Помещение, где проводится определение группы крови, должно быть светлым, с температурой от 15 до 25 оС.
На тарелку или предметное стекло наносятся пипетками (разными!) по 1-й крупной капле сыворотки 0(I), А(II), В(Ш). Заметив время, чистой стеклянной палочкой или чистым углом предметного стекла капли сывороток соединяются с каплями крови. Определение длится 5 минут, покачивая тарелку, затем к каждой смеси капель добавляют по 1-й капле физраствора и оценивают результаты. Лучше, если сыворотка будет 2-х различных серий. Результаты групп крови должны совпадать в обеих сериях сыворотки.
Оценка результатов изогемагглютинации:
■ при положительной реакции в смеси появляются мельчайшие красные зернышки склеивающихся эритроцитов. Зернышки сливаются в более крупные зерна, а последние — в хлопья. Сыворотка почти обесцвечивается;
■ при отрицательной реакции смесь в течение 5 мин остается равномерно окрашенной в розовый цвет и никаких зернышек не обнаруживается;
■ при работе с 3 сыворотками групп 0(I), А(П), В(Ш) возможны 4 комбинации реакций:
— если все 3 сыворотки дали отрицательную реакцию, то есть смесь равномерно окрашена в розовый цвет — это 0(I) группа крови;
— если отрицательную реакцию дала только сыворотка группы А(П), а сыворотки 0(I) и В(Ш) дали положительную реакцию, то есть появились зерна — это А(II) группа крови;
— сыворотка группы В(П) дала отрицательную реакцию, а сыворотки группы 0(I) и А(П) дали положительную — это В(Ш) группа крови.
— все 3 сыворотки дали положительные реакции — испытуемая кровь AB(IV) группы. В этом случае проводится исследование с сывороткой AB(IV) группы.
Обратите внимание! Капли исследуемой крови должны быть в 5-10 раз меньше капель сыворотки.
Ошибки изогемагглютинации.
Невыполнение агглютинации, где она должна быть, и наличие агглютинации, где ее быть не должно. Это может быть при слабом титре сыворотки плюс плохая агглютинация эритроцитов.
Наличие агглютинации, где ее быть не должно, — это псевдоагглютинация, когда кучки эритроцитов образуют «монетные столбики». Покачивание тарелки или добавление физраствора их разрушают.
Панагглютинация, когда сыворотка склеивает все эритроциты, в том числе и своей группы крови. К 5-й минуте признаки агглютинации исчезают.
Имеется еще так называемая холодовая панагглютинация, когда склеивание эритроцитов происходит из-за низкой температуры воздуха (ниже 15 °С) в помещении.
Во всех этих случаях проводят либо повторную реакцию, либо по стандартным эритроцитам.