АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Методы гельминтолярвоскопии

Ларвоскопия (от лат. larva - личинка, греч. skopeo - смотрю) –сов-ть приемов обр-ки и иссл-я проб мат-ла с целью выявл-я личинок гельм-в и устан-я по ним возб-ля.

Гельминтоларвоскопию прим для диагностики диктиокаулеза и протостронгилидозов жвачных, стронгилятозов. и стронгилоидоза у с/х ж-х.

1. Гельминтоларвоскопия при диктиокаулезе

В тепл время года быстро развив-ся личинки стронгилят пищ тракта,что затруд иссл-е мат-ла. Поэт пробы фекалий после взятия сразу следует направлять в лабор-ю, чтобы иссл-ть до выхода из них личинок стронгилят.

Для дифф-ции диктиокаулюсов предложена методика окраски. К осадку в пробирке или на стекло доб-т 1-2 кап 0,1% вод р-ра метилен синего. Осадок встрях-т и ч/з 20-30 с. Микроскоп-т. Личинки диктиокаулюсов овец окраш-ся в ярко-сиреневый, а личинки диктиокаулюсов телят в светло-сиреневый цвет. Личинки др нематод ост-ся неокраш-ми, частицы корма окраш-ся в зелен цвет, а жид-ть - в голубой.

Личинки диктиокаулюсов овец расп в самых поверх-х слоях фекальн шариков. Поэт разрушать их стр-ру при закладке проб не следует. Личинки протостронгилюсов, мюллерий, напротив, в шариках фекалий овец распред-ся равномерно, на пов-ти их нах-ся незначит часть. Поэт при иссл-и на указанные гельминтозы предвар-но шарики фекалий следует разрушать. При этом эфф-ть иссл-й увел-ся в 10 раз.

2. Метод Вайда

Эта методика очень проста и применяется для диагностики диктиокаулезов жвачных, протостронгилеза, мюллериоза и цистокаулеза овец и коз.

На предметное или часовое стекло кладут несколько шариков свежевыделеиных фекалий овец и коз и добавляют небольшое количество воды (температура около 40°С). Если шарики помещают на предметное сткло, то достаточно несколько капель воды. Через 40 мин. шарики

удаляют, оставшуюся жидкость на стекле микроскопируют на наличие личинок нематод.

4.3. Метод Беумана-Орлова

Эта методика наиболее широко распространена и несложна по технике исполнения.. Для исследования по этому методу нужно иметь металлические или пластмассовые воронки (с верхним диаметром 10 см), маленькие гельминтологические пробирки (5-8 см высотой и 0,8-1 см диаметром), резиновые трубки (диаметром 0,7-0,8 см), штатив для воронок и зажимы.

Метод основан на следующем: личинки в теплой влажной среде активно выбираются из фекалий и, попав в воду, падают на дно.

Фекалии (5-10 г) кладут на металлическое сито или заворачивают в марлю и помещают в воронку. На нижний конец воронки надевают резиновую трубку длиной 10 см с зажимом, в свободный конец трубки вставляют пробирку. Собранный в таком виде аппарат Бермана ставят в штатив и заполняют теплой водой (40°С).

Аппарат с пробами от овец и коз оставляют при комнатной температуре на 3-6 часов, крупного рогатого скота и лошадей на 12 часов. За это время личинки нематод выползают из пробы в жидкость и опускаются до места перекрытия трубки зажимом. После истечения срока зажимы открывают и наполняют пробирки водой, в которой могут находиться личинки нематод. Пробирки ставят в штатив на 20 мин. для осаждения личинок. Затем воду из пробирок сливают до осадка. Осадок встряхивают на предметные стекла и микроскопируют. Личинки нематод подвижны и они легко обнаруживаются.

4.4. Метод Шильникоеа

Автор еще более упростил методику Бермана-Орлова. В этой методике используются обыкновенные медицинские градуированные стаканчики (емкостью 30 мл), имеющие форму усеченного конуса и сферическое дно. Выпуклость дна направлена кверху. Пробы фекалий завертывают в марлевые салфетки, раскладывают по стаканчикам и заливают теплой водой. Через 8-10 часов пробы осторожно вынимают, а жидкость отстаивают 10-15 мин Затем стаканчики медленно наклоняют, сливают воду до появления мути. Дают отстояться осадку жидкости 5-10 мин- После этого стаканчик медленно наклоняют и из него глазной пипеткой отсасывают верхний прозрачный слой воды до тех пор, пока в пипетку не начнет всасываться осадок на дне. При аккуратном отсасывании на дне стаканчика остается 0,5-1 мл жидкости. Этот осадок каплями наносят на предметное стекло и микроскопируют.

Эта методика заслуживает внимание практиков. Она проста и удобна для выполнения в любых условиях.

4.5, Культивирование личинок гельминтов

Его проводят с целью диагностики гельммнтозов вообще и дифференциальной диагностики в частности. Культивирование заключается в создании для яиц гельминтов, находящихся в фекалиях, благоприятных условий, чтобы личинки выросли до инвазионной стадии. По их морфологии определяют вил возбудителей.

У домашних и диких травоядных в пищеварительном факте часто паразитируют нема! оды из подотряда стронгилят Выделяющиеся с фекалиями яйца этих нематод трудно различимы. Поэтому методами овоскопии практически ставят только общий диагноз. Дифференциальный диагноз возможен по развившимся личинкам

4.5.1. Метод культивирования личинок

Порцию свежих фекалий животного в количестве 10-30 г помещают в стакан, закрывают куском стекла и оставляют в. термостате при 25-27°С на семь дней или при комнатной температуре на 10-12 дней. По мере подсыхания пробу фекалий слегка увлажняют водой. По истечении указанных сроков пробу фекалий исследуют по методу Бермана-Орлова или Шильникова.

Освобожденный от фекалий стакан заполняют водой, выдерживают 15-20 мин., затем верхний слой осторожно сливают, а осадок исследуют в часовом стекле под микроскопом.

11. Комбинированные методы

Эти методы основаны на комбинации совершенно противоположных приемов обработки проб фекалий, то есть седиментации и флотации. Поэтому их называют седиментационногфлотационными или, наоборот, флотационно-седиментационными методами.

Несмотря на усложнение приемов обработки проб ли методы являются более эффективными, на исследования расходуется значительно меньше флотационной жидкости, следовательно, они более экономичны

Благодаря комбинации противоположных приемов достигается обогащение осадка и поверхностной пленки яйцами гельминтов и удаление излишних посторонних частиц взвеси, которые мешают микросколированию. Применение двойного центрифугирования взвеси -вначале с водой, а затем с флотационным раствором способствует в первом случае быстрому осаждению яиц в результате воздействия центростремительной силы, а во втором - всплыванию их за счет воздействия центробежной силы.

Впервые комбинированный метод гельминтоовоскопии был предложен американским паразитологом Дарлингом (1911). В последующем на основе этого метода были разработаны различные методики и модификации.

3.3.1 Метод Дарлинга

• Пробу фекалий весом 3-5 г помещают в химическим стаканчик и тщательно размешивают с 18-20 мл воды, процеживают через сито в другой стаканчик, полученную жидкость переливают в центрифужную пробирку и центрифугируют в течение 1-2 мин. при 3000 об/мин. Затем надосадочную жидкость сливают, а к осадку добавляют флотационную жидкость, состояшую из равных частей глицерина и насыщенного раствора хлорида натрия. Плотность такой жидкости равна 1,205 при 18°С Содержимое взбалтывают и вновь центрифугируют в том же режиме при этом яйца всплывают, их снимают проволочной петлей с поверхностной пленки и микроскопируют на предметном стекле.

Этот метод применяют для диагностики аскаридатозов и других нематодозов у животных.

3.3.2. Метод Шербовича

В качестве флотационных жидкостей автором предложены три раствора из насыщенных солей: нитрата натрия, сульфата магния и тиосульфата натрия.

Пробу фекалий величиной с грецкий орех кладут в стакан, добавляют 40-60 мл воды и тщательно размешивают до появления равномерной взвеси. При постоянном помешивании взвесь процеживают через металлическое сито или марлю в чистый стакан. После 5 минутного отстаивания надосадачную жидкость сливают. На дне оставляют такое количество взвеси, которое бы вместилось в центрифужную пробирку и центрифугируют 1-2 мин. при 3000 об/мин., после чего всю жидкость до осадка сливают, а к осадку добавляют флотационный раствор нужной плотности. Осадок взбалтывают до получения взвеси и снова центрифугируют 1-2 мин. при 1500 об/мин. После этого петлей снимают пленку с жидкости, переносят на предметное стекло и микроскопируют.

При диагностике метастронгилеза свиней применяют насыщенный раствор сульфата магния (0,92 кг MgSO4 на 1 л воды, р=1,28). При этом выявляются возбудители и других нематодозов, в частности трихсмефалеза, аскаридатозов, стронгилятозов пищеварительного тракта различных животных.

Насыщенные растворы тиосульфата натрия (1,75 кг Na2S2O3 на 1 л воды, р=1,40) и нитрата натрия (1 кг NaNO3 на 1 л воды, р=1,38) рекомендуются для диагностики макракантаринхоза свиней, а также всех перечисленных гельминтозов разных животных. С любым из растворов методику можно применять для диагностики тениидозов собак и для диагностики спируратозов (тетрамероза, стрептокароза, эхинуроза) и полиморфоза уток.

Недостатком этого метола со всеми тремя флотационными жидкостями является то, что с его помощью не удается диагностировать тяжелые яйца трематод, в частности описторхоза, фасциолеза и парамфистоматоза.

3.3.3. Метод Котельникова и Вареничева

Яйца описторхисов очень мелкие и тяжелые (удельный вес 1,38-1,46). В связи с этим обычные флотационные растворы непригодны. В качестве флотационной жидкости в этой методике применяют насыщенный раствор хлорида цинка (2 кг ZnCl2 на ] л воды) с плотностью 1,82. Техника проведения этого метода аналогична как при методе Щербовича.

Метод Котел ьникова и Вареничева предложен для диагностики описторхоза плотоядных, но он пригоден и для гельминтоовоскопии нематод, цестод и других трематод у животных.

Недостатком этого метода является то, что из-за большого удельного веса флотационной жидкости (1,82), вместе с яйцами гельминтов поднимаются на поверхность после центрифугирования и не переваренные частицы корма, что затрудняет просмотр материала и в конечном итоге влияет на диагностическую эффективность этой методики.

Разработано также много других модификаций комбинированного метода гельминтоовоскопии. В качестве флотационной жидкости предложены насыщенные растворы из следующих' солей: нитрата аммония-1,5 кг NH4NO3 на 1л воды, р=1,30 (метод Котельникова и Хренова), углекислого калия - 0,6 кг K2CO3 на 1 л воды, р=1,41 (метод Вольфа), сульфата цинка - 0,45 кг ZnSO4 на 1 л воды, р=1,39 (метод Вишняускаса).

другие малоэффектгаигы при трематодозах. По этой причине они также не нашли широкого применения на практике.

3.3.4. Модифицированный метод (Латыпов Д.Г.. Лутф ул л ин MX_J

Горшкова Г.Г.)

На кафедре паразитологии КГАВМ разработана новая модификация комбинированного метода гельминтоовосколии. Техника проведения ее аналогична методу Щербовича. В качестве флотационной жидкости применяется смесь из трех ингредиентов — насыщенных солей хлорида цинка, хлорида натрия и сахара.

Вначале готовят отдельно базовые насыщенные растворы из указанных солей: 1 - насыщенный раствор хлорида цинка (2 кг ZnCl2 на 1 л воды, р^з=1,82), 2 - насыщенный раствор хлорида натрия (0,42 кг NaCl на 1 л воды, р=1,19), 3 - сахара (1,67 кг С12Н22О11 на 1 л воды, р=1,28). Для получения комбинированной флотационной жидкости смешивают эти растворы в соотношении 2:1:1. Плотность такого раствора составляет 1,53.

Модифицированный комбинированный гельминтоовоскопический метод КГАВМ является универсальным и позволяет диагностировать одновременно яйца нематод, цестод и трематод. Диагностическая эффективность метода высокая. По результативности он превосходит все вышеперечисленные методы гельминтоовоскопии животных. Поверхностная пленка после центрифугирования с флотационной жидкостью остается чистой, нанесенные капли не подвергаются кристаллизации в течение 3-х часов.

3.3.5 Экспресс-метод групповой гельминтоовоскоггии животных (Латыпов Д.Г., Горшкова Г.Г.)

С увеличением объема диагностических исследований, существующие лабораторные методы распознавания гельминтозных заболеваний, основанные на ручном труде не удовлетворяют практические запросы. Производительность труда гельминтоовоскопических исследований в течение рабочего дня не превышает 40-50 анализов (в среднем 10 мин. на 1 пробу).

Вместе с тем, из-за низкой диагностической эффективности гельминтоовоскопических методов при трематодозах (фасциолез, дикроцеллоз, парамфистоматоз и др.) не представляется возможным индивидуальная дегельминтизация животных, т.к. большинство инвазированных остаются не выявленными. По этой причине, при обнаружении в гуртах инвазированных животных в практических условиях рекомендуется применять,групповую дегельминтизацию.

Исходя из вышеизложенного, экспресс-метод групповой гелъминтоовоскопии жмиоп-пих, как пешюляюишй в минимальном отроке времени определять паразитологическую ситуацию в стадах или отарах заслуживает особое внимание практиков. Эта методика удобна также при контроле диагностической эффективности дегельминтизации, особенно когда у животных встречаются ассоциативные формы инвазии.

С каждой пробы фекалий (от 2-х до 100 проб) с помощью пинцета кладут примерно 1 г фекалий в стакан или банку емкостью 0,5 л. Затем взятые пробы заливают небольшим количеством воды и тщательно размешивают пинцетом или палочкой, после при постоянном помешивании добавляют воду порциями до объема 0,5 л. Взвесь фильтруют через металлическое сито с размером ячеек 0,5x0,5 в другой стакан-или банку емкостью 0,75 л. Оставшийся на сите осадок промывают

200-250 мл воды. После взвесь снова фильтруют через сито с размером ячеек 0,25x0,25 в чистый стакан или банку емкостью 1 л. Оставшийся на сите осадок повторно промывают 200-250 мл воды. Двухкратно отфильтрованную взвесь отстаивают в течение 10 мин., надосадочную жидкость осторожно сливают, оставляя над осадком лишь небольшое ее количество. Таким образом, осадок промывают 3-5 раз обычным сливом воды. После последнего промывания примерно 50 мл осадка наливают в центрифужные пробирки и центрифугируют 2 мин. при 1500 об/мин. Затем надосадочную жидкость сливают, а к осадку добавляют флотационную смесь из трех ингредиентов (из насыщенных солей хлорида цинка, хлорида натрия и сахара в соотношении 2:1:1). Техника изготовления комбинированной флотационной жидкости аналогично как в модифицированном методе (3.3.4.). Осадок взбалтывают до получения взвеси и снова центрифугируют в том же режиме. После центрифугирования пипеткой осторожно доливают флотационный раствор в центрифужные пробирки, чтобы получился выпуклый мениск, и сверху покрывают его предметным стеклом на 5 мин. Затем стекло быстро отнимают, чтобы жидкость не стекала, повертывают соприкасающей стороной кверху и микроскопируют

12.. Флотационные методы

Все методы флотации (от англ. Jlolalhion - всплывание) основаны на единой физической закономерности, обеспечивающей всплытие яиц гельминтов в насыщенных, растворах солей. Для этого рекомендуются растворы различных солей, но предпочтительнее-дешевых и повсеместно доступных.

Отдельные методы флотации называются по именам авторон, впервые предложивших ту или иную соль для приготовления флотационной жидкости.

3.2.1. Метод Фюллёборна

Для этой методики- нужен насыщенный раствор поваренной соли, который готовят путем кипячения 400-420 г соли на 1 л воды.

Пробу фекалий весом 3-5 г помещают в стакан, заливают небольшим количеством флотационной жидкости, тщательно размешивают, затем добавляют 50-100 мл этого раствора и процеживают через металлическое сито или марлю в один спой в сухой, чистый стакан. Взвесь отстаивают 40-60 мин., затем прикосновением петли снимают поверхностную пленку, переносят ее на предметное стекло для микроскопирования.

Этот метод в отечественной лабораторной практике может применяться для диагностики аскаридоза, стронгилятозов и стронгилоидоза свиней, неоаскаридоза, стронгилятозсж стронгилоидозов, мониезиоза,. тизанизиоза, авите;и!иноза жвачных, параскаридоза, стронгклятозов кишечника лошадей

Плотность насыщенного раствора поваренной соли невысокая -1,18-1,20. Тогда как удельный вес яиц аскариса равен 1,10-1,14_: а у неошюдотворенных яиц - 1,26, а трихоцефалюса - 1,16-1,22. Поэтому насыщенный раствор поваренной соли способен флотировать только масть яиц аскарид и трихоцефалюсов, по этой причине диагностическая эффективность данной методики невысокая. Кроме того, раствор на предметном стекле быстро кристаллизуется.

3.2.2. Метод Котельникона-Хренова с аммиачной селитрой

Технология этого метода такая же, как и метода Фюллёборна, но в качестве флотационной жидкости применяется нитрат аммония (техническая гранулированная аммиачная селитра) используемый для удобрений. При приготовлении флотационной жидкости и на 1 л кипящей воды растворяют 1,5 кг селитры. Плотность раствора - 1,32. Поверхностную пленку можно микроскоиировать через 10 мин.

Данная методика обладает высокой диагностической эффективностью. Кроме того, гранулированная аммиачная селитра, применяемая для флотационного раствора - общедоступная дешевая соль и производится в огромном количестве как минеральное удобрение.

В лабораторной практике эта методика широко применяется для выявления яиц аскаридоза, трихоцефалеза, эзофагостомоза и метастронгилеза свиней, неоаскарндоза, стронгилятозов пищеварительного тракта, трихоцефалеза, авителлиноза жвачных, параскаридоза и стронгилятозов лошадей, токсокароза и токсаскаридоза собак, кошек, песцов, лисиц и других плотоядных, стронгилоидоза животных разных видов, аскаридиоза и гетеракидоза кур.

Недостатком этого метода является то, что флотационная жидкость из аммиачной селитры не способна поднять тяжелые яйца трематод (фасциол, парамфистом, описторхисов и др.), т.к. удельный вес этих яиц больше чем 1,3 и раствор быстро кристаллизуется.

3.2.3. Метод Котельникова-Хренова с нитратом свинца

Техника проведения этого метода аналогична методу Фюллёборна. В качестве флотационной жидкости при этом используется насыщенный раствор нитрата свинца из расчета 0,65 кг на 1 л воды. Плотность этой жидкости достигает 1,5. Применение такого флотационного раствора дает возможность диагностировать широкий круг возбудителей гельминтозов и с его помощью легко выявляются и тяжелые яйла фасциол (удельный вес 1,31-1,35), парамфистоматат (1,33-1,38), дикроцелиумов (1,3) и еще быстрее яйца с меньшим удельным весом, аскаридат, стронгилят, метастронгшпосов, трихоцефалят, стронгилоидесов, аноплоцефаяят (мониезий), тениат, скребней (макраканторинхусов), а также капсулы тизаниезий.

Недостатком данной методики является дороговизна нитрата свинца. Вместе с тем, при работе данным препаратом петли покрываются белым налетом, (нитрат свинца входит в химическую реакцию с металлами), яйца трематод сильно деформируются, что создает определенные трудности при исследовании. Кроме того, используемый препарат соль тяжелого металла—свинца, который является высокоядовитым веществом, что создает опасность для здоровья исследователей и окружающих, отработанные растворы данного препарата запрещено сливать в канализационные стоки. По совокупности этих причин, указанная методика не нзлта широкого применения в практике.

Кроме того, в качестве флотационных жидкостей авторами были предложены насыщенные растворы из следующих солей: нитрата натрия -1 кг препарата на I л воды, р - 1,38 (метод Калантаряна), тиосульфата натрия - 1,75 кг препарата на 1 л воды, р - 1,40 (метод Болховитинова), карбоната калия - 0,6 кг на 1 л воды, р - 1,41 (метод Вольфа). Однако все эти методы по тем или иным причинам также не нашли широкого применения в практике.

Дата добавления: 2015-09-03 | Просмотры: 1153 | Нарушение авторских прав