АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Цвет колоний, форма, число колоний, распределение колоний на чашке.

6. Как вы могли бы с помощью двух чашек c LB-агаром, E. coli и ампициллина определить оказывает ли ампициллин эффект на рост на E. coli?

Нужно рассеять равные количества клеток на две чашки, одна из которых содержит просто среду LB, а другая – среду LB с ампициллином. Далее нужно сравнить число колоний, выросших на чашках. Если ампициллин замедляет рост E. coli, число колоний на чашке с ампициллином должно быть меньше. Если он не оказывает эффекта, число колоний должно быть примерно одинаковым.

7. Как вы думаете, что ваши экспериментальные данные скажут о действии ампициллина на E. coli?

Антибиотики обычно убивают бактерий (бактерицидное действие) или останавливают их рост (бактериостатическое действие). Поэтому на чашке с ампициллином не должно быть колоний. Присутствие колоний на чашке с ампициллином означает, что конкретно эти бактерии приобрели устойчивость к антибиотику.

Вопросы к уроку 2

1. На какой из засеянных чашек вы ожидаете увидеть бактерий, наиболее похожих на исходные колонии, которые вы брали для трансформации? Объясните ваш ответ

Бактерии, похожие на исходные, должны расти на чашке LB/(-)pGLO. Эти бактерии были взяты со «стартовой» чашки, к ним не была добавлена плазмида, и затем высеяны обратно на чашку LB. Соответственно, они должны быть практически идентичны исходным бактериям.

1. На какой чашке (чашках) вы ожидаете найти трансформированные клетки, если такие будут?

Трансформированные клетки должны находиться на чашках LB/amp и LB/amp/ara. Эти чашки были засеяны клетками, инкубированными с плазмидой pGLO. Генетически трансформированные клетки получили плазмиду и стали устойчивыми к ампициллину, таким образом, эти те клетки, которые выживают на чашках с антибиотиком.

1. Какие чашки нужно сравнивать между собой, для того, чтобы определить насколько удалась трансформация? Почему?

Нужно сравнивать чашки LB/amp/(-)pGLO и LB/amp/(+)pGLO. Чашки, не получившие ДНК pGLO не получили ген устойчивости к ампициллину и не должны расти на чашке с антибиотиком. Клетки, получившие плазмиду (+pGLO) экспрессируют ген устойчивости и растут на чашке с антибиотиком. Если какие-то из исходных клеток уже были устойчивы к ампициллину, они вырастут на обеих чашках.

1. Что означает понятие «контрольная чашка»? Для чего нужен контроль?

Контрольная чашка помогает вам интерпретировать результаты эксперимента. В этом эксперименте обе чашки (-) pGLO являются контрольными. Контрольную чашку LB/amp можно сравнить с чашкой LB/amp/(+)pGLO. Это сравнение показывает, что в результате трансформации (добавления плазмиды) образуются бактериальные колонии, способные расти на ампициллине. Контрольную чашку без ампициллина (-)pGLO/LB можно сравнить с любой из чашек, содержащих ампициллин, чтобы убедиться в том, что для роста в присутствии ампициллина необходима плазмида устойчивости. Чашка LB/amp/(-)pGLO также показывает, что стартовая культура не растет в присутствии ампициллина. Без этого контроля никто бы не мог быть уверен в том, что колонии, выросшие на чашке LB/amp/(+)pGLO действительно являются трансформантами.

Дата добавления: 2015-10-11 | Просмотры: 659 | Нарушение авторских прав