АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Радиоиммунный анализ

В 1960 г. Ялод и Берсон разработали и внедрили в практику метод определения концентрации инсулина в плазме крови человека с использованием радиоактивной метки; он оказался приемлемым для количественного определения и других гормонов.

Эти исследования показали необычайно высокую чувствительность метода, позволяющего выявить незначительные количества инсулина, меченого радиоактивным йодом, по их связыванию с соответствующими антителами.

В дальнейшем предложенный радиоиммунный анализ (РИА) навел широкое применение в иммунологических исследованиях с целью выяв­ления различных по природе антигенов или антител.

Характерной особенностью радиоиммунологическйх методов явля­ется использование антигенов или антител с радиоактивной меткой. Для получения последних радиоактивные изотопы (14с, 125J, Зн, 32р и другие) вводятся в состав антигенов или антител.

На сегодняшний день существует много вариантов постановки реакции с мечеными радиоизотопами антигенами или антителами.

С целью серодиагностики возможно применение прямого варианта РИА.

Aг * I¹³⁵ + Aт →

радиоактивный стандартный исследуемая

диагностикум с известной сыворотка

радиоактивностью (R₁)

Aг * I¹³⁵ ─ Aт + Aг * I¹³⁵

комплекс надосадочная жидкость

с радиоактивностью (R₂)

Образовавшийся комплекс отделяют от оставшегося свободным меченого антигена (R₂). Затем с помощью счетчика определяют радиоактивность несвязавшегося меченого антигена. Если R₁ › R₂, реак­ция считается положительной. Разница R₁ - R₂ указывает на точное количество содержание искомого антитела.

С целью сероидентификации применяют конкурентный РИА. При этом в реакции участвуют стандартный меченый антиген и определяемый немеченый антиген, которые как бы конкурирует за места связывания специфических антител стандартной иммунной сы­воротки до наступления момента достижения равновесия всех компо­нентов реакционной смеси.

Для оценки полученных результатов отде­ляют образовавшиеся комплексы антиген-антитела (фильтрованием, центрифугированием) и с помощью счетчика определяют их радиоак­тивность. Концентрация исследуемого антигена в анализируемых про­бах устанавливается путем вычисления радиоактивности анализируе­мых проб и в контрольных образцах, где используются стандартные антигены и антитела.

1 проба:

Aг * I^{135 +} Aт → Aг * I¹³⁵ ─ Aт

меченый стандартный специфическая комплекс с радио

диагностикум иммунная сыворотка активностью (R₁)

2 проба:

Aг + Aт + Aг * I¹³⁵

исследуемый специфическая меченый стандартный

неизвестный диагностическая диагностикум

иммунная сыворотка

Aг ─ Aт ─ Aг * I¹³⁵ + Aг * I¹³⁵

комплекс с радиоактив- свободный, несвязавшийся,

ностью (R₂) отмывается

Образовавшиеся комплексы отделяют от свободного, оставшего­ся несвязанным меченого антигена. Затем с помощью счетчика опре­деляют и сравнивают радиоактивности образовавшихся комплексов R₁ и R₂.Если R₁ › R₂ - реакция считается положительной. Разница R₁ - R₂ указывает на точное количественное содержание искомого антигена.

Недостатки ИФА - сложности, связанные с получением высокоочищенных антигенов и с необходимостью создания безопасных условий при работе с радиоактивными веществами.

Иммуноблотинг

Иммуноблотинг - метод идентификации антигенов или антител сочетающий в себе:

а) электрофоретическое разделение сложной смеси биологических макромолекул (антигенов или антител) с помощью электрофореза в полиакриламидном геле;

б) перенос разделенных белковых макромолекул из геля на твердую подложку (агарозу, диазобумагу, нитроцеллюлёзный фильтр);

в) выявление на твердой подложке перенесенных белков с по­мощью ИФА, РИА, РИФ.

Данный метод позволяет получать результаты, отличающиеся вы­соким качеством с точки зрения разрешающей способности, чувстви­тельности и достоверности.

Приведенные данные свидетельствует о большом разнообразии серо­логических методов исследования, применяемых при диагностике бакте­риальных инфекции. Значение этих методов для практической медицины трудно переоценить. Возможности серологии чрезвычайно велики. Серологические реак­ции помогают установить этиологию заболеваний, изучить патогенез, позволяют проследить какой путь проходят возбудители в организме больного и какова динамика накопления специфических антител; они с успехом применяются для решения важнейших практических задач профлактики и терапии многих заболеваний

.

Дата добавления: 2016-03-26 | Просмотры: 699 | Нарушение авторских прав