АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Специфичность действия ферментов

Специфичность действия — одно из важнейших свойств ферментов. Основной причиной специфичности взаимодействия фермента и субстрата является комплементарность структуры активного центра фермента таковой субстрата.

1. Специфичность действия амилазы (a-1,4-глюкан -4-глюканогидролаза; КФ 3.2.1.1) и сахаразы (b-D-фруктофуранозид -фруктогидролаза; КФ 3.2.1.26)

Оборудование, реактивы. Термометр лабораторный; баня водяная; пипетки с одной меткой на 2 мл (4 шт.); раствор слюны разбавленной; препарат дрожжевой сахаразы (1%-ный); тростниковый сахар (2%-ный); сульфат меди (1%-ный); гидроксид натрия (10%-ный); иод (0,3%-ный) в иодиде калия (3%-ном); фелннгова жидкость.

Ход работы. Нумеруют четыре пробирки. В пробирки 1 и 2 наливают по 2 мл раствора крахмала; в пробирки 3 и 4 - по 2 мл раствора сахарозы. Затем в пробирки 1 и 3 вносят по 0,5 мл раствора слюны, а в пробирки 2 и 4—по 0,5 мл 1%-ного раствора препарата дрожжевой сахаразы. Перемешивают содержимое и ставят на 10 мин в водяную баню, нагретую до 38-40°С. После охлаждения проделывают реакции с иодом на присутствие крахмала в пробах 1 и 2 и глюкозы—в пробах 3 и 4. Делают заключение о специфичности изученных ферментов.

2. Специфичность действия сукцинатдегидрогеназы (сукцинат: акцептор- оксидоредуктаза; КФ 1.3.99.1)

Оборудование, реактивы. Термометр лабораторный; баня водяная; пипетки градуированные на 1 мл (3 шт.); кашица мышечная (приготовление см. стр. 125); янтарная кислота (3%-ная, нейтрализованная); яблочная кислота (3%-ная, нейтрализованная); метиленовый синий (0,02%-ный).

Схема 2. Образование меланина.

Ход работы. В три пронумерованные пробирки помещают 3—4 мл мышечной кашицы и добавляют: в первую—0,5 мл 3%-ного раствора янтарной кислоты, во вторую—0,5 мл 3%-ного раствора яблочной кислоты и в третью — 0,5 мл воды. В каждую пробирку вносят по 2—3 капли 0,02 %-ного раствора метиленового синего (до окрашивания смеси в голубой цвет). Содержимое пробирок перемешивают и одновременно помещают их в водяную баню при температуре 37—40°С. Через 5—10 мин наблюдается обесцвечивание метиленового синего в первой пробирке и отсутствие обесцвечивания в двух других. Первую пробирку сильно взбалтывают, вновь появляется синее окрашивание вследствие окисления лейкооснования метиленовой сини кислородом воздуха.

Сукцинатдегидрогеназа (флавопротеид) окисляет янтарную кислоту в фумаровую. В роли промежуточного акцептора водорода в данном опыте выступает метиленовая синь, которая далее (при встряхивании) отдает принятый водород кислороду воздуха. Ход процесса показан на схеме:

3. Групповая специфичность действия сахаразы

(b-D-фруктофуранозид -фруктогидролаза; КФ 3.2.1.26)

Оборудование, реактивы. Баня водяная; термометр лабораторный; пипетки градуированные на 2 мл (3 шт.), 5 мл (2 шт.); дрожжевая сахараза; сахароза (1%-ная); раффиноза (1%-ная); фелингова жидкость.

Ход работы. В одну пробирку наливают 2 мл 1%-ного раствора сахарозы, а в другую—2 мл 1%-ного раствора раффинозы. Добавляют в обе пробирки по 1 мл 1%-ного раствора препарата дрожжевой сахаразы и, перемешав содержимое каждой пробирки, ставят их на 5—10 мин в водяную баню при 35—40°С. Затем исследуют содержимое обеих пробирок на присутствие восстанавливающих углеводов. Для этого в обе пробирки наливают по 3 мл фелинговой жидкости, хорошо перемешивают и смесь нагревают до кипения. В обеих пробирках проба с фелинговой жидкостью положительна, так как b-гликозидная связь гидролизуется в присутствии сахаразы в молекулах как сахарозы, так и раффинозы.

Рафиноза сахароза

Дата добавления: 2015-08-06 | Просмотры: 600 | Нарушение авторских прав