АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Специфичность действия ферментов

Прочитайте:
  1. A. блокирование ферментов дыхательной цепи
  2. AT : химич. Природа, строение, свойства, механизм специфического взаимодействия с АГ
  3. B-лактамазы широкого спектра действия
  4. E. фруктозрасщепляющих ферментов
  5. I. Нифедипин короткого действия (10 мг)
  6. III. Механизмы регуляции количества ферментов
  7. III. Механизмы регуляции количества ферментов
  8. III. Механизмы регуляции количества ферментов: индукция, репрессия, дерепрессия.
  9. III. Усвоение новых знаний и способов действия.
  10. IV. Механизм действия перелитой крови.

Специфичность действия — одно из важнейших свойств ферментов. Основной причиной специфичности взаимодействия фермента и субстрата является комплементарность структуры активного центра фермента таковой субстрата.

1. Специфичность действия амилазы (a-1,4-глюкан -4-глюканогидролаза; КФ 3.2.1.1) и сахаразы (b-D-фруктофуранозид -фруктогидролаза; КФ 3.2.1.26)

Оборудование, реактивы. Термометр лабораторный; баня водяная; пипетки с одной меткой на 2 мл (4 шт.); раствор слюны разбавленной; препарат дрожжевой сахаразы (1%-ный); тростниковый сахар (2%-ный); сульфат меди (1%-ный); гидроксид натрия (10%-ный); иод (0,3%-ный) в иодиде калия (3%-ном); фелннгова жидкость.

Ход работы. Нумеруют четыре пробирки. В пробирки 1 и 2 наливают по 2 мл раствора крахмала; в пробирки 3 и 4 - по 2 мл раствора сахарозы. Затем в пробирки 1 и 3 вносят по 0,5 мл раствора слюны, а в пробирки 2 и 4—по 0,5 мл 1%-ного раствора препарата дрожжевой сахаразы. Перемешивают содержимое и ставят на 10 мин в водяную баню, нагретую до 38-40°С. После охлаждения проделывают реакции с иодом на присутствие крахмала в пробах 1 и 2 и глюкозы—в пробах 3 и 4. Делают заключение о специфичности изученных ферментов.

2. Специфичность действия сукцинатдегидрогеназы (сукцинат: акцептор- оксидоредуктаза; КФ 1.3.99.1)

Оборудование, реактивы. Термометр лабораторный; баня водяная; пипетки градуированные на 1 мл (3 шт.); кашица мышечная (приготовление см. стр. 125); янтарная кислота (3%-ная, нейтрализованная); яблочная кислота (3%-ная, нейтрализованная); метиленовый синий (0,02%-ный).

Схема 2. Образование меланина.

Ход работы. В три пронумерованные пробирки помещают 3—4 мл мышечной кашицы и добавляют: в первую—0,5 мл 3%-ного раствора янтарной кислоты, во вторую—0,5 мл 3%-ного раствора яблочной кислоты и в третью — 0,5 мл воды. В каждую пробирку вносят по 2—3 капли 0,02 %-ного раствора метиленового синего (до окрашивания смеси в голубой цвет). Содержимое пробирок перемешивают и одновременно помещают их в водяную баню при температуре 37—40°С. Через 5—10 мин наблюдается обесцвечивание метиленового синего в первой пробирке и отсутствие обесцвечивания в двух других. Первую пробирку сильно взбалтывают, вновь появляется синее окрашивание вследствие окисления лейкооснования метиленовой сини кислородом воздуха.

Сукцинатдегидрогеназа (флавопротеид) окисляет янтарную кислоту в фумаровую. В роли промежуточного акцептора водорода в данном опыте выступает метиленовая синь, которая далее (при встряхивании) отдает принятый водород кислороду воздуха. Ход процесса показан на схеме:

 

 

3. Групповая специфичность действия сахаразы

(b-D-фруктофуранозид -фруктогидролаза; КФ 3.2.1.26)

Оборудование, реактивы. Баня водяная; термометр лабораторный; пипетки градуированные на 2 мл (3 шт.), 5 мл (2 шт.); дрожжевая сахараза; сахароза (1%-ная); раффиноза (1%-ная); фелингова жидкость.

Ход работы. В одну пробирку наливают 2 мл 1%-ного раствора сахарозы, а в другую—2 мл 1%-ного раствора раффинозы. Добавляют в обе пробирки по 1 мл 1%-ного раствора препарата дрожжевой сахаразы и, перемешав содержимое каждой пробирки, ставят их на 5—10 мин в водяную баню при 35—40°С. Затем исследуют содержимое обеих пробирок на присутствие восстанавливающих углеводов. Для этого в обе пробирки наливают по 3 мл фелинговой жидкости, хорошо перемешивают и смесь нагревают до кипения. В обеих пробирках проба с фелинговой жидкостью положительна, так как b-гликозидная связь гидролизуется в присутствии сахаразы в молекулах как сахарозы, так и раффинозы.

 

Рафиноза сахароза

 

 


Дата добавления: 2015-08-06 | Просмотры: 598 | Нарушение авторских прав



1 | 2 | 3 |



При использовании материала ссылка на сайт medlec.org обязательна! (0.005 сек.)