Вопрос 58. Палочка инфлюэнцы
/. Заболевания, вызываемые палочкой инфлюэнцы
2. Морфология, биология, культуральные и антигенные свойства
3. Лабораторная диагностика
1. Бактерии инфлюэнцы Haemophilus influenza (б. Афанасьева-Пфейффера), встречаясь довольно часто на слизистой оболочке верхних дыхательных путей человека, при ослаблении устойчивости организма к инфекции могут вызвать менингит (особенно у ослабленных детей), острые воспаления дыхательных путей:
• пневмонию;
• бронхит;
• ларингит;
• конъюнктивит;
• острый и хронический отит и др.
2. Морфология: маленькая палочка почти кокковидной формы. Очень полиморфны, могут образовывать нити. Неподвижны, спор не образуют, грамотрицательны. Бактерии медленно окрашиваются анилиновыми красками; окраску мазка карболовым фуксином, разведенным в 10 раз, нужно производить в течение 5—15 мин.
Биология, культуральные свойства: большую роль при выращивании на питательных средах играют ростовые витамины — кровь различных животных или водный раствор хлористого гематина и дрожжевой экстракт.
Антигенное строение: серотипы — капсулы отдельных штаммов отличаются по антигенным свойствам в связи с присутствием в них 6 различных полисахаридов.
По капсульным антигенам бактерии инфлюэнцы разделяются на 6 типов: а, Ь, с, d, e, f. У людей чаще выделяется тип Ь. С помощью капсульных антигенов можно получить специфические антисыворотки с высоким титром, применение которых дает возможность быстро и точно определить серологические типы палочки инфлюэнцы.
3. При воспалении дыхательных путей и среднего уха берут слизь и гной с помощью тампона, при пневмонии собирают мокроту в чашку Петри; при эмпиеме плевры исследуют экссудат, а при менингите — спинномозговую жидкость.
Микроскопия и бактериоскопическое исследование: посев делают на кровяной (шоколадный) агар Левинталя и одновременно на свежий кровяной агар с 10% крови кролика или лошади. Палочка инфлюэнцы очень неустойчива во внешней среде, быстро погибает при высыхании слизи, мокроты, гноя, поэтому посев необходимо делать немедленно после взятия материала. На среде Левинталя колонии бактерий вырастают довольно больших размеров, слепки беловатые с гладкой поверхностью, ровные, круглые (у капсульных бактерий). У некапсульных штаммов колонии меньше с неровными краями и выпуклым центром. С колоний делают мазки на предметном стекле, окрашивают фуксином Циля и микроскопируют.
Типичные бактерии подвергают серологическому исследованию и пересевают на жидкие среды для дальнейшего исследования. При пересеве с колоний на жидкие кровяные среды {бульон Левшталя) палочка инфлюэнцы дает гомогенный рост с небольшим осадком на дне. Коккообразные формы дают равномерную слизь. Нитевидные формы дают хлопья. Для диагностики применяют реакцию преципитации с различными жидкостями, полученными от больного.
Вопрос 59. Возбудители кокковых пневмоний и их лабораторная диагностика
/. Возбудители пневмоний
2. Микроскопическое исследование
3. Бактериологическое исследование
4. Особенности лабораторной диагностики стафилококковых пневмоний
1. Возбудителями пневмонии могут быть различные микроорганизмы, проникающие в дыхательные пути человека из окружающей среды, — кокковые (пневмококки, стрептококки, стафилококки) и бациллярные (диплобациллы Флидлендера, палочки Пфейффера). Одним из наиболее частых возбудителей пневмонии, особенно крупозной, является пневмококк. В последнее время часты стафилококковые пневмонии.
2. Материалом для исследования служат: мокрота, слизь, взятая стерильным тампоном из носоглотки больного, гной, различные выпоты, пунктаты, кровь. Исследованию подвергают преимущественно мокроту или носоглоточную слизь.
Микроскопическое исследование: делают мазки на 2 предметных стеклах; один из мазков окрашивают по Граму, а другой — разведенным карболовым фуксином (краска Пфейффера). При нахождении в мазках ланцетовидных диплококков, окруженных светлой зоной неокрасившейся капсулы, ориентировочно устанавливают пневмококковую этиологию. Обнаружение расположенных цепочкой грамположительных кокков позволяет подавить предварительный диагноз стрептококковой инфекции.
Характерная морфология расположения группами в виде гроздей винограда и положительной окраски по Граму позволяет установить наличие стрептококков. Обнаружение в мазках мелких грамотрицательных палочек, часто образующих гнезд-ные скопления и нередко полярно окрашенных, указывает на палочку Пфейффера. Грамотрицательные диплобациллы различной величины, окруженные капсулой в виде светлого ореола, говорят о наличии диплобациллы Фридлендера. Микроскопический диагноз ориентировочный и предварительный.
3. Точное представление о микробном пейзаже дает:
• изучение посевов на кровяном агаре и других средах;
• выделение чистых культур из изолированных колоний;
• идентификация их.
Пневмококковые пневмонии: для бактериологического исследования материал засевают на чашки Петри, содержащие агар с добавлением 5—7% дефибринированой кроличьей крови. Посевы на кровяном агаре исследуют через 1—2 суток содержания в термостате при 37 °С.
Одновременно с изучением внешнего вида колоний производят отсев их в жидкие среды и микроскопирование. Колонии пневмококков на кровяном агаре имеют вид мелких полупрозрачных образований зеленовато-серого цвета, особенно заметного в тонком слое агара, в центре имеют небольшой плотный бугорок и более светлую периферию. Нередко колонии окружены как бы отсвечивающим ореолом. В жидких средах пневмококки вызывают равномерное помутнение без образования пленок и осадка.
Микроскопирование обнаруживает грамположительные парные кокки несколько удлиненной формы с заостренными наружными концами, напоминающими ланцет — ланцетивидные диплококки. Размеры их колеблются в пределах 0,5 х 0,75 до 1 х 1,5 мкм, располагаются одиночно, но могут образовывать короткие цепочки по 3—4 пары кокков. Пневмококки образуют капсулу, которая светлым ободком окружает оба кокка вместе, так как обычными методами окраски капсула не прокрашивается. Пневмококки легко лизируются в присутствии бычьей желчи и желчнокислых солей. Обнаруженные при исследовании культуры пневмококка подвергают дополнительному исследованию - определяют тип пневмококка, вирулентность для белых мышей и устойчивость к действию антибиотиков, а также производят серологические исследования (реакции агглютинации и преципитации — берется материал от больного и типовые пневмококковые сыворотки). Одновременно с посевом на агар исследуемый материал вводят внутрибрюшинно 2 белым мышам весом 18—20 г по 0,5 мл, т. е. ставят биологическую пробу.
4. Стафилококковая пневмония. Бактериологическое исследование
проводится с использованием молочно-солевого и кровяного агара. Для обнаружения стафилококков пользуются материалом (пунктат, выпоты, гной, экссудат), взятым непосредственно из очага болезни (плевральные и легочные полости), а также посевами крови, производимыми в строго стерильных условиях. Исследования слизи из зева и носа имеют второстепенное значение и лишь дополняют общую картину. 2-3 капли исследуемого материала помещают на поверхность чашки, содержащей молочно-солевой агар, посевы помещают в термостат при 37 "С. Посевы крови сохраняют в термостате до появления роста (помутнении). Если в течение 4—5 дней роста микробов не обнаруживается, считают отрицательными и уничтожают. Через сутки роста посевы извлекают из термостата и выросшие культуры подвергают изучению.
Колонии стафилококков на твердых средах представляют собой правильные диски с ровными краями, блестящей, умеренно выпуклой поверхностью, размером от 2 до 4 мм в диаметре. Колонии легко снимаются с агара, немного тягучи, непрозрачны, окрашены в золотисто-оранжевый, лимонно-желтый или белый цвет. На кровяном агаре патогенные штаммы стафилококков, как правило, окружены зоной более или менее выраженного гемолиза. В жидких средах стафилококки вызывают сильное диффузное помутнение, некоторые штаммы с образованием пленки. При стоянии пробирки на дне образуется осадок. Стафилококки грамположительньь
Под микроскопом стафилококки представляют собой довольно правильные сферические кокки с диаметром 0,6 до 0,9 мкм. Располагаются одиночно, попарно и даже короткими цепочками по 2—4 кокка, но основной формой являются неправильные скопления, напоминающие гроздья винограда.
Патогенные штаммы выглядят, как правило, лиловыми, а непатогенные — интенсивно синими. Выделенные из одной колонии штаммы культур стафилококка исследуют на патогенные свойства и чувствительность к антибиотикам. Из посевов крови ежедневно делают высевы на гемоагар и выделенные культуры подвергают тем же исследованиям. Понятие о патогенности стафилококковой культуры складывается из комплекса свойств изучаемого штамма:
• способности вырабатывать пигмент;
• вызывать гемолиз эритроцитов;
• коагулировать плазму крови;
• вырабатывать экзотоксин;
• лизироваться типовыми фагами.
Косвенным показателем патогенных стафилококков является их способность лизироваться типовыми стафилококковыми фагами, так как известно, что непатогенные штаммы не лизи-руются.
Серологическое исследование — наибольшее распространение получило определение уровня стафилококкового антитоксина в сыворотке больных в динамике, т. е. в начале и в конце болезни. Принцип титрования основан на нейтрализации гемолитических свойств стафилококкового токсина антитоксином, содержащимся в сыворотке больного. Обычно при наличии стафилококкового заболевания уровень антитоксина в крови больных нарастает в течение болезни, что подтверждает этиологическую роль стафилококка в данном заболевании. У резко ослабленных субъектов нарастание титра антитоксина может и не наблюдаться.
Вопрос 60. Возбудитель малярии
/. Морфологические и культуральные свойства возбудителя малярии
2. Цикл развития малярийного плазмодия
3. Спорогония
4. Шизогония — тканевая и эритроцитарная
5. Половое размножение плазмодиев
Острый антропонозный трансмиссивный протозооноз. Возбудители малярии — одноклеточные животные (простейшие), относятся к классу спорозоа, подклассу кокцидиа, семейству плазмодий, роду плазмодиум. У человека известно 4 вида возбудителей малярии:
• плазмодии вивакс (p. vivax) — возбудитель трехдневной малярии;
• плазмодии малярии (p. malariae) — возбудитель четырехдневной малярии;
• плазмодии фальсипарум (p. falciparum) — возбудитель тропической малярии;
• плазмодии овале (p. ovale) — возбудитель особой формы трехдневной малярии.
Последний вид в естественных условиях встречается в Африке, Палестине, Южной Америке, на Филиппинах. В России существование овале не установлено. Человек в естественных условиях может заразиться через комаров возбудителем малярии обезьян.
2. Цикл развития малярийных возбудителей осуществляется со сменой хозяев:
• половое развитие (спорогония) протекает в организме окончательного хозяина — самки комара рода анофелес;
• бесполое развитие (шизогония) — в организме промежуточного хозяина — человека).
3. Спорогония — попавшие в желудок комара с кровью человека мужские и женские половые клетки плазмодиев (микро- и мак-рогаметоциты) превращаются в зрелые микро- и макрогаметы, которые после оплодотворения проходят ряд последовательных этаггов развития (от зиготы до спороцисты) инвазионных форм спорозоитов, накапливающихся в слюнных железах насекомого. Продолжительность спорогонии определяется видом плазмодиев и температурой окружающего воздуха. При оптимальной температуре воздуха (25 °С) спорогония продолжается 10 дней у плазмодиев вивакс, 12 дней - у фальсипарум и 16 дней -у малярие и овале. При температуре воздуха ниже 15 °С споро-зоиты не развиваются. Дальнейшее развитие спорозоиты получают в организме позвоночного хозяина, в который они проникают при кровососании комара.
4. В организме человека малярийные паразиты проходят бесполое размножение, или шизогонию:
- в тканевых клетках — тканевая шизогония;
- в эритроцитах — эритроцитарная шизогония.
Тело малярийного паразита состоит из цитоплазмы и ядра. Некоторые стадии паразитов содержат пигмент, который окраски не воспринимает, а имеет свой естественный цвет: темно-бурый, золотисто-желтый, коричневый, почти черный (разный у разных видов паразитов).
Заражение человека происходит в результате укуса зараженного комара рода анофелес. Со слюной такого комара в организм человека попадают спорозоиты. Тканевая шизогония протекает в клетках печени. Спорозоиты внедряются в них, округляются, растут, достигая в поперечнике 40—50 мкм и более. В них многократно делится ядро, а затем сегментируется цитоплазма. В результате образуются тканевые мерозоиты. Часть мерозоитов проникает в эритроциты и дает начало эритроцитарному циклу развития паразитов. Другие мерозоиты проникают вновь в клетки печени, в которых продолжается развитие тканевых форм. Стадии паразитов, развивающиеся в клетках печени, называют тканевыми, или экзоэритроцитарными, формами. Различают также формы преэритроцитарные, развитие которых в тканевых клетках проходит параллельно развитию эритроци-тарных форм. Минимальная продолжительность экзоэритрици-тарной шизогонии составляет 8 суток у пл. вивакс, 6 суток у пл. факсипарум, 9 суток у пл. овале и 19—16 суток у пл. малярие. Вследствие политипичности спорозоитов пл. вивакс и пл. овале часть из них (до 8—13 мес после инокуляции) обеспечивает развитие болезни после продолжительной инкубации или возникновение истинных или отдаленных рецидивов болезни. Эритроцитарная шизогония пл. вивакс, пл. малярии и овале протекает в периферической крови. Возбудитель пл. фальсипарум в периферической крови обычно встречаются только ши-зонты, кольца.
Остальные стадии шизогонии вплоть до разделения паразита на мерозоиты и развития половых форм (гамоитов) протекают во внутренних органах. Только в случаях тяжелой коматозной малярии в периферической крови могут наблюдаться и другие стадии цикла шизогонии.
У некоторых штаммов пл. фальсипарум все стадии шизогонии можно обнаружить в периферической крови у значительной части больных и при относительно легком течении болезни.
5. Размножение паразитов в эритроцитах протекает в виде регулярно сменяющихся циклов. От проникновения мерозоита в эритроцит до завершения развития паразита, заканчивающегося образованием новых мерозоитов, у пл. вивакс, пл. фальси-парум и пл. овале проходит 48 ч, у пл. малярие — 72 ч. Часть мерозоитов, проникающих в эритроциты, превращаются в мужские и женские половые клетки — гамонты (мужские — микрогамонты, женские — макрогамонты).
Женские гамонты достигают стадии полной зрелости — стадии гаметы в крови человека, мужские гаметы дозревают в организме переносчика. По завершении процесса созревания в желудке комара наблюдается процесс выбрасывания мужским гаме-тоцитом 4—8 мужских гамет, которые после отшнуровывания активно двигаются в содержимом желудка, способны проникать в женскую гамету и ее оплодотворять (половой процесс). При пл. фальсипарум гаметоциты сначала принимают округлую форму и лишь затем образуются микрогаметы.
Оплодотворенные женские гаметы (зиготы) проникают сквозь эпителий средней кишки (желудка) комара и под наружной ее оболочкой образуют ооцисты. Ооцисты растут, в них формируется большое число спорозоитов — одноядерных веретеновид-ных образований (длина 11-15 мкм, ширина 1—1,5 мкм).
Цисты разрываются, и из них выходят спорозоиты, которые, распространяясь с гемолимфой по тканям комара, попадают в его слюнные железы, после чего комар становится способным передавать малярию человеку. Заражение малярией может наступит не только через укус комара, но при переливании крови от донора, у которого в крови имеются паразиты, даже в весьма малом количестве.
Вопрос 61. Лабораторная диагностика малярии
/. Обнаружение плазмодиев в толстой капле и мазке крови
2. Морфология малярийных паразитов в мазке и толстой капле
3. Ошибки диагностики
4. Исследование комаров на зараженность малярийными паразитами
1. Паразитологический диагноз малярии основан на обнаружении паразитов в окрашенных препаратах (толстая капля и мазок) крови. Паразиты могут присутствовать в крови не только во время лихорадочных приступов и промежутков между приступами, следующими один за другим, но и в течение длительных периодов, на протяжении которых не наблюдается повышения температуры.
Наличие паразитов в крови при отсутствии лихорадочных приступов называется паразитоносительством. Такие люди заразны для комаров. При массовых обследованиях следует брать кровь вне зависимости от наличия приступов. Техника приготовления и окраски мазка — мазок готовят как обычно. После того как мазок высохнет, его фиксируют в 96%-ном этиловом спирте 15 мин или в метиловом спирте в течение 3 мин. Высушенные после фиксации мазки окрашивают краской Романовского, разведенной дистиллированной водой, ркрашивают в течение 30—50 мин, в зависимости от качества краски. После окрашивания препарат споласкивают водой и высушивают на воздухе.
Техника приготовления и окраски толстой капли. На стекле приготовляют мазок, а потом на еще влажный мазок дают упасть капле крови. Капля равномерно растекается, образуя круг. После того как капля высохнет, на мазке простым карандашом делают соответствующую отметку. Препарат без фиксации окрашивают. Затем осторожно (чтобы не смыть каплю) препарат споласкивают водопроводной водой и высушивают. Мазки и толстые капли микроскопируют имммерсионной системой. 2. Морфология малярийных паразитов в мазке крови. Мерозоит, внедрившись в эритроцит, превращается в молодой шизонт, имеющий вид кольца. Затем паразит, увеличиваясь, принимает амебовидную форму, при этом сохраняется просвет (вакуоль) между ядром паразита и основной частью его цитоплазмы. В цитоплазме паразита появляются зерна пигмента. Амебовидный шизонт заполняет значительную часть эритроцита, затем начинает округляться, вакуоль исчезает (стадия подготовки к делению), пигмент начинает собираться в отдельные пучки. Для плазмодия малярии шизонты — лентовидные формы. Ядро паразита начинает делиться, а затем цитоплазма паразита делится так, что к каждому дочернему ядру прилегает отдельный комочек цитоплазмы (меруляция). В результате получается кучка мерозоитов — морула. Пигмент на стадии морулы собран в одну компактную кучу.
У пл. фальсипарум скучивание пигмента наступает еще до полного формирования морулы. Мерозоиты расходятся, попадают в плазму крови, часть из них погибает, часть внедряется в новые эритроциты.
Гамонты. Форма гамонтов у всех малярийных паразитов, за исключением тропической малярии, круглая или слегка овальная. При тропической малярии плазмодий имеет вытянутые гамонты с закругленными концами. Мужские и женские гамонты различаются между собой по величине и структуре ядра (интенсивности окраски цитоплазмы). Женские гамонты — ядро небольшое, компактное; цитоплазма красится в интенсивный голубой цвет. Мужские гамонты — ядро большое, цитоплазма красится бледно, часто зона вокруг ядра принимает фиолетовый оттенок.
Морфология малярийных паразитов в толстой капле. В толстой капле, поскольку ее окрашивают в нефиксированном виде, эритроциты выщелачиваются, а малярийные паразиты претерпевают значительную деформацию. При четырехдневной и тропической малярии пораженные эритроциты в толстой капле выщелачиваются полностью, так же как и нормальные. При трехдневной малярии в толстой капле строма эритроцитов сохраняется и диагностика малярийного паразита по толстой капле облегчается. Кольца в толстой капле обычно смяты, вытянуты в виде восклицательного знака, иногда разорваны в виде запятой. Амебовидные шизонты часто бывают уплотненными, лентовидные шизонты четырехдневной малярии в толстой капле округляются и неотличимы от амебовидных шизонтов. Морулы распознаются в толстой капле легко. Цитоплазма паразитов в результате воздействия химиотерапев-тических препаратов окрашивается слабее, приобретает стекловидный оттенок, становится вакуолизированной, распадается на отдельные комочки, ядро становится рыхлым или, наоборот, более компактным. Иногда пигмент собирается в кучки, выталкивает из паразита. В толстых каплях распознавание таких подвергшихся деформации паразитов становится более трудным, а иногда и невозможным.
Серологическая диагностика малярии включает иммунофер-ментную агглютинацию, реакцию непрямой гемагглютинации и др., которые имеют наибольшее значение в неэндемичных районах.
3. В мазках крови и толстых каплях малярийные паразиты могут быть приняты за мерозоит, скопление бляшек может симулировать морулу. В препаратах, окрашенных по Романовскому, бляшки отличаются от мерозоитов по следующим признакам: мерозоит состоит из красного ядра и голубой цитоплазмы. Фон бляшки в мазке иногда окрашивается в бледно-голубой цвет, однако ее зернистость принимает красный цвет более светлого оттенка, чем у ядер мерозоитов.
В препаратах могут быть обнаружены также посторонние микроорганизмы, по форме напоминающие малярийных паразитов: грибки, одноклеточные водоросли, свободноживущие простейшие. Некоторые одноклеточные формы с компактным ядром в центре, окрашивающимся по Романовскому в ярко-красный цвет, симулируют гамонты тропической малярии. Их легко от-, лйчить по отсутствию пигмента. Свободноживущие простейшие с одним или несколькими жгутами могут быть приняты за стадию образования мужских гамет малярийного паразита.
4. Комаров вскрывают и определяют наличие ооцист на желудке и спорозоитов в слюнных железах. Ооцисты видны в нативных препаратах.
Незрелые ооцисты выглядят в таких препаратах как круглые гомогенные образования с пигментом, состоящим из нескольких глыбок.
В зрелых ооцистах видны хорошо сформировавшиеся споро-зоиты, тесно прилегающие друг к другу. Ряды спорозоитов в виде частокола располагаются по отношению друг к другу под разными углами, в результате чего ооциста приобретает мозаичный вид, при надавливании покровного стекла из ооцист выходят спорозоиты.
В слюнных железах спорозоиты расположены рядами перпендикулярно к протоку слюнных желез, а также в виде конгломератов. В секрете слюнных желез спорозоиты попадают в окружающую жидкость, в которой хорошо заметны вследствие их подвижности.
Вопрос 62. Возбудитель эпидемического сыпного тифа
/. Морфология, биология и антигенные свойства риккетсий
Дата добавления: 2015-09-03 | Просмотры: 718 | Нарушение авторских прав
1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 | 13 | 14 | 15 | 16 | 17 | 18 | 19 | 20 | 21 | 22 | 23 | 24 | 25 | 26 | 27 | 28 | 29 | 30 | 31 | 32 | 33 | 34 | 35 |
|