АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Качественные пробы на присутствие ферментов

Прочитайте:
  1. A. блокирование ферментов дыхательной цепи
  2. E. фруктозрасщепляющих ферментов
  3. II. Злокачественные мезенхимальные опухоли. Общая характеристика.
  4. III. Механизмы регуляции количества ферментов
  5. III. Механизмы регуляции количества ферментов
  6. III. Механизмы регуляции количества ферментов: индукция, репрессия, дерепрессия.
  7. III. Опухоли и предзлокачественные процессы
  8. IV. Качественные реакции на йод в тиреоидине
  9. Активаторы и ингибиторы ферментов.
  10. Активация ферментов

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА № 3

Получение препаратов ферментов

1. Получение сахаразы из дрожжей

Сахараза (К.Ф. 3.2.1.4.) катализирует гидролитическое расщепление гликозидной связи в молекуле сахарозы, при этом образуется глюкоза и фруктоза. Глюкозу обнаруживают реакцией Фелинга.

Ход работы. В фарфоровую ступку вносят 1 г прессованных пекарских дрожжей и тщательно растирают в 3 мл воды в течение 5 мин. Затем добавляют 17 мл воды, перемешивают и ставят ступку в термостат при 37 ˚С на 20 мин. Через каждые 5 мин содержимое перемешивают. По истечении указанного времени массу фильтруют через складчатый бумажный фильтр. Отфильтрованная вытяжка содержит фермент сахаразу

2. Получение препарата цитохромоксидазы из мышечной ткани

Скелетные мышцы (50 – 80 г) тщательно измельчают ножницами, заливают четырехкратным объемом дистиллированной воды и гомогенизируют в гомогенизаторе в течение 10 мин. Гомогенат фильтруют через двойной слой марли и многократно промывают водой до тех пор, пока промывные воды перестанут быть окрашенными. Полученная почти бесцветная кашица содержит цитохромоксидазу, комплекс цитохромов и некоторые дегидрогеназы.

 

Качественные пробы на присутствие ферментов

1. Открытие пероксидазы (донор: Н2О2- оксиредуктаза;КФ 1.11.1.7) в картофеле

Оборудование, реактивы. Тёрка; сырой картофель; пирогаллол (1%-ный); перокснд водорода (2%-ный).

Ход работы. Картофель натирают на терке. Небольшое его количество, не отжимая, переносят в пробирку, добавляют 1—2 мл 1%-ного раствора пирогаллола и 1—2 капли 2%-ного раствора пероксида водорода. При стоянии выпадает желто-бурый осадок пурпурогаллина. Образование пурпурогаллина выражает следующая схема 1. Многократное дегидрирование (окисление) пирогаллола и ряда промежуточных продуктов на пути к пурпурогаллину осуществляется с участием пероксидазы, каждый раз передающей снятые атомы водорода на пероксид водорода.

 

Схема 1. Образование пурпурогаллина.

 

2. Открытие альдегидоксидазы (альдегид:О2- оксиредуктаза; КФ 1.2.3.1) в сыром молоке

Оборудование, реактивы; баня водяная, термометр, пипетки на 1 мл (3 шт.), на 5 мл – 2 шт; свежее коровье молоко, формальдегид (0,4 %-ный), метиленовый синий (0,01 %-ный).

Ход работы: В три пробирки наливают по 5 мл свежего коровьего молока. Одну пробу кипятят 2-3 мин. и остужают. В другую пробирку добавляют 1 мл 0,4 %-ного формальдегида, в 3-ю – 1 мл воды. Затем во все три пробирки наливают по 1 мл 0,01 %-ного раствора метиленового синего. Содержимое пробирок хорошо перемешивают и заливают в каждую по 3-4 капли вазелинового масла для предохранения жидкости от соприкосновения с кислородом воздуха. Все пробы помещают в водяную баню, нагретую до 40 оС. Через некоторое время жидкость в некипяченой пробе, содержащей субстрат, обесцвечивается за счет образования восстановленной формы метиленового синего:

 

Если бесцветный раствор метиленового синего встряхнуть на воздухе, то раствор вновь приобретает синий цвет.


Дата добавления: 2015-08-06 | Просмотры: 813 | Нарушение авторских прав



1 | 2 | 3 |



При использовании материала ссылка на сайт medlec.org обязательна! (0.004 сек.)