АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

СОВРЕМЕННЫЕ МЕТОДЫ ИММУНОЛОГИЧЕСКОЙ И ГЕНЕТИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ

При болезнях с длительным инкубационным периодом и разнообразной клинической симптоматикой, одной из которых является СПИД, исключительно велика роль лабораторных методов диагностики. Существует несколько методов лабораторной диагностики СПИДа: выделение вируса, выявление антител к ВИЧ, обнаружение антигенов или других компонентов ВИЧ, выявление иммунологических нарушений.

I. Выявление антител к ВИЧ в сыворотке крови - наиболее распространенный прием в лабораторной диагностике ВИЧ-инфекции. Хотя положительный результат исследования при определении антител к ВИЧ не является окончательным критерием оценки состояния и прогноза болезни, он дает возможность с достаточной долей вероятности установить факт инфицирования. Данный вид диагностики обладает достаточно высокой чувствительностью, однако далеко не 100% специфичен из-за возможности получения ложноположительных и ложноотрицательных результатов. Это происходит из-за того, что в инфицированном организме на разных стадиях болезни продуцируются и персистируют антитела к различным структурным и регуляторным белковым компонентам ВИЧ (описание последних см. выше). ля выявления антител к ВИЧ чаще всего используют метод иммуноферментного анализа (ИФА). При проведении ИФА в 3 — 5% случаев возможны ложноотрицательные результаты - если инфицирование произошло относительно недавно и уровень антител еще очень низкий, или в терминальной стадии болезни, характеризующейся тяжелым поражением иммунной системы с глубоким нарушением процесса антителообразования. Поэтому при наличии данных, свидетельствующих о контакте с инфицированными ВИЧ обычно проводят повторные исследования через 2 - 3 мес. Но даже при повторных исследованиях удается выявить не всех инфицированных лиц, так как существуют сероотрицательные носители ВИЧ, т.е. те, у которых антитела не вырабатываются в течение очень длительного времени. В США количество таких ложноотрицательных исследований составляет около 1% в год. Причиной ложноположительных результатов ("обнаружению" ВИЧ там, где его нет) при постановках ИФА является наличие у пациентов аутоиммунных процессов, антител к ревматоидному фактору, вирусу Эпштейна - Барр, молекулам главного комплекса гистосовместимости. Частота ложноположительных результатов при использовании различных тест-систем (разных диагностических наборов) колеблется от 0,02 до 0,5%. Число ошибочных результатов можно значительно снизить при использование в качестве антигена рекомбинантных белков ВИЧ. Чувствительность и специфичность тест-систем для ИФА в этом случае можно сравнить с иммунным блоттингом.

Иммунный блоттинг (иммуноблот, Western Blot, вестерн-блот) - сочетает в себе иммуноферментный анализ (ИФА) с предварительным электрофоретическим переносом на нитроцеллюлозную полоску (стрип) антигенов вируса. Иммуноблот (ИБ) включает в себя несколько стадий. Подготовка стрипа. Предварительно очищенный и разрушенный до составных компонентов вирус иммунодефицита (ВИЧ) подвергается электрофорезу, при этом входящие в состав ВИЧ антигены разделяются по молекулярному весу. Затем методом блоттинга (аналог выдавливания на "промокашку" избытка чернил) антигены переносят на полоску нитроцеллюлозы, которая отныне содержит невидимый пока глазом спектр антигенных полос, характерный для ВИЧ. Исследование пробы. На нитроцеллюлозную полоску наносится исследуемый материал (сыворотка, плазма крови пациента и т.п.), и если в пробе есть специфические антитела, то они связываются со строго соответствующими им (комплиментарными) антигенными полосами. В результате последующих манипуляций результат этого взаимодействия визуализируется - делается видимым. Трактовка результата. Наличие полос в на определённых участках нитроцеллюлозной пластины подтверждает присутствие в исследованной сыворотке антител к строго определённым антигенам ВИЧ.

ВИЧ Western Blot- тест-система фирмы Organon Teknika для определения антител к ВИЧ в сыворотке и плазме крови. Полоски-стрипы из блота. Чтение результатов. В положительном контроле и исследуемом образце присутствуют полосы: gag p17, p24, p55 (оболочка) pol p31 (эндонуклеаза), p51, p65 (обратная транскриптаза) env gp 41 (трансмембранный белок)   gp120, gp 160 (поверхностные структуры) Полоска А - Положительный контроль Полоска В - Слабоположительный контроль Полоска С - Отрицательный контроль Полоска D - Положительный образец (обнаружено присутствие антител к ВИЧ-1)

В настоящее время ИБ является основным методом для подтверждения наличия вирусспецифических антител в исследуемой сыворотке. В некоторых случаях ВИЧ-инфекции, до развития сероконверсии, специфические антитела более эффективно выявляются методом ИБ, чем ИФА. При исследовании методом ИБ обнаружено, что чаще всего в сыворотках больных СПИДом выявляются антитела к gp 41, причем обнаружение р24 у лиц, обследуемых с профилактической целью, требует дополнительных исследований на наличие у них ВИЧ-инфекции. Тест-системы для ИБ на основе рекомбинантных белков, полученных путем генной инженерии, оказались более специфичными, чем обычные системы на основе очищенного вирусного лизата. При использовании рекомбинантного антигена формируется не диффузная, а четко выраженная узкая полоска антигена, легко доступная для учета и оценки.

Всемирная Организация Здравоохранения (ВОЗ, 1991) рекомендует следующую оценку результатов исследований, проведенных методом ИБ:

Положительный результат — обнаружение в сыворотке антител к двум вирусным белкам из группы env с наличием или отсутствием белков — продуктов других структурных генов (gag, pol);

Отрицательный результат — отсутствие антитела к вирусспецифическим белкам;

Неопределенный результат — обнаружение в сыворотке антител к белкам из групп gag, pol.

Как правило, неопределенная реакция в ИБ связана с наличием белков — продуктов экспрессии гена gag ВИЧ-1 р15/17, р24 и р55, что может свидетельствовать как о ложноположительной реакции, так и о возможности инфицирования ВИЧ-1.

Дата добавления: 2015-09-18 | Просмотры: 676 | Нарушение авторских прав