АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Определение группы крови и резус-фактора

Определение групп крови по стандартным изогемагглютинирующим сывороткам. Для определения групповой принадлежности крови необходимо следующее оснащение: два комплекта стандартных гемагглютинирующих сывороток I (0), II (А), III (В) групп двух различных серий и одна ампула сыворотки IV (АВ) (в каждую ампулу с сывороткой опускают сухую чистую пипетку), флакон с изотоническим раствором хлорида натрия с пипеткой, чисто вымытая сухая тарелка, предметные стекла, стерильные копьевидные иглы для прокола мякоти пальца, стерильные марлевые шарики, спирт. Определение проводят в помещении с хорошим освещением, при температуре от 15 до 25 °С.

Каждая ампула стандартной сыворотки должна иметь паспорт-этикетку с указа­нием группы крови, номера серии, титра, срока годности, места изготовления. Ампулой без этикетки пользоваться запрещается. Стандартные сыворотки для опреде­ления группы крови по системе АВО выпускают с определенной цветовой маркиров­кой: I (0) — бесцветная, II (А) — голубая, II I (В) — красная, ГУ (АВ) — желтая. Маркировка имеется на этикетке в виде цветных полос: на этикетке сыворотки I (0) полос нет, сыворотки II (А) — две полосы синего цвета, сыворотки III (В) — три поло­сы красного цвета и сыворотки IV (АВ) — четыре полосы желтого цвета. Сыворотки хранят при температуре 4—10 °С. Сыворотка должна быть светлой и прозрачной, ампула — сохранной. Наличие хлопьев, осадка, помутнение являются признаками не­пригодности сыворотки. Титр сыворотки должен быть не менее 1:32, активность — высокая: первые признаки агглютинации должны появляться не позднее чем через 30 с. Сыворотки с истекшим сроком хранения к использованию непригодны.

Тарелку делят цветным карандашом на 4 квадрата и в направлении по часовой стрелке обозначают квадраты I (0), II (А), III (В). В соответствующий квадрат тарелки пипеткой наносят крупную каплю сыворотки двух серий I (0), II (А), III (В) групп. Подушечку пальца обрабатывают спиртом и делают прокол кожи иглой-копьем. Первую каплю крови снимают марлевым шариком, последующие капли разными уголками предметного стекла вносят последовательно в капли сыворотки и тщательно размешивают. Капля вносимой крови должна быть в 5—10 раз меньше капли сыворотки. Затем путем покачивания тарелки тщательно перемешивают кровь с сывороткой. Предварительные результаты оценивают через 3 мин, после чего добавляют каплю изотонического раствора хлорида натрия, вновь смешивают путем покачивания тарелки и через 5 мин проводят окончательную оценку реакции агглютинации.

При положительной реакции изогемагтлютинации хлопья и зернышки из склеившихся эритроцитов не расходятся при добавлении изотонического раствора хлорида натрия и перемешивании. При отрицательной реакции капли сыворотки на тарелке прозрачные, равномерно розового цвета, не содержат хлопьев и зерен. Возможны следующие 4 комбинации реакций агглютинации со стандартными сыворотками

I (0), II (А), III (В) групп.

1. Все 3 сыворотки в обеих сериях не дают агглютинации. Исследуемая кровь — 1(0) группы.

2.Реакция изогемагглютинации отрицательная с сывороткой II (А) группы обеих серий и положительная с сыворотками I (0) и III (В) групп. Исследуемая кровь — II (А) группы.

3. Реакция изогемагглютинации отрицательная с сывороткой III (В) группы в обеих сериях и положительная с сывороткой I (0) и III (А) групп. Исследуемая кровь — III (В) группы.

4. Сыворотки I (0), II (А), III (В) групп дают положительную реакцию в обеих сериях. Кровь принадлежит к IV (АВ) группе. Но прежде чем дать такое заключение, необходимо провести реакцию изогемагглютинации со стандартной сывороткой IV (АВ) группы по той же методике. Отрицательная реакция изогемагглютинации позволяет окончательно отнести исследуемую кровь к IV (АВ) группе.

Выявление других комбинаций свидетельствует о неправильном определении групповой принадлежности крови больного.

Сведения о группе крови больного вносят в историю болезни, делают соответ­ствующую отметку на титульном листе за подписью врача, проводившего исследова­ние, с указанием даты исследования.

Ошибки при определении групповой принадлежности крови возможны в ситуациях, когда при фактическом наличии агглютинации она не выявляется или, наоборот, выявляется агглютинация при ее фактическом отсутствии. Невыявленная агглютинация может быть обусловлена:

1) слабой активностью стандартной сыворотки или низкой агглютинабельностью эритроцитов;

2) избыточным количеством исследуемой крови, добавляемой к стандартной сыворотке;

3) замедленной реакцией агглютинации при высокой температуре окружающей среды.

Чтобы избежать ошибок, необходимо использовать активные, с достаточно высоким титром сыворотки при соотношении объема исследуемой крови и стандартной сыворотки 1:5, 1:10. Исследование проводят при температуре не выше 25 °С; оценивать результаты следует не ранее чем через 5 мин от начала исследования.

Выявление агглютинации при ее фактическом отсутствии может быть обусловлено подсыханием капли сыворотки и образованием «монетных» столбиков эритроцитов или проявлением холодовой агглютинации, если исследование проводят при температуре окружающей среды ниже 15 °С. Добавление капли изотонического раство­ра хлорида натрия к исследуемой крови и сыворотке и проведение исследований при температуре выше 15 °С позволяют избежать указанных ошибок. Ошибки в опреде­лении группы крови всегда связаны с нарушением методики исследования, поэтому необходимо тщательное соблюдение всех правил исследования.

Во всех сомнительных случаях необходимо повторное исследование групповой принадлежности со стандартными сыворотками других серий или с помощью стан­дартных эритроцитов.

Определение группы крови системы АВО с помощью моноклональных антител анти-А и анти-В (целиклоны анги-А и анти-В). Целиклоны анти-А и анти-В применяются для определения группы крови человека системы АВО взамен стандартных изогемаггаю-тинирующих сывороток путем выявления антигенов А и В в эритроцитах стандартными антителами, содержащимися в целиклонах.

Моноклоналъные антитела анти-А и анти-В продуцируются двумя различными гибридомами, полученными в результате слияния мышечных антителообразуюших В-лимфоцитов с клетками мышиной миеломы. Названные целиклоны представля­ют собой разведенную асцитическую жидкость мышей — носителей гибридомы, содержащую IgM против антигенов А и В. Целиклоны дают более быструю и более вы­раженную реакцию агглютинации, чем стандартные АВО-сыворотки. При использо­вании целиклонов исключается передача вируса гепатита и ВИЧ.

Определяют группу крови при температуре от 15 до 25 °С. На фарфоровую пластину или маркированную тарелку наносят по одной большой капле целиклонов анти-А и анти-В, рядом наносят каплю исследуемой крови в 10 раз меньшего размера и смешивают отдельными палочками или уголками предметных стекол. Пластинку слегка покачивают и наблюдают за реакцией в течение 2,5 мин. Реакция обычно наступает в первые 3-5 с и проявляется образованием мелких красных агрегатов, а затем хлопьев. Возможны следующие варианты реакции агглютинации.

1. Агглютинация отсутствует с целиклонами анти-А и анти-В; кровь не содержит агглютиногенов А и В — исследуемая кровь группы I (0).

2. Агглютинация наблюдается с целиклонами анти-А; эритроциты исследуемой крови содержат агглютиноген А — исследуемая кровь группы II (А).

3. Агглютинация наблюдается с целиклоном анти-В; эритроциты исследуемой крови содержат агглютиноген В — исследуемая кровь группы III (В).

4. Агглютинация наблюдается с целиклонами анти-А и анти-В; эритроциты содержат агтлютиногены А и В — исследуемая кровь группы IV (АВ).

При наличии реакции агглютинации с целиклонами анти-А и анти-В [группа крови IV (АВ)] для исключения неспецифической агглютинации производят дополнительное контрольное исследование с изотоническим раствором хлорида натрия. Большую каплю (0,1 мл) изотонического раствора смешивают с маленькой (0,01 мл) кап­лей исследуемой крови. Отсутствие агглютинации подтверждает принадлежность исследуемой крови к IV (АВ) фуппе. При наличии агглютинации проводят опреде­ление группы крови с использованием отмытых стандартных эритроцитов.

Целиклоны анти-А и анти-В выпускаются в жидком виде в ампулах или флаконах, жидкость окрашена в красный (анти-А) и синий (анти-В) цвет. Хранят в холо­дильнике при температуре 2—8 °С. Срок хранения 2 года.

Определение группы крови системы АВО по стандартным отмытым эритроцитам с известной групповой принадлежностью. Из вены больного берут 3—4 мл крови в пробирку и центрифугируют. На тарелку, разделенную на секторы, наносят соответствен­но надписям по капле сыворотки, к которой добавляют каплю стандартных эритроцитов, в 5 раз меньше капли исследуемой сыворотки, перемешивают капли углом предметного стекла, покачивают тарелку в течение 3 мин, затем добавляют по капле изотонического раствора хлорида натрия, продолжают смешивать покачиванием и через 5 мин оценивают результаты. Возможны 4 варианта реакции агглютинации.

1. Агглютинация отсутствует с эритроцитами I (0) группы и определяется с эритроцитами II (А) и III (В) групп — исследуемая кровь I (0) группы.

2. Агглютинация отсутствует с эритроцитами I (0) и II (А) групп и определяется с эритроцитами III (В) группы — исследуемая кровь II (А) группы.

3. Агглютинация отсутствует с эритроцитами I (0) и III (В) групп и определяется с эритроцитами II (А) группы — исследуемая кровь III (В) группы.

4. Агглютинация отсутствует с эритроцитами I (0), II (А), III (В) групп — исследуемая кровь ГУ (АВ) группы.

Определение Rh-фактора. Исследование крови на резус-принадлежность методом конглютинации проводят с помощью специальных сывороток анти-Rh в лабораторных условиях. Предварительно определяют групповую принадлежность (по системе АВО).

Оснащение: две различные серии стандартных сывороток анти-Rh, соответствующих групповой принадлежности определяемой крови, или совместимые в группо­вом отношении стандартные отмытые одногрупповые резус-положительные и резус-отрицательные эритроциты, чашка Петри, водяная баня, пипетки для сывороток, предметные стекла или стеклянные палочки.

На чашку Петри наносят подряд 3 большие капли сыворотки анти-Rh одной серии и параллельно — 3 капли сыворотки другой серии, получая 2 горизонтальных ряда сывороток. Затем в 1-й вертикальный ряд сывороток обеих серий вносят по небольшой капле исследуемой крови (соотношение сыворотки и крови 10:1 или 5:1), в средний ряд — по такой же капле стандартных резус-положительных эритроцитов (контроль активности), в 3-й ряд — резус-отрицательные стандартные эритроциты (контроль специфичности). Отдельной для каждой капли стеклянной палочкой или углом предметного стекла тщательно перемешивают сыворотку и эритроциты, чашки зак­рывают крышкой и помещают на водяную баню при температуре 46—48 °С. Спустя 10 мин учитывают результат, просматривая чашку в проходящем свете. В капле со стандартными резус-положительными эритроцитами должна быть агглютинация, с резус-отрицательными — она отсутствует. Если в каплях обеих серий сывороток с исследуемыми эритроцитами определяется агглютинация — кровь резус-положительная, если она отсутствует — кровь резус-отрицательная.

Следует помнить о том, что добавлять изотонический раствор хлорида натрия в каплю сыворотки, как это принято при определении групповой принадлежности крови по системе АВО с помощью стандартных сывороток, категорически запрещено, так как это может нарушить реакцию агглютинации.

Ошибки при определении Rh-фактора могут быть обусловлены снижением активности стандартных сывороток анти-Rh, нарушением пропорции сыворотка -кровь, несоблюдением температурного режима при исследовании, уменьшением времени экспозиции (менее 10 мин), добавлением изотонического раствора хлорида натрия, отсутствием контрольных проб на активность и специфичность сыворотки, групповыми несоответствиями стандартных сывороток и исследуемых и стандартных эритроцитов.

Для экспресс-метода определения Rh-фактора используют специальный реагент — сыворотку анти-Rh IV (АВ) группы, разведенную 20—30% раствором альбумина человека или 30—33% раствором полиглюкина, используемого как вещество, способ­ствующее агрегации эритроцитов при комнатной температуре.

Каплю стандартной сыворотки анти-Rh IV (АВ) группы наносят на предметное стекло или чашку Петри и параллельно наносят каплю резус-отрицательной сыво­ротки ГУ (АВ) группы, не содержащей антител. К ним добавляют в 2-3 раза меньшего объема каплю исследуемой крови, перемешивают углом предметного стекла, стеклянной палочкой или путем покачивания в течение 3—4 мин, после чего добав­ляют по 1 капле изотонического раствора хлорида натрия и по истечении 5 мин учитывают реакцию. При наличии агглютинации эритроцитов с сывороткой анти-Rh и отсутствии ее с контрольной сывороткой — кровь резус-положительная, при отсутствии агглютинации с обеими сыворотками — резус-отрицательная. В случае появле­ния агглютинации с обеими сыворотками реакцию следует рассматривать как сомнительную. Для экстренного переливания следует использовать только резус-отрицательную кровь, а при ее отсутствии возможно в опасной для жизни ситуации переливание резус-положительной крови после проведения пробы на совместимость по Rh-фактору.

Дата добавления: 2015-08-06 | Просмотры: 1340 | Нарушение авторских прав