглютинации с эритроцитами А2. В то же время в сыворотке подгрупп А(II) и АВ (IV) довольно редко, но встречается экстраагглютинин а2, не агглютинирующий с эритроцитами А1, а дающий агглютинацию с эритроцитами А2. Существуют варианты эритроцитов с еще более слабовыраженными агглютинабельными свойствами, что связано с наличием в них подтипов А3, А4, Аz и др. Несмотря на то что эти слабые антигены встречаются довольно редко, они имеют определенное клиническое значение. Для точного определения подтипа антигена А необходимо проведение дополнительной реакции с так называемым анти-А1 реактивом, изготовленным из семян растения Dolichos biforis, содержащим только анти-А1 антитела (проводится в серологической лаборатории). Подтипы антигена В Групповой антиген В отличается большей однородностью, хотя описаны редкие его варианты: В2, В3, Вw и др. Однако существенного клинического значения это не имеет. Применение стандартных высокоактивных сывороток позволяет выявить и эти слабовыраженные агглютиногены группы В.
Антиген О и субстанция Н Позже в первой группе крови 0 (I) была найдена специфическая субстанция, также обозначенная символом «О». Фактор О является агглютиногеном, присущим эритроцитам групп 0 (I), А2 (II), А2В (IV). Для эритроцитов всех групп характерно наличие субстанции Н, считающейся общим веществом-предшественником. Субстанция Н чаще встречается у лиц с первой группой крови, в других же она содержится в незначительном количестве. У некоторых жителей индийского города Бомбей обнаружена группа, не содержащая агглютиногенов О, А, В, Н, но содержащая антитела а, ß, анти-0 и анти-Н. Впоследствии этот редкий тип крови, обнаруженный и у жителей других стран, получил название «тип Бомбей». Кровяные химеры В настоящее время известны кровяные химеры, которые обусловлены одновременным пребыванием в организме человека эритроцитов, принадлежащих двум фенотипам АВО. В естественных условиях кровяной химеризм встречается у близнецов. Он может также появиться при пересадке аллогенного костного мозга, переливании массивных объемов крови. При определении группы крови и резус-принадлежности в условиях кровяного химеризма, как правило, получают искаженный результат.
Определение группы крови стандартными изогемагглютинирующими сыворотками 1. Специальное оснащение: - стандартные изогемагглютинирующие сыворотки групп О aß(I), А ß(II), В а(III) и АВ о(IV), титр не менее 1:32; - 2 серии; - изотонический 0,9% раствор хлорида натрия; - белые фарфоровые или любые другие белые планшеты со смачиваемой поверхностью; - пипетки, маркированные для каждой группы сыворотки; - стеклянные, пластмассовые палочки или другой материал для перемешивания капель крови и сыворотки каждой группы в отдельности; - песочные часы на 5 мин. (таймер с сигналом); - цветные марки с указанием группы крови; штативы для пробирок; - пробирки 10x100 мм; - специальные штативы для стандартных сывороток или реагентов. 2. Техника определения группы крови при помощи стандартных сывороток. - Определение группы крови производят в помещении с хорошим освещением при температуре +15 -+25°С. - На пластине для определения группы крови с левой стороны надписывают Оаß (анти-А+В), в середине - Аß (анти-В) и справа - Ва (анти-А), на верхнем крае - фамилию и инициалы лица, у которого определяют группу крови. - Под соответствующим обозначением группы крови на пластинку наносят по одной большой капле (0,1 мл) стандартных сывороток соответствующих групп 2-х серий для исключения ложного результата. Всего получается 6 капель, которые образуют два ряда по три капли в следующем порядке слева направо: Оаß (анти-А+В), Аß (анти-В) и Ва (анти-А). - Рядом с каждой каплей сыворотки наносят маленькую каплю (0,01 мл) исследуемой крови, соблюдая соотношение 10:1. - Смешивают каплю сыворотки с каплей крови индивидуальной чистой стеклянной палочкой - После размешивания капель пластинку покачивают, затем на 1-2 минуты оставляют в покое и снова периодически покачивают. - Наблюдение за ходом реакции проводится в течение 5 минут. Агглютинация начинается в течение первых 10-30 секунд, однако наблюдение следует вести, до 5 минут, ввиду возможности более поздней агглютинации с эритроцитами, содержащими слабые разновидности антигенов А или В. - На 3-ей минуте в капли смеси сыворотки с эритроцитами, в которых наступила агглютинация, добавляют по одной капле (0,05 мл) изотонического раствора хлорида натрия и продолжают наблюдение при периодическом покачивании пластинки до истечения 5-ти минут. Оценка результата: реакция в каждой капле может быть положительной (наличие пескообразной или лепестковой агглютинации эритроцитов) или отрицательной (отсутствие агглютинации). Различные сочетания положительных и отрицательных результатов дают возможность судить о групповой принадлежности исследуемой крови (Схема 1).
Схема 1
Равномерным красным окрашиванием обозначено отсутствие агглютинации, розовое окрашивание с включениями (агглютинатами) - агглютинация. Как видно из приведенной схемы, результат оценивается в зависимости от реакции исследуемых эритроцитов со стандартными сыворотками группы Оaß (анти-А+В), Аß (анти-В), Вa (анти-А). В тех случаях, когда положительный результат (агглютинация) получен с сывороткой всех трех групп, для исключения неспецифической агглютинации производится контрольное исследование со стандартной сывороткой группы АВо (IV), не содержащей групповых агглютининов. Лишь отсутствие агглютинации в этой контрольной пробе позволяет учесть положительный результат с сыворотками групп Оaß (анти-А+В), Аß (анти-В), Вa (анти-А) как истинный, т.е. принадлежность исследуемой крови к группе АВ (IV). При наличии панагглютинации, т.е. агглютинации со всеми сыворотками и, соответственно, невозможности определить групповую принадлежность по системе АВО, кровь больного подлежит обязательному направлению на СПК или в ОПК для исследования специалистом-изосерологом. Опеределение группы крови моноклональными реагентами анти-А и анти-В: Определение группы крови системы АВО моноклональными реагентами анти-А, анти-В, анти-АВ. Реагенты анти-А, анти-В, анти-АВ предназначены для определения групп крови человека системы АВО в прямых реакциях гемагглютинации и применяются взамен или параллельно с поликлональными иммунными гемагглютинирующими сыворотками. Моноклональные антитела анти-А и анти-В продуцируются двумя различными гибридомами, полученными в результате слияния мышечных антителообразующих В-лимфоцитов с клетками мышиной миеломы. Названные цоликлоны представляют разведенную асцитическую жидкость мышей – носителей гибридомы, содержащую IgM против антигенов А и В. Цоликлоны дают более быструю и более выраженную реакцию агглютинации, чем стандартные АВО-сыворотки. При использовании цоликлонов исключается передача вируса гепатита и ВИЧ. Порядок проведения исследования. - На планшет или пластину индивидуальными пипетками нанести реагенты анти-А, анти-В, анти-АВ по одной большой капле (0,1 мл) под соответствующими надписями. - Рядом с каплями реагентов нанести по одной маленькой капле исследуемой крови (0,01-0,03 мл). - Смешать кровь с реагентом (в лунке планшета - тщательно вымытым сухим шариком, покачивая планшет; на пластине - чистой индивидуальной сухой палочкой). - Наблюдение за ходом реакции с реагентами следует вести при легком покачивании пластины или планшета в течение 5 минут. Агглютинация эритроцитов обычно наступает в первые 3-5 сек,, однако наблюдение следует продолжить ввиду более позднего появления агглютинации с эритроцитами, содержащими слабые разновидности антигенов А или В. - Результат реакции в каждой капле может быть положительным или отрицательным. Положительный результат выражается в агглютинации (склеивании) эритроцитов. Агглютинаты видны невооруженным глазом в виде мелких красных агрегатов, быстро склеивающихся в крупные хлопья. При отрицательной реакции капля остается равномерно окрашенной в красный цвет, агглютинаты в ней не обнаруживаются. - Учет результатов реакции агглютинации при определении групп крови моноклональными реагентами представлен в схема 2: Схема 2
(+) - наличие агглютинации, (-) - отсутствие агглютинации
При положительном результате реакции агглютинации со всеми реагентами необходимо исключить спонтанную неспецифическую агглютинацию исследуемых эритроцитов, для чего следует смешать на плоскости 1 каплю изотонического раствора хлорида натрия с 1 каплей исследуемых эритроцитов. Кровь можно отнести к группе АВ(IV) только при отсутствии агглютинации эритроцитов в изотоническом растворе хлорида натрия. Окончательный результат определения групповой и резус-принадлежности выносится на лицевую сторону медицинской карты с указанием даты и за подписью лечащего врача. Дата добавления: 2015-08-06 | Просмотры: 2197 | Нарушение авторских прав |