АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

В) Непрямой антиглобулиновый тест (реакция Кумбса)

Прочитайте:
  1. А. Желтухи с непрямой гипербилирубинемией
  2. В каком положении потерпевшего производится ему искусственное дыхание и непрямой массаж сердца?
  3. Взятие материала для серологического исследования (Реакция Видаля на тиф и Вассермана на снфадис)
  4. Интерпретация В-скана с непрямой линией при отображении передней плоскости – определение диапазона шероховатости поверхности образца.
  5. Непрямой метод Кунса.
  6. Политическая реклама как вид непрямой политической коммуникации.
  7. Реакция агглютинации, непрямой гемагглютинации
  8. Реакция непрямой (пассивной) гемагглютинации (РНГА, РПГА)
  9. РИБТ (реакция иммобилизации бледных трепонем).

Эта реакция является наиболее чувствительной для выявления не-полных антител к ауто- и изоантигенам эритроцитов. К ней, как правило, прибегают при возникновении трудностей в определении резус-принадлежности крови, связанных с нечеткими результатами, полученными при других методах исследования. Реакция основана на использовании антиглобулиновой сыворотки (АГС).

При обработке резус-положительных эритроцитов неполными антителами анти-Rh наступает их обволакивание (сенсибилизация) по отношению к АГС, которая и агглютинирует сенсибилизированные эритроциты, поскольку имеет антитела к глобулинам. В пробирку вносят антирезусную сыворотку и отмытые физиологическим раствором эритроциты; помещают на 1 час в термостат при температуре 37°С, после чего эритроциты тщательно отмывают. Последующий этап реакции проводят на плоскости. Каплю взвеси эритроцитов смешивают с равным количеством антиглобулиновой сыворотки и учитывают результат. Наличие агглютинации является показателем того, что исследуемый образец крови резус-положительный. Если агглютинация отсутствует, испытуемая кровь — резус-отрицательная.

г) определения резус-принадлежности крови человека на основе моноклональных антител «Анти D Супер ЦОЛИКЛОН»4

Назначение:

Анти-D Супер Цоликлон - жидкий диагностический реагент для определения резус-принадлежности крови человека - предназначен для качественного выявления в эритроцитах человека Rh(D)-антигена системы «резус». Применяется в учреждениях службы крови, клинико-диагностических лабораториях и в научно-исследовательской практике. Набор расчитан на проведение 1000 определений при расходе по 0.1 мл реагента на 1 анализ.

Принцип метода:

Основным принципом метода типирования крови при помощи моноклональных антител является реакция антиген-антитело Активные центры антител определенной специфичности связываются с мембранными антигенами эритроцитов крови, что вызывает агглютинацию (склеивание) эритроцитов, легко наблюдаемое визуально. Наличие агглютинации эритроцитов исследуемой крови человека под действием моноклональных антител определенной специфичности однозначно свидетельствует о том, что данные эритроциты несут антиген данной специфичности.

Состав реагента.

Реагент Анти-D Супер Цоликлон, представляет собой раствор анти-D моноклональных антител в 0.2 % растворе NaС1 с добавлением 2% 6ычьего сывороточного альбумина, 7 % глюкозы и азида натрия (0,1%) в качестве консерванта.

Аналитическая характеристика реагента.

Анти-D Супер Цоликлон - жидкий диагностический реагент для определения резус- принадлежности крови человека - представляет собой раствор полных антител, относящихся к иммуноглобулинам класса М (IgМ-антитела), специфичности анти-D. Титр (концентрация) антител в реагенте Анти-D Супер Цоликлон соответствует значению 1:256 в прямой реакции агглютинации с D -положительными эритроцитами в микроплате при титровании 2% раствором бычьего сывороточного альбумина (титр 1:32 в прямой реакции агглютинации D -положительных эритроцитов на плоскости). Активность (гемагглютинирующая активность) - 60 секунд. В реакции используется по 0,1 мл реагента и примерно 0,05 - 0,01 мл крови или эритроцитов. Воспроизводимость результатов резус-типирования крови человека реагентом. Анти-D Супер Цоликлон - 100 %. Результат типирования не зависит от форм антигена D в исследуемых эритроцитах (сильные или слабые).

Анализируемые пробы.

Анализ может проводиться с образцами нативной крови или эритроцитов, полученных из венозной, артериальной или капиллярной крови, как взятой в консервант, так и без консерванта.

Следует избегать загрязнения анализируемого образца эритроцитами из другой пробы, т.к. вследствие высокой чувствительности реагентов сравнительно небольшое количество иммуно-активных загрязнений может привести к ложно-положительной реакции.

Срок пригодности образцов крови человека для их типирования с помощью Цоликлонов ограничен 7 сутками хранения при температуре +2 °...+8° С.

Меры предосторожности.

Компоненты реагента Анти-D Супер Цоликлон в используемых концентрациях не токсичны и не требуют соблюдения специальных мер безопасности при работе с ними.

Работа с образцами крови требует использования одноразовых пластиковых или резиновых перчаток, т.к. исследуемые образцы могут содержать вирусы гепатитов, ВИЧ или другой гемоконтактной инфекции (Приказ № 408 Минздрава СССР от 12 июля 1989 года).

Оборудование и материалы, необходимые при работе с набором

- керамические пластинки (плитка облицовочная) однотонные, светлые с чистой сухой обезжиренной поверхностью; возможно использование различных типов планшетов для определения групп крови (Использование применявшихся раннее специальных шариков в планшетах для определения групп крови человека не рекомендуется);

- круглодонные планшеты для иммунологических реакций;

- пипетки вместимостью 0,1 мл;

- пробирки стеклянные или пластиковые с анализируемыми образцами крови, маркированные, в штативе;

- одноразовые пастеровские пипетки пластиковые или стеклянные для нанесения на пластинку капель тестируемых образцов крови;

- палочки стеклянные для смешивания реагента с образцом крови;

- водяная баня или термостат, поддерживающие температуру + 45°... +50°С;

- физиологический раствор;

- раствор желатина 10 %.

Подготовка реагента для анализа.

Реагент полностью готов к работе и специальной подготовки не требует.

Проведение анализа.

На проведение одного анализа резус-принадлежности крови человека (типирование 1 образца) расходуется примерно 0,1 мл Анти-D Супер Цоликлона. При использовании неградуированных пипеток 0,1 мл -1 полная капля. Анализы следует проводить в помещении с хорошим освещением и температурой +15°…+30°С.

Моноклональные анти-D IgМ антитела Анти-D Супер Цоликлона могут быть использованы для выявления D-антигена системы резус в любых модификациях прямой реакции агглютинации: на плоскости, в пробирке, в микроплате. Тестирование резус-принадлежности крови человека любым из этих методов не требует дополнительной перепроверки и позволяет надежно выявлять даже слабые формы D-антигена системы резус. В случае выявления данным реагентом резус-отрицательного донора можно провести подтверждение полученного результата тем же реагентом а реакции конглютинации с желатином, изоиммунной сывороткой или цоликлоном анти-D производства ООО «Гематолог» или фирм «ВIOТЕSТ АG» (Германия), «Ortho Diag.» (США). Это позволит гарантированно избежать случайных ошибок учета результата при тестировании методом прямой реакции агглютинации на плоскости в редких случаях особо слабых форм D - антигена, при которых агглютинация может быть выражена слабо (т.н. «песочная агглютинация») или развиваться медленнее, чем за 3 минуты. Заключение о присутствии D-антигена в исследуемых эритроцитах делают по наличию положительной реакции агглютинации.

Непрямая реакция агглютинации

На плоскости:

На смачиваемую (обезжиренную) поверхность светлой керамической пластинки нанести одну каплю (0,1 мл) Анти-D Супер Цоликлона. Рядом поместить маленькую (10 мкл) каплю исследуемой крови и смешать каплю Цоликлона с каплей крови индивидуальной чистой стеклянной палочкой. Реакция агглютинации развивается уже через 30 секунд при мягком покачивании пластинки, практически полностью реакция проходит за 60 секунд. Результаты учитываются через 3 минуты после смешивания капель, поскольку реакция агглютинации эритроцитов, несущих слабую форму D - антигена протекает медленнее. Положительный результат тестирования выражается в появлении агглютинации (склеивания) эритроцитов, которую можно наблюдать невооруженным глазом, поскольку капля быстро просветлятся, а эритроциты образуют крупные, хорошо различимые ярко-алые агрегаты. При отрицательном результате гемагглютинация не развивается, капля продолжает оставаться равномерно окрашенной в красный свет, агрегаты в ней не обнаруживаются.

В пробирке: В пробирку вносят 2 капли (по 0,1 мл) реагента Анти-D Супер Цоликлона и добавляют к нему 1 каплю 5 % взвеси отмытых в физиологическом растворе эритроцитов исследуемой крови. Содержимое пробирки тщательно перемешивают встряхиванием и инкубируют в течение 30-45 минут при комнатной температуре (+18°...+25°С}. Затем пробирку центрифугируют при 1500-2000 об/мин. в течение 1 минуты. Осадок мягко взвешивают, покачивая пробирку, и по наличию агглютинатов, выявляемых визуально и под микроскопом, делают заключение о присутствии D - антигена.

В микропланшете:

В лунку круглодонного микропланшета вносят 50 мкл Анти-D Супер Цоликлона и 50 мкл 2% взвеси отмытых в физиологическим растворе эритроцитов исследуемой крови, перемешивая пипетированием. Через 45-60 минут инкубации при комнатной температуре визуально учитывают реакцию агглютинации по характеру осадка эритроцитов на дне лунки: при отрицательном результате осадок эритроцитов на дне лунки имеет вид точки с четко очерченными краями, при положительном - устилает все дно лунки, край имеет неровный, часто - завернутый внутрь. Реакция конглютинации с желатином.

В пробирку вносят 1 каплю (0,1 мл) отмытых эритроцитов. Затем добавляют 2 капли (0,2мл) 10 % раствора желатина, предварительно прогретого в бане или термостате до разжижения при температуре +45°...+50°С, и одну каплю (0.1 мл) Анти-D Супер Цоликлона. Смесь тщательно перемешивают, инкубируют 10-15 минут на водяном бане или в течение 30 минут в термостате при температуре + 48°С, прибавляют 5 - 6 мл физиологического раствора. Наличие агглютинации определяют визуально после осторожного переворачивания пробирки. Агглютинация эритроцитов свидетельствует о наличии в них D-антигена.

ВОЗМОЖНЫЕ ОШИБКИ

Чаще всего ошибки являются следствием методических погрешностей при проведении исследования, в особенности при использовании конглютинационных методов. К ложным результатам может привести неправильное соотношение между сывороткой и эритроцитами, преждевременная оценка результатов, оценка результатов по высыхающей капле, определение резус-фактора в гемолизированном и длительно хранящемся образце крови, а также использование неактивных, инфицированных и загнивших сывороток, использование сывороток с истекшим сроком годности.

Причиной ошибок могут быть биологические особенности испытуемой крови: снижение агглютинабельности резус-антигена при некоторых заболеваниях печени, почек, системы крови, а также неспецифическая агглютинация испытуемых эритроцитов. В случае сомнительных результатов исследование повторяют, применяя более активные антирезусные сыворотки.

 


Дата добавления: 2015-08-06 | Просмотры: 1560 | Нарушение авторских прав



1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 | 13 | 14 | 15 | 16 | 17 | 18 | 19 | 20 | 21 | 22 | 23 | 24 | 25 | 26 | 27 | 28 | 29 |



При использовании материала ссылка на сайт medlec.org обязательна! (0.005 сек.)