АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Для выявления антител у инфицированных ВИЧ применяют также ряд других методов: иммунофлуоресценцию, радиоиммунопреципитацию, агглютинацию

Метод непрямой иммунофлуоресценции относительно прост при наличии люминесцентного микроскопа и квалифицированного персонала, способного проводить учёт результатов. В качестве антигенов в этой реакции используются различные клеточные линии, инфицированные ВИЧ (MOLT, H9, СЕМ, HUT-78 и др.).

Радиоиммунопреципитация является наиболее чувствительным методом выявления антител к ВИЧ и может использоваться как метод экспертной диагностики при неопределенных результатах ИБ. В основе метода лежит использование белков ВИЧ, меченных радиоактивным йодом. Не получил широкого распространения из-за необходимости применения радиоактивных материалов и специального оборудования. К тому же для постановки реакции нужно культивировать инфицированные вирусом клетки. Поэтому радиоиммунопреципитация применяется преимущественно в научно-исследовательских лабораториях.

Метод агглютинации является одним из наиболее простых, чувствительных и специфичных для определения антител к ВИЧ. Он не требует специального оборудования, необходим лишь некоторый опыт в интерпретации результатов.

II. Обнаружение антигенов ВИЧ в исследуемом материале основано главным образом на тех же принципах, что и выявление антител, но с некоторыми модификациями. В связи с низким содержанием антигенов в крови, а также тем, они циркулируют в виде иммунных комплексов чувствительность составляет, в среднем, 60%. Поэтому иммуноферментные диагностикумы на антигены ВИЧ, в основном, используются только для экспериментальных и научно-исследовательских целей.

III. Выделение вируса.

Метод культуральной диагностики ВИЧ-инфекции широко не используется, хотя обладает высокой специфичностью. Он требует соблюдения особых условий безопасности, дорогостоящих и дефицитных сред, значительных затрат времени, и, кроме того, по данным некоторых исследователей, чувствительность метода колеблется от 25 до 75%.

Молекулярно-биологические методы. Успехи в развитии молекулярной биологии позволили вывести прямое выявление возбудителей инфекций на принципиально новый качественный уровень. Полимеразная цепная реакция (ПЦР) благодаря высокой чувствительности, специфичности, воспроизводимости в настоящее время широко используется в биотехнологии, генетике, судебной медицине, для диагностики генетических и вирусных заболеваний, в том числе и ВИЧ-инфекции. Данный метод позволяет обнаружить геном ВИЧ, встроенный в геном пораженных лимфоцитов. Это возможно при наличии вирусных генов всего в 1 из 5000 клеток, даже в период отсутствия в крови антител или при недостаточном их уровне для обнаружения существующими стандартными методами. Так как методом ПЦР определяют не антитела к продуктам генов ВИЧ, а непосредственно генетические структуры, он незаменим при диагностике ВИЧ-инфекции в серонегативный период, у детей, рожденных ВИЧ-инфицированными матерями (персистенция материнских антител у ребенка может достигать 15 мес.), при неопределенных результатах ИБ, одновременной диагностике множественных инфекций, встречающихся при СПИДе, дифференциальной диагностике между ВИЧ-1, ВИЧ-2 и другими вирусными заболеваниями, определении соотношения между клеточным и внеклеточным вирусом, при испытаниях на животных химиопрепаратов и вакцин против СПИДа, исследовании банков крови и препаратов из крови.

В качестве материала для исследования в ПЦР может быть использована ДНК, выделенная не только из свежеполученных клеток и тканей, но и из замороженных, высушенных или фиксированных препаратов, имеющих частично разрушенные нуклеиновые кислоты.

Главным недостатком метода является дороговизна оборудования и реактивов для его проведения, но в конечном счете применение ПЦР экономически выгодно, так как значительно снижает количество стадий и продолжительность исследований на ВИЧ-инфекцию. Метод ПЦР удобен для изучения и диагностики ВИЧ-инфекции, особенно в тех случаях, когда серологические тесты или культивирование вируса затруднены или малоэффективны. Вместе с тем нельзя не отметить возможность получения при проведении ПЦР ложноположительных реакций.

Таким образом, современные методы лабораторной диагностики ВИЧ-инфекции позволяют с достаточной степенью надежности проводить исследования по определению антител к ВИЧ и идентификации его компонентов. Однако постоянная изменчивость вируса, не имеющая аналогов по сравнению с изменчивостью других известных вирусов человека, создает риск получения в исследованиях ложноотрицательных результатов. Поэтому используемые в практической работе для диагностики ВИЧ-инфекции методы требуют постоянного совершенствования.

IV. Выявление иммунологических нарушений. Известно, что в основе развития СПИДа лежит, в первую очередь, разрушение Т-лимфоцитов-хелперов, маркируемых моноклональными антителами ОКТ4+ (CD4). В связи с этим проведение диагностики и наблюдение за прогрессированием заболевания невозможно без контроля субпопуляции Т-хелперов, который наиболее удобно осуществлять с помощью лазерного клеточного сортировщика. При слабо выраженной ВИЧ-инфекции количество Т-лимфоцитов - чрезвычайно вариабельный показатель. В целом, снижение числа клеток OKT4+ (абсолютное и относительное) обнаруживается у лиц, ВИЧ-инфицирование которых произошло не менее года назад, С другой стороны, на ранних стадиях инфекции нередко оказывается резко повышенным число OKT8+ (CD8, Т-супрессоры) как в периферической крови, так и в увеличенных лимфоузлах.

При выраженном СПИДе абсолютное большинство больных имеет сниженное общее число Т-лимфоцитов (менее 1000 в 1 мкл крови, в том числе лимфоцитов OKT4+ - менее чем 22 в 1 мкл, тогда как абсолютное значение содержания ОКТ8+ остаётся в пределах нормы). Соответственно, резко снижается соотношение ОКТ4+/ОКТ8+. Ответ Т-лимфоцитов in vitro на стандартные антигены и митогены снижается в строгом соответствии с относительно сниженным числом OKT4+.

Для поздних стадии СПИДа характерны общая лимфопения, нейтропения, тромбоцитопения (соответственно, снижение числа лимфоцитов, нейтрофилов и тромбоцитов), анемия. Эти изменения могут быть следствием центрального угнетения кроветворения за счёт поражения кроветворных органов вирусом, а также - аутоиммунного разрушения клеточных субпопуляции на периферии. Кроме того, для СПИДа характерно умеренное увеличение количества гамма-глобулинов с доминирующим увеличением содержания IgG. Больные с выраженными симптомами СПИДа нередко имеют повышенный уровень IgA. На некоторых стадиях заболевания существенно повышается уровень таких маркёров СПИДа, как β1-микроглобулин, кислотостабильный α-интерферон, α1-тимозин. То же происходит с секрецией свободного неоптерина — метаболита макрофагов. Пока не представляется возможным оценить относительную значимость каждого из перечисленных тестов, число которых постоянно возрастает. Поэтому их следует рассматривать во взаимодействии с маркёрами ВИЧ-инфекции как иммуновирусологического, так и цитологического характера.

Для клинического анализа крови характерны лейкопения, лимфопения (соответственно, снижение числа лейкоцитов и лимфоцитов). Важный иммунологический симптом СПИДа - аллергия, выявляющаяся при постановке разнообразных кожно-аллергических проб, например, с туберкулином. При подозрении на иммунную недостаточность ставят кожный тест гиперчувствительности замедленного типа с туберкулином (реакция Манту). В случае отрицательного результата исследование продолжают и определяют реактивность лимфоцитов в культуре на конканавалин А или фитогемагглютинин. Если индекс стимуляции клеток > 15 при положительной туберкулиновой пробе, подозрение снимается. При отрицательной реакции на туберкулин и индексе стимуляции <15 диагностический поиск продолжают. В последующем определяют ОКТ4+ клетки (CD4, Т-хелперы). Если их меньше 400 в 1 мкл цельной крови и соотношение ОКТ4+ к ОКТ8+ равно 1, то вполне обоснованно ставится диагноз СПИДа. При содержании Т-хелперов >400 в 1 мкл крови и соотношение ОКТ4/OKT8 (вспомогательных клеток и супрессоров) более 1, диагноз ставится под сомнение.

Дата добавления: 2015-09-18 | Просмотры: 592 | Нарушение авторских прав