АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Люминесцентная (флуоресцентная) микроскопия в вирусологии

Вирусология. Тема 3

В люминесцентной микроскопии, используется явление фотолюминесценции т.е. способность объекта светиться при пропускании через него пучка ультрафиолетовых лучей.

Источниками ультрафиолетовых лучей в люминесцентном микроскопе являются ртутно-кварцевые лампы. Для проведения люминесцентной микроскопии в настоящее время выпускаются люминесцентные микроскопы серии ЛЮМАМ, которые должны быть установлены в специальном затемненном помещении. При люминесцентном исследовании перед микроскопией на мазки наносят специальное нефлуоресцирующее масло.

Некоторые объекты, рассматриваемые при люминесцентной микроскопии, могут давать собственную люминесценцию (аутолюминесценцию), как, например, грибки-возбудители микроспории; такие объекты смотрят без всякой дополнительной окраски. Однако бактерии и вирусы аутолюминесценцией не обладают, поэтому мазки надо обрабатывать либо специальными красками (флуорохромы), либо мечеными (флуоресцирующими) антителами. В связи с этим все методы обработки мазков для люминесцентной микроскопии можно разделить на две группы;

1. Метод флуорохромирования (МФ). 2. Методы флуоресцирующих антител (МФА)

Метод флуорохромирования (МФ)

По своей технике этот метод почти ничем не отличается от методов обычной окраски мазков, применяемых при световой, обычной микроскопии. Для этих целей используют анилиновые красители, но краски берут такие, которые обладают явлением фотолюминесценции, т.е. светятся в момент облучения их ультрафиолетовыми лучами. Такие краски называются флуорохромами, а окраска ими - методом флуорохромирования. К флуорохромам относят такие красители, как аурамин, корифосфин, родамин, трипафлавин, риванол, флуоресцеина изотиоцианат (ФИТЦ) и другие. Разведения для большинства красителей обычно готовят 1:1000, 1:10000.

Для исследований можно готовить мазки из патматериала, мазки-отпечатки, гистосрезы, зараженные культуры ткани, выращенные на покровных стеклах.

В мазках-отпечатках при вирусных инфекциях наблюдают свечение в ядрах или цитоплазме пораженных вирусом клеток в виде различных гранул и телец-включений, а если клетка поражена вся и антиген содержится как в ядре, так и в цитоплазме, может светиться вся клетка. Непораженные вирусом клетки обычно не светятся и создают темный фон.

Метод флуорохромирования широко применяется при диагностике бактериальных болезней, и вирусных – на наличие в исследуемом материале телец-включений.

Методы флуоресцирующих антител (МФА)

МФА основаны на принципе специфического взаимодействия антигена со специфическими антителами.

Антигены – это генетически чужеродные макроорганизму вещества белковой природы, которые при попадении или введении в организм (парэнтерально) обладают способностью вызывать образование специфических антител. В вирусологии антигенами являются возбудители – вирусы и их белки.

Дата добавления: 2015-09-27 | Просмотры: 2066 | Нарушение авторских прав