АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Определение активности каталазы по А. Н. Баху и А.И. Опарину

Прочитайте:
  1. C. повышение цитотоксической активности Т-лимфоцитов
  2. E. повышение ферментативной активности лизосом
  3. E. снижения активности фермента глутатионпероксидазы
  4. I. Определение верхушечного толчка.
  5. I.1. Определение понятия
  6. II) Энзимологическое определение количества метаболитов.
  7. III. Виды реактивности
  8. IV. Роль реактивности организма в возникновении и развитии опухолевого процесса.
  9. IV.1. Дыхательная недостаточность. Определение понятия
  10. А) Определение силы неизвестного анатоксина по известной антитоксической сыворотке

 

Принцип метода основан на учете изменения количества пероксида водорода, расщепляющегося под действием этого фермента, который определяется путем титрования перманганатом калия. Реакция идет по уравнению:

 

2 КМnО4 + 5 Н2О2 + Н2SО4 ¾® 4 КНSО4 + 2 МnSО4 + 8 Н2О + 5О2

 

О количестве перекиси водорода, разрушенной ферментом, судят по разности количеств мл 0,1 н. раствора КМnО4, израсходованных для титрования в контрольном и рабочем опытах.

Ход работы. Отбирают две пробы прозрачного фильтрата или центрифугата по 20 мл каждая (опытная и контрольная); последнюю кипятят 5 минут на сетке для инактивации фермента.

К пробам прибавляют по 20 мл дистиллированной воды, по 3 мл 1%–го пероксида водорода, предварительно нейтрализованного 0,1 н. раствором NаОН, и оставляют на 30 минут при комнатной температуре. Затем к пробам прибавляют по 5 мл 10% –ной серной кислоты и оставшийся пероксид водорода титруют 0,1 н. раствором марганцовокислого калия. Об активности каталазы судят по количеству миллиграммов перекиси водорода, которое разрушилось в течение 30 минут ферментом, содержащимся в 1 г исследуемого материала.

Активность каталазы Ек определяют по формуле:

(Vk - Vo) . 1,7

Еk = ¾¾¾¾¾¾, (2)

n

где Ек – активность каталазы;

Vk – количество 0,1 н. раствора КМnО4, израсходованного для титрования контроля, мл;

Vo – количество 0,1 н. раствора КМnО4, израсходованного на титрование рабочего опыта, мл (1 мл 0,1 н. раствора КМnО4 эквивалентен 1,7 мг Н2О2);

n – навеска исследуемого материала в титруемой пробе, г.

Материалы и реактивы: 1%–ный раствор пероксида водорода; 0,1 н. раствор марганцовокислого калия; 10 %–ный раствор серной кислоты; вытяжка из муки или другого растительного материала (см. Приложение В, п.8).

 

Дата добавления: 2015-08-06 | Просмотры: 753 | Нарушение авторских прав


1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 | 13 | 14 | 15 | 16 | 17 | 18 | 19 |

При использовании материала ссылка на сайт medlec.org обязательна! (0.003 сек.)