АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Инструкция. Основные методы лабораторной диагностики гельминтозов

Основные методы лабораторной диагностики гельминтозов.

Макроскопические методы исследования фекалий.

Направлены на поиск гельминтов или их фрагментов (сколексов, члеников и частей стробилы цестод). Применяются для диагностики тех гельминтозов, возбудители которых или не выделяют яйца с экскрементами больного или выделяют их в небольшом количестве и не всегда (при энтеробиозе в фекалиях обнаруживаются острицы, при тениидозах – членики цестод); для определения эффективности лечения; для диагностической дегельминтизации (при подозрении на гельминтоз, не обнаруживаемый другими способами).

С целью обнаружения в фекалиях остриц или проглоттид цестод необходимо производить предварительный просмотр невооружённым глазом фекалий, доставляемых в лабораторию для микроскопических исследований.

Для более точной дифференциальной диагностики тениидозов, определения эффективности лечения и при диагностической дегельминтизации рекомендуется самый простой метод – просмотр разжиженных водой фекалий в чёрных фотографических кюветах или в чашках Петри на тёмном фоне.

Обнаружение гельминтов в фекалиях.

Принцип – гельминты или их фрагменты хорошо заметны на тёмном фоне, их обнаруживают при просматривании разжиженных водой фекалий.

Реактивы – глицерин (50% раствор).

Специальное оборудование – лупа, черные фотографические кюветы или чашки Петри, пинцеты, препаровальные иглы.

Ход обнаружения – фекалии разводят с водой для получения равномерной суспензии, после чего при хорошем освещении тщательно просматривают отдельными небольшими порциями в чёрных фотографических кюветах или на чёрном фоне в чашках Петри. Пинцетом или препаровальной иглой извлекают все подозрительные белые частицы. Крупные образования, подозрительные на фрагменты гельминтов, рассматривают под лупой между двумя предметными стёклами.

Если по клиническим показаниям предполагают обнаружение мелких гельминтов (карликовых цепней и др.) или головок цестод после лечения, то подозрительные частицы рассматривают под лупой в капле глицерина, а в случае необходимости и под микроскопом.

Макроскопические методы исследования (качественные).

Направлены на выявление яиц и личинок гельминтов. Применяются с диагностической целью, для контроля эффективности лечения, а также для оценки качества проведения комплекса противогельминтозных мероприятий. Для широкого использования в практике лабораторий рекомендуется метод толстого мазка с целлофановой покровной пластинкой по Като.

Метод удобен и при проведении массовых мероприятий. Мазки в очагах гименолепидоза и анкилостомидозов, микроскопию мазков следует осуществлять сразу после их просветления.

Обнаружение яиц гельминтов в фекалиях методом толстого мазка

с целлофановой покровной пластинкой по Като.

Принцип – яйца гельминтов обнаруживают в толстом мазке фекалий, просветленных глицерином и подкрашенных малахитовой зеленью.

Реактивы – 3% водный раствор малахитовой зелени, глицерин, 6% раствор фенола, целлофановые покровные пластинки по Като.

Смесь Като: 6 мл. 3% водного раствора малахитовой зелени + 500 мл. глицерина + 500 мл. 6% раствора фенола. Пластинки по Като: гидрофильный целлофан разрезают на пластинки, размером 20 на 40 мм. и погружают в смесь Като так, чтобы они прилегали друг к другу (3-5 мл. раствора Като на 100 пластинок). Через 24 часа они готовы к употреблению. Готовые пластинки можно хранить в растворе Като в хорошо закрытой посуде при комнатной температуре в течении 6 месяцев.

Ход обнаружения – 100 мг. фекалий без добавления воды или какой- либо другой жидкости наносят на предметное стекло, накрывают вместо покровного стекла целлофановой пластиной, обработанной смесью Като, и придавливают резиновой пробкой так, чтобы фекалии размазались по предметному стеклу в пределах целлофановой пластинки, но не выдавливались из-под неё. Мазок оставляют при комнатной температуре для осветления, после чего просматривают его под микроскопом. Время осветвления мазка зависит от температуры воздуха, но даже в прохладном помещении оно составляет не более 1 часа; в жаркое время года во избежание пересушивания мазок м микроскопируют через 30-40 минут. В некоторых случаях, чтобы избежать чрезмерного высыхания препарата, на целлофановую покровную пластинку приготовленного препарата следует класть влажную губку.

Можно использовать пленку, пропитанную только 50% раствором глицерина, эффективность выявления гельминтов при этом не уменьшается.

Методом Като рекомендовано заменить нативный мазок. Для полного выявления всех видов гельминтов метод толстого мазка с целлофановой покровной пластинкой по Като обязательно сочетать с методом обогащения.

Обнаружение яиц гельминтов в фекалиях методом обогащения.

Принцип – фекалии суспендируют во флотационном растворе, имеющем больший удельный вес, чем яйца гельминтов (более1,2). Яйца гельминтов всплывают на поверхность, образовавшуюся плёнку исследуют под микроскопом.

Реактивы – флотационный раствор по Калантарян – 1 кг. азотнокислого натрия растворяют в 1л. воды. Смесь кипятят до образования плёнки и переливают без фильтрования в сухие бутылки. Удельный вес раствора – 1,38.

Спец. оборудование – гранёные стаканы или склянки с широким горлом, объёмом 100 мл., стеклянные палочки.

Ход обнаружения - в стаканах или склянках тщательно размешивают стеклянной палочкой 5 г. фекалий, постепенно доливая флотационный раствор до 100 мл. Сразу же по окончании размешивания стеклянной палочкой или бумажным совочком удаляют всплывшие на поверхность крупные частицы. К поверхности солевого раствора прикладывают предметное стекло. Если между смесью и предметным стеклом остаётся пустое пространство, добавляют солевой раствор до полного соприкосновения смеси с предметным стеклом. Оставляют для отстаивания 20-30 минут, после чего предметное стекло осторожно снимают, кладут под микроскоп плёнкой кверху и просматривают без покровного стекла всю плёнку, прилипшую к поверхности предметного стекла. Во избежание высыхания препарата во время микроскопирования плёнку можно смешать с 2-3 каплями 50% раствора глицерина.

При отсутствии данной соли можно использовать насыщенный раствор поваренной соли (по Фюллеборну). Для приготовления раствора 400 г. соли растворяют в 1 л. воды, нагревают до кипения, фильтруют через слой ваты или марли и охлаждают. Правильно приготовленный раствор должен иметь небольшой осадок из нерастворяющихся кристалликов соли (уд. вес раствора – 1,2).

В связи с тем, что яйца, имеющие большой удельный вес (неоплодотворённые яйца аскарид, яйца трематод и крупных цестод), не всплывают, помимо исследования поверхностного слоя жидкости при использовании метода Фюллеборна необходимо дополнительно просмотреть 2-4 препарата из осадка смеси. Для этой цели (после снятия поверхностной плёнки) суспензию осторожно сливают, а из осадка пипеткой или проволочной петлёй берут 4-8 капель, наносят на предметное стекло, накрывают покровным стеклом и исследуют под микроскопом. Для просветления препарата можно добавить каплю глицерина.

Специальные лабораторные методы исследования на различные гельминтозы.

Методы исследования на энтеробиоз.

Обнаружение яиц остриц в перианальном соскобе

с применением деревянного шпателя.

Принцип – яйца гельминтов, находящиеся в перианальных складках, соскабливают деревянным шпателем (спичкой) и исследуют под микроскопом.

Реактивы – 50% раствор глицерина или 1% раствор двууглекислого натрия.

Спец. оборудование – деревянные шпатели (можно использовать отточенную в виде шпателя спичку или спичку с намотанным на неё тонким слоем ваты).

Ход обнаружения – соскоб с перианальных складок делают утром до дефикации (у женщин и до мочеиспускания) или вечером перед сном. Соскабливание производят осторожно с поверхности перианальных складок деревянным шпателем, смоченным в 50% растворе глицерина или в 1% растворе двууглекислого натрия.

Полученный материал, тщательно счищают со шпателя (спички) краем предметного стекла непосредственно на другое предметное стекло в каплю 50% раствора глицерина и микроскопируют при малом увеличении. Шпатель после однократного использования сжигают. При обследовании пищевиков, работников общественного питания, удобнее использовать материал из подногтевых пространств, используя смесь из равных количеств 50% водного раствора глицерина и раствора Люголя. В содержимом подногтевых пространств у этих контингентов в большом количестве имеется примесь крахмальных зёрен, что затрудняет нахождение яиц остриц. При использовании раствора Люголя крахмальные зёрна окрашиваются в синий цвет, а яйца остриц в жёлтый.

Обнаружение яиц остриц в содержимом подногтевых пространств.

Принцип - яйца остриц соскабливают с содержимым подногтевых пространств. При использовании 50% р-ра глицерина и р-ра Люголя желтые яйца гельминтов легко отличимы на бесцветном фоне от синих крахмальных зерен и их обломков.

Реактивы – 50% растворы глицерина и Люголя.

Спец. оборудование - деревянные шпатели (спички, отточенные в виде шпателя).

Ход обнаружения - пробу из подногтевых пространств и ногтевого.ложа брать спичкой, отточенной в виде шпателя и смоченной в смеси из равных количеств 50% водного раствора глицерина и pacтвора Люголя и исследовать так же, как и при перианалъком соскобе в этой же смеси.

Для диагностики энтеробиоза в последние годы стали использовать бесцветные полиэтиленовые или поливинилхлоридные ленты с липким слоем, применяемые для изоляции и детского технического творчества. Однако токсикологические свойства этой ленты не изучены и использование её для диагностики энтеробиоза не разрешено. Можно пользоваться лентами, нарезанными из безвредной в токсикологическом отношении липкой операционной ленты (ЛПО-1, ЛПО-2).

Обнаружение яиц остриц в перианальных складках

с использованием липкой ленты.

Принцип – яйца гельминтов приклеиваются к липкой ленте, приложенной к перианальным складкам.

Реактивы – липкая лента, приготовленная из липкой операционной пленки (ЛПО-1, ЛПО-2).

Спец. оборудование – пинцеты.

Ход обнаружения –полоску липкой ленты длинною 10 см. и шириною 2 см. с помощью пинцета захватывают с одной стороны и наклеивают на перианальную область. Лента должна быть прижата к коже полностью, для чего её приглаживают металлической или деревянной палочкой. Затем ленту отклеивают и переносят на предметное стекло, Между стеклом и полоской не должно быть пузырьков воздуха. В лаборатории препарат исследуют под микроскопом. Если невозможно просмотреть препарат под микроскопом в тот же день, его можно сохранить и в холодильнике.

Методы исследования на тениидозы.

Основным методом диагностики тениаринхоза, особенно при массовых обследованиях в очагах, служит опрос на выявление члеников тениид. С целью повышения его диагностической ценности следует проводить опрос с показом члеников бычьего цепня, аскарид и остриц.

Довольно эффективны для диагностики тениаринхидоза методы перианального соскоба и по Като.

Диагностика тениоза затруднительна в связи с тем, что активного выделения члеников свиного цепня не наблюдается, фекалии в лабораторию доставляются в небольшом количестве и даже эта порция исследуется не полностью. При подозрении на тениоз следует провести диагностическую дегельминтизацию (малыми дозами папоротниками, семенами тыквы).

Методы исследования на стронгилоидоз.

Диагноз стронгилоидоза ставиться при нахождении в фекалиях не яиц, а личинок гельминта. Обычные методы гельминтоовоскопии в связи с особенностями биологии паразита при исследовании на стронгилоидоз неприемлемы. Необходимо использование специальных методов, выявляющих личинки гельминтов. Наиболее эффективным методом выявления личинок является классический метод Бермана, основанный на их положительном термотаксисе.

Обнаружение личинок гельминтов в фекалиях по Берману.

Метод основан на способности личинок мигрировать к теплу.

Реактивы – не требуются.

Спец. оборудование – металлический штатив, сетка, зажим, воронки, резиновые трубки, центрифуга.

Ход обнаружения – на узкий конец стеклянной воронки надевают резиновую трубку с зажимом и укрепляют её на металлическом штативе. В воронку помещают металлическую сетку, на которой находится 5-10 гр. фекалий. Приподняв сетку заполняют воронку подогретой до 40-45 градусов водой так, чтобы нижняя часть сетки была погружена в воду. Личинки из фекалий активно переходят в тёплую воду и скапливаются в нижней части резиновой трубке, надетой на воронку. Через 4 часа зажим на трубке открывают и спускают жидкость в 1-2 центрифужные пробирки. После центрифугирования в течении 2-3 минут надосадочную жидкость быстро сливают, а осадок переносят на предметное стекло и исследуют под микроскопом.

При проведении массовых обследований на стронгилоидоз в эндемичных очагах можно использовать метод Брумпта в модификациях.

Упрощённый метод выявления личинок стронгилоидозов

в фекалиях при массовых обследованиях.

Реактивы – не требуются.

Спец. оборудование – стеклянные или парафинированные стаканчики, чашки Петри.

Ход обнаружения – фекалии собирают в стаканчики и заливают 10-15 мл. обычной (водопроводной) воды комнатной температуры. Через 20 минут воду сливают в чашку Петри и исследуют под микроскопом.

При клинических показаниях на стронгилоидоз, в случаях ненахождения личинок по методу Бермана, рекомендуется исследования дуоденального содержимого и желчи. Исследование дуоденального содержимого и желчи можно проводить также при подозрении на гельминтозы с локализацией возбудителя в печени, желчном пузыре, двенадцатиперстной кишке (описторхоз, фасциолез, клонорхоз, дикроцеллиоз, трихостронгилидозы).

Обнаружение яиц и личинок в гельминтов в дуоденальном

содержимом и желчи.

Принцип – яйца и личинки гельминтов, паразитирующих в печени, желчном пузыре, поджелудочной железе и 12-перстной кишке, могут быть обнаружены в желчи и дуоденальном содержимом, полученном при дуоденальном исследовании.

Реактивы – серный эфир.

Спец. оборудование – химические стаканчики или склянки, покровные стёкла или целлофановые пластинки по Като, центрифуга.

Ход обнаружения – дуоденальное содержимое и желчь (порция А, В, С) получают обычным путём зондирования. При получении порции В необходимо получить рефлекс желчного пузыря введением через зонд 33% раствора сернокислой магнезии.

Из исследуемой жидкости сначала выбирают и просматривают под микроскопом плавающие в ней хлопья, а затем смешивают её с равным количеством серного эфира. Смесь тщательно взбалтывают и центрифугируют. Надосадочную жидкость сливают, а весь осадок исследуют под микроскопом.

Дата добавления: 2015-05-19 | Просмотры: 792 | Нарушение авторских прав