АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Методы исследования на анкилостомидозы

В очагах анкилостомидозов для диагностики этих болезней применяется метод обогащения по Фюллеборну, но можно использовать и метод обогащения по Калантарян.

В остаточных очагах анкилостомидозов и в клинических условиях для диагностики между анкилостомидозом и некаторозом рекомендуется метод культивирования личинок.

Обнаружение личинок гельминтов в фекалиях культивированием их

на фильтровальной бумаге (метод Харада и Мори в модификации).

Принцип – в тепле на влажной фильтровальной бумаге из яиц анкилостом или некатора, выделенные с фекалиями, развиваются филяриевидные личинки, которые могут быть легко обнаружены.

Реактивы – не требуются.

Спец. оборудование – лупа, термостат на 28 градусов.

Ход обнаружения – на фильтровальную бумагу размером 15 на 3,5 см. наносят тонким слоем фекалии таким образом, чтобы края бумаги оставались свободными. Бумагу с фекалиями помещают в банку объёмом 0,8 л., заполненную водой так, чтобы нижний край бумаги, свободный от фекалий, был погружён в воду. Банку на 5-6 дней помещают в термостат при 28градусах. Филяриевидные личинки, развившиеся из яиц за это время, спускаются по фильтровальной бумаге и оседают на дне банки. По окончании инкубации фильтровальную бумагу извлекают из банки и уничтожают, а жидкость исследуют под лупой. В сомнительных случаях жидкость центрифугируют и осадок исследуют под микроскопом. (Работать только в резиновых перчатках).

Примечание: в теплое время года можно оставлять пробирки при комнатной температуре, но время инкубации увеличивается до 8 –10 дней.

Метод исследования на ленточные гельминтозы.

При подозрении на гельминтозы, возбудители которых паразитируют в лёгких (парагонимус) или в трахее необходимо исследовать мокроту.

Обнаружение яиц и отдельных гельминтов в мокроте.

Принцип – яйца гельминтов обнаруживаются в тонком слое мокроты.

Реактивы – 0,5% раствор едкого калия или натрия.

Спец. оборудование – центрифуга, колбочки, водяная баня, стеклянные пластинки.

Ход обнаружения – мокроту размазывают на стеклянной пластинке (или предметном стекле), плотно прикрывают другой пластинкой и рассматривают сначала невооружённым глазом на светлом или чёрном фоне, а затем под микроскопом. Частицы мокроты (“ржавые” скопления, обрывки тканей и др.) исследуют отдельно под покровным стеклом при малом и большом увеличении микроскопа.

Гнойную мокроту смешивают в колбочке с равным количеством 0,5% раствора едкого калия или натрия, встряхивают в течение 3-5 минут при 1500 об/мин. и исследуют осадок под микроскопом.

Методы обследования на фасциолез.

Обнаружение яиц гельминтов в фекалиях методом

последовательных промываний.

Принцип – обнаружение крупных яиц фасциол в отмытом осадке фекалий.

Реактивы - не используются.

Спец. оборудование - чашки Петри.

Ход обнаружения - небольшую порцию фекалий смешивают с водой в чашке Петри и оставляют на несколько минут до осаждения взвешенных частиц. Надосадочный слой сливают и заменяют чистой водой. Процедуру повторяют несколько раз до получения прозрачной надосадочной жидкости, отмытый осадок исследуют под микроскопом. Для исследования используют несколько проб фекалий.

Методы обследования на шистосомозы.

Исследование мочи

Принцип - Яйца и отдельные фрагменты гельминтов обнаруживаются в осадке мочи.

Реактивы - Раствор Люголя или 1-2% водный раствор метиленового синего, 50% раствор

раствор глицерина.

Спец. оборудование - Центрифуга, пробирки центрифужные.

Ход обнаружения - Мочу обследуемого в объеме не менее 50 мл. собранную в середине дня, помещают в конический стакан и дают отстояться в течении 30 минут. Отстоявшуюся мочу сливают. Пипеткой наносят на предметное стекло каплю из осадка мочи, приготовляют мазок и исследуют под малым увеличением микроскопа. Добавление к осадку 1-2 капель 50% раствора глицерина значительно просветляет осадок и облегчает его исследование.

Можно использовать центрифугирование (особенно при низкой интенсивности инвазии).

Пробу свежей мочи помещают в 2 центрифужные пробирки по 10 мл и центрифугируют при 1000--1500 обор./ мин в течение 5-10 минут. Из осадка готовят препараты и исследуют под малым увеличением микроскопа. К препаратам можно добавлять 1-2 капли красителя (раствор Люголя или 1-2% водного раствора метиленового синего). Это создаёт цветной фон, что облегчает выявление яиц шистосом.

Исследование фекалий

Метод осаждения фекалий (простой)

Принцип - в осадке хорошо просматриваются яйца шистосом, отделённые от разнообразных органических элементов, содержащихся в фекалиях.

Реактивы - растворитель из водного раствора 50% глицерина, и изотонического раствора хлорида натрия в соотношении 1:1.

Ход обнаружения - в коническом стакане ёмкостью 200 мл смешивают 1г фекалий с 1-2 мл растворителя. Разводят содержимое с растворителем до объёма сосуда и дают отстояться в течение 20-30 минут. Надосадочную жидкость сливают, а осадок исследуют под малым увеличением микроскопа на наличие яиц. Для получения лучшей концентрации осадок нужно ресуспендировать в растворителе до получения взвеси и дать ей отстояться в конической.стакане в течение 10 минут. Осадок с придонного слоя забирают пастеровской пипеткой, помещают 2 капли на предметное стекло, накрывают покровным стеклом и исследуют под микроскопом.

Метод осаждения фекалий по Ритчи.

Принцип - яйца шистосом обнаруживаются в осадке, полученном после центрифугирования.

Реактивы - изотонический раствор хлорида натрия, 10% раствор формалина, эфир.

Спец. оборудование- соcyд вместимостью I50 мл, воронка на 50 мл, центрифуга, центрифужные пробирки и пробки для них, аппликаторы, пипетки с резиновой грушей.

Ход исследования - в сосуде смешивают, примерно 2 г фекалий с 10 мл изотонического раствора хлорида натрия и помещают в центрифужную пробирку, вместимостью 15 мл. Пробирку закрывают пробкой и встряхивают в течение 30 секунд. Пробку удаляют, а содержимое центрифугируют в течение 2 минут при 2000 обор./мин. После центрифугирования надосадочную жидкость сливают, добавляют к осадку 10 мл 10% раствора формалина, тщательно смешивают и дают смеси отстояться 5 минут. Добавляют в нее 3-4 мл эфира, закрывают пробирку пробкой, встряхивают для получения однородной смеси, удаляют пробку и центрифугируют повторно в течение 2 минут. В результате центрифугирования в пробирке образуется 4 слоя: I) осадок на дне пробирки с яйцами шистосом, 2) слой формалина, 3) слой фекального детрита (волокна, жир и т.д.), 4) слой эфира.

Аппликатором удаляют детрит, сливают надосадочную смесь формалина с эфиром, осадок с придонного слоя забирают пастеровской пипеткой и исследуют под малым увеличением микроскопа.

Количественные методы диагностики гельминтозов.

При необходимости установить интенсивность инвазии применяют количественные методы исследований. Эти методы позволяют судить о качестве дегельминтизации, давать оценку эффективности различных антигельминтных препаратов, а также могут служить контролем проводимых массовых лечебно-профилактических мероприятий. Из количественных методов исследованиях фекалий в СССР до последних лет наиболее широко применялся метод Столла. Однако, следует учитывать, что при малоинтенсивных инвазиях он мало чувствителен.

Метод исследования фекалий.

Фекалии для исследования всеми вышеуказанными методами должны доставляться в лабораторию свежими (не более суточной давности). В случаях необходимости длительного хранения материала, а также с целью исключения влияния неблагоприятных условий при транспортировке, которые могут привести к деформированию яиц гельминтов, рекомендуется консервация фекалий жидкостью Барбагалло или растворами синтетических детергентов (моющих средств типа “ Лотос”, “Экстра”). Соотношение фекалий и раствора должно быть 1:10.

Работа с фекалиями в лаборатории.

Фекалии тщательно собирают в стеклянную или пластмассовую посуду, парафиновые стаканчики, на которые наклеивают этикетку с указанием фамилии, имени, отчества, возраста и адреса обследуемого.

Фекалии следует доставлять в количестве не менее ¼ стакана, так как небольшие порции испражнений быстро высыхают и яица в них деформируются. Кроме того, иногда возникает необходимость в повторном исследовании другими методами. Фекалии, направленные в лабораторию, должны исследоваться в день доставки, а при невозможности этого их хранят в холодном месте до следующего утра.

После проведения анализов посуду следует дезинфицировать кипячением или выдерживанием в течении 5 часов в 5% растворе фенола, лизола, 2% растворе крезола.

В случае необходимости хранения материала в течение нескольких дней следует применить консерванты.

При регистрации результатов анализов названия гельминтов обозначают по современной номенклатуре (латинское название).

При всех методах лабораторной диагностики гельминтозов необходимы: микроскоп (обычный биологический – МБИ разных систем), предметные стёкла, покровные стёкла.

Просмотр препаратов начинают под малым увеличением с окуляром 7:10, в сомнительных случаях пользуются большим увеличением микроскопа. Для обнаружения личинок S. Stercoralis, A. Duodenale, N. Americanus могут быть использованы бинокулярные стереоскопические микроскопы (МБС).

В лабораториях необходимо следить за испраностью работы вентиляции вытяжных шкафов.

Начальник главного управления карантинных инфекций: Сергиев В.П.

Зам. начальника Главного управления лечебно-профилактической помощи: Трескунов В.В.

Дата добавления: 2015-05-19 | Просмотры: 649 | Нарушение авторских прав