АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Методы получения спермы

При выборе метода получения спермы следует ориентироваться на такой, который отвечает следующим основным требованиям: 1) позволяет получать весь эякулят без всяких потерь; 2) не снижает количества и жизнеспособности спермиев; 3) гарантирует здоровье производителей от травм и особенно от инфекционных заболеваний; 4) прост технически, выполним в производственных условиях без сложного оборудования; 5) обеспечивает стерильность получения спермы.

Все существующие методы получения спермы можно разделить на: 1) уретральные, позволяющие получать сперму непосредственно из уретры самца, и 2) влагалищные, заключающиеся в собирании спермы из влагалища самки после ее естественного осеменения.

Уретральные методы получения спермы. Русский метод получения спермы изобретен в 1931 г. Н. В. Комисаровым, В. И. Липатовым, И. М. Родиным. Сущность его заключается в получении спермы на искусственную вагину, позволяющей воспроизводить механические и термические раздражения нервных окончаний полового члена производителя и получать от него полноценный эякулят.

Искусственная вагина представляет собой прибор, состоящий из цилиндра, изготовленного из жести, резины или эбонита, в просвет которого вставлена эластическая резиновая трубка. Концы резиновой трубки завернуты на конце цилиндра, благодаря чему между внутренней поверхностью цилиндра и наружной поверхностью резиновой трубки образуется замкнутое пространство, сообщающееся с внешней средой через патрубок, предназначенный для вливания воды и надувания воздуха между стенками цилиндра и резиновой трубки. Один конец искусственной вагины остается открытым, а на другой укрепляют спермоприемник для собирания спермы. Конструкция искусственных спермоприемников имеет значительные вариации в зависимости от вида животных..

Искусственная вагина для жеребца состоит из алюминиевого цилиндра, суживающегося впереди и оканчивающегося горловиной, на которую заворачивают передний конец резиновой камеры и надевают спермоприемник в виде широкого резинового стакана. В середине цилиндра имеется патрубок с завинчивающейся металлической пробкой. Путем отвинчивания и завинчивания пробки можно регулировать давление в полости искусственной вагины. Сбоку к цилиндру прикреплена ручка для удобства фиксации вагины. При получении спермы в холодном помещении на вагину надевают чехол.

Искусственная вагина для быка имеет цилиндр из толстой резины и эластичную камеру, концы которой завернуты на концы цилиндра. Концы резиновой камеры на цилиндре закрепляются резиновыми кольцами.

Для наполнения вагины водой и воздухом на цилиндре имеется патрубок, в который вставлен эбонитовый краник. На одном из концов искусственной вагины фиксируется резиновым держателем стеклянный двустенный спермоприемник. модели приборов, но все они построены по одному принципу.

Искусственная вагина для барана имеет эбонитовый цилиндр и не содержит специальных колец для фиксации резиновой камеры, концы ее прочно удерживаются на цилиндре самостоятельно. Отверстие патрубка, находящегося на середине цилиндра, широкое, и в него вставляется резиновая пробка с эбонитовым краником.

Искусственная вагина для хряка. Для получения спермы от хряков пользуются укороченной искусственной вагиной, применяемой для быков, или одной из моделей А. В. Квасницкого. Укорочение искусственной вагины, предназначенной для быков, производят с учетом длины пениса хряка. При слишком короткой вагине наступает торможение половых рефлексов, а при длинной — потеря спермы (ее обратное вытекание). Поэтому необходимо производить индивидуальный подбор длины цилиндра. Спермоприемником служит темная широкогорлая стеклянная банка емкостью 500 мл с пластмассовым фильтром, который можно заменить сложенной вдвое стерильной марлей. Спермоприемник присоединяют к вагине с помощью отрезка резиновой камеры, на котором сверху делают отверстие диаметром около 3 мм для нагнетания воздуха из спермоприемника в момент наполнения его спермой. На спермоприемник надевают ватный или поролоновый чехол. В последнее время стали использовать разовые спермоприемники из полиэтиленовой пленки. Их применение наряду с другими мероприятиями снижает микробную загрязненность спермы.

^ Получение спермы посредством искусственной вагины. У животных всех видов метод искусственной вагины позволяет получать сперму двумя путями: 1) на живую самку, самца или кастрата и 2) на чучело.

Сперму «на самку» получают в обстановке, обычно создаваемой при естественном осеменении. Корову и овцу лучше помещать в станке. В момент садки техник держит подготовленную вагину справа на уровне таза самки, направляет половой член производителя в отверстие искусственной вагины и удерживает последнюю до конца эякуляции. При получении спермы на искусственную вагину требуется определенный навык. Нельзя подставлять вагину к головке полового члена преждевременно или, наоборот, поздно, так как это обусловливает торможение эякуляции. Вагину следует подставлять в тот момент когда половой член производителя приближается к крупу самки. При этом у быка и барана левой рукой через препуций слегка отводят половой член в сторону.

Делать это надо осторожно, чтобы не вызвать болевых ощущений. В половом члене быка много чувствительных нервных окончаний, и они сосредоточены главным образом в головке пениса. Одни из них, так называемые колбы Краузе, воспринимают температурные раздражения. При этом поверхностно лежащие колбы Краузе возбуждаются под влиянием холода, а глубоко лежащие — под воздействием тепла. Другие нервные окончания — Фатер-Пачиниевы тельца — воспринимают давление; находятся в висцеральном листке препуция. Имеются еще тельца Мейснера, являющиеся органами осязания, и нервные чувствительные окончания, воспринимающие боль. Возбуждение тех и других телец, а также холодочувствительных нервных окончаний тормозит проявление совокупительного рефлекса и эякуляции. У хряка и жеребца в отличие от быка и барана эякуляция происходит в результате соответствующих раздражений нервных окончаний не только головки, но и основания полового члена.

В момент эякуляции у крупного и мелкого рогатого скота искусственная вагина должна располагаться под углом 35—45° по отношении к горизонтальной плоскости. У животных других видов уклон может быть меньше. Слишком большие уклоны вагины вверх, вниз и в стороны могут травмировать половой член.

При получении спермы вместо коров можно использовать ваши или быков (менее желательно), а вместо овец — валухов или баранов. Эти животные во избежание торможения половых рефлексов у производителя, профилактики поражений связочного аппарата тазовых конечностей должны быть ниже производителя (для быка примерно 10 см) и с нешироким крупом.

От производителей всех видов сельскохозяйственных животных можно получать сперму в искусственную вагину. Искусственную вагину располагают сбоку чучела так же, как и при получении спермы на живую или чаще всего помещают вагину внутри чучела в тазовой полости. Для усиления половых рефлексов, получения большего и лучшего качества спермы от быков-производителей пользуются передвижным челом конструкции П. И. Пакепаса.

По окончании эякуляции искусственную вагину поворачивают спермоприемником вниз, открывают краник, чтобы выпустить обеспечить стекание спермы в спермоприемник. Затем сперме отделяют от вагины и немедленно передают его в лаборатормю, вагину — в моечную. Сперму хряков обычно получают на чучело. Предложено много чучел различных конструкций. Удобным оказалось деревянное чучело модели А. В. Квасницкого с откидной спинкой. Внутри чучела размещены электрическая вагина со спермоприемником и две электролампочки, поддерживающие определенную температуру. Чучело укреплено на деревянной площадке.

Имеется металлическое чучело конструкции В. Б. Дорошкова. Его достоинством является возможность обогревания задней части и изменения угла наклона искусственной вагины. Поэтому создаются наилучшие условия для процесса эякуляции.

Данное чучело легко поддается механической очистке, мойке, сушке и дезинфекции. Проходят производственное испытание два варианта металлических чучел: со съемным и обычным вагинодержателем.

При получении спермы у жеребца вагину нужно крепко держать у таза кобылы, чтобы создать нужный упор для полового члена. Вследствие сильного увеличения объема полового члена во время эрекции головки создается опасность разрыва камеры. Поэтому при чрезмерном повышении давления в вагине открывают краник или отвертывают немного винтовую пробку, выпускают часть воздуха и воды и вновь завинчивают пробку. Давление в вагине следует изменять на основе учета индивидуальных реакций жеребца.

Правила получения спермы. Получают сперму от производителей в условиях теплого, светлого, просторного манежа и идеальной чистоты. За 1,5—2 ч до получения спермы в манеже и лаборатории включают бактерицидные лампы, что уменьшает микробную и грибковую загрязненность спермы. Производителей, чучело или животное, на которое берут сперму, тщательно чистят, используют поролоновые накладки на искусственную вагину, применяют зоогигиенические фартуки. При чистке производителей особое внимание обращают на нижнюю часть живота, область препуциального отверстия, которую обмывают теплым 2%-ным раствором соды, фурацилином 1:5000. В теплое время года быков, хряков и жеребцов моют под душем. Некоторые специалисты рекомендуют полость препуция у быков промывать различными дезинфицирующими растворами. Однако следует иметь в виду, что дезинфицирующие вещества при длительном их применении уменьшают бактерицидные свойства слизистой оболочки препуция. На станциях искусственного осеменения в ряде стран полость препуция у быков перед получением спермы не промывают.

Чтобы не допустить несчастных случаев при получении спермы от производителей, особенно от быков и жеребцов, в манеже устраивают заградительные столбы. Лицам, получающим сперму от производителей, не следует присутствовать при ветеринарно-санитарных обработках, особенно таких, которые причиняют животным" боль. Вообще в станке и манеже, предназначенных для получения спермы, запрещается проводить ветеринарные мероприятия (туберкулинизация, взятие крови и др.), так как при этом у производителей возникают условные тормозные рефлексы на станок или манеж. Производителям всех видов животных перед получением спермы следует обязательно предоставлять проводку, что усиливает проявление половых рефлексов. Для улучшения качества эякулята в некоторых странах на станциях искусственного осеменения перед получением спермы быка сильно возбуждают коровой. Особенно хорошие результаты получаются при использовании самки в охоте. Макмилан и Фильден установили, что возбуждение быка в присутствии коровы в охоте увеличивает объем получаемой спермы на 18,4—18,9% по сравнению с объемом, получаемым при использовании для возбуждения той же коровы при отсутствии охоты. Половое возбуждение быка в течение 6—10 мин является важным средством улучшения качественных показателей спермы (увеличение объема, концентрации, уменьшение микробных тел и др.) и оплодотворяющей способности (Т. Стоянов).

Искусственную вагину для получения спермы у производителей необходимо правильно собрать и подготовить. Новую камеру тщательно моют горячей водой с содой, чтобы удалить сернистые соединен. После высушивания камеру натягивают на цилиндр так, чтобы гла.1-кая ее поверхность была обращена внутрь, а неровная — к цилиндру. Внутренняя трубка искусственной вагины должна быть равномерно натянута на основной цилиндр. Слабое или слишком сильное натяжение трубки, перекручивания ее могут нарушить коитус. Искусственную вагину надо приготовить так, чтобы воспроизвести естественные условия при коитусе (температуру, давление, скользкость и др.).

Каждый раз перед употреблением искусственную вагину обеззараживают в соответствии с действующей инструкцией по проведению искусственного осеменения. Если после обеззараживания внутренняя поверхность вагины остается влажной, ее досуха протирают стерильной ватой или хорошо проутюженной салфеткой. Очень быстро и надежно стерилизация вагины достигается в паровом стерилизаторе конструкции В. А. Пасечника. В стерилизаторе 50 л воды закипает за 15— 17 мин. Стерилизация паром при температуре 100° 60 вагин и 80 спермоприемников проводится за 1,5—2 ч.

Разовые спермоприемники из полиэтиленовой пленки вместе с искусственными вагинами стерилизуют автоклавированием.

Для заполнения вагины готовят воду, подогретую до 60—70е. Перед использованием вагины температуру проверяют химически метром, вводимым в просвет внутренней трубки. Постоянную туру в подготовленной искусственной вагине удобно поддерживать помещением ее в шкаф-термостат. При получении спермы тем вагины должна быть в пределах 40—42°.

Для смазывания внутренней стенки вагины используют простерилизованный на водяной бане чистый белый или желтый вазелин. Однако от вазелина резиновая камера быстро разрушается, ее эластичность уменьшается. Поэтому после получения спермы необходимо как можно быстрее очистить вагину от вазелина. Необходимо тщательно следить за тем, чтобы внутренняя поверхность искусственной вагины была смазана по всей ее длине, за исключением конца, который оставляют на 3—4 см несмазанным, чтобы он лучше зажимал спермоприемник. Особое внимание уделяют чистоте слермоприемника. Его каждый раз тщательно моют раствором соды и чистой водой. Перед употреблением спермоприемник стерилизуют в автоклаве или кипятят, а затем ополаскивают свежепростерилизованным физиологическим раствором хлористого натрия.

Объем эякулята быка и барана очень мал. Поэтому для предотвращения гибели спермиев от температурного шока при получении спермы необходимо иметь теплый, лучше стеклянный двустенный спермоприемник. Межстенное пространство спермоприемника для быка вмещает 100 мл, а для барана—50 мл воды. Вода должна быть подогрета до 30—35°.

При накачивании в вагину воздуха надо нагнетать его столько, чтобы выходное отверстие ее было полностью закрыто, а полость окружена упругими, напряженными, ровными (без складок) стенками. При недостаточном давлении эякуляция протекает вяло. Слишком сильное давление, затрудняющее введение полового члена в вагину, может нарушить эякуляцию: она нормально протекает у барана при давлении в вагине 40—60 мм ртутного столба.

При получении спермы следует учитывать индивидуальные особенности производителей, их разную степень реактивности. Одних быков сразу подводят к самке или чучелу, других предварительно выдерживают, не допуская к станку в течение 3—5 мин, и т. д.

Техник должен учитывать индивидуальные особенности производителей с целью получения максимального количества и лучшего качества спермы.

У хряков эякуляция нарушается или совершенно не происходит, если давление воздуха в искусственной вагине ослабевает. Поэтому после накачивания воздуха в искусственную вагину ее надо проверить; в ней не должно быть утечки воздуха или воды.

Каждый раз по окончании работы, и особенно когда при получении спермы произошли соскакивание или разрыв камеры, необходимо проверять наличие всех резиновых деталей вагины. Слетевшие с вагины резиновые кольца или оторвавшиеся части резиновой камеры могут надеться на половой член и пережать его вплоть до некроза.

После получения спермы воду из вагины выливают и тщательно отмывают теплым раствором или щелоком ее стенки от остатков спермы и смазки. Обмытую вагину ополаскивают чистой водой и хранят в сухом состоянии.

Стерильной салфеткой протирают препуций, на волосках которого в момент коитуса в искусственную вагину может оставаться вазелин. К нему прилипают различные механические примеси, вызывая баланопостит. Часто это бывает у быков, когда в качестве подстилки используют опилки. Поэтому опилки применять нельзя.

Метод получения спермы на вагину наиболее распространен в практике искусственного осеменения и считается лучшим из всех существующих методов как по простоте техники, так и по качеству и количеству получаемой спермы.

^ Фистульный метод получения спермы представляет большой теоретический и практический интерес. При этом методе значительно упрощается вся работа по подготовке и получению спермы, а самое главное, удается получать идеально чистую, стерильную сперму, обладающую высокой переживаемостью. При использовании такой спермы достигается повышенная оплодотворяемость. Производителей с уретральной фистулой можно использовать долгие годы.

Для получения спермы через фистулу проводят промежностную уретростомию. Впервые эту операцию предложил в 1923 г. проф. Л. С. Сапожников при заболеваниях полового члена у жеребцов. Позднее И. В. Глумаков начал применять эту операцию для получения спермы у быков, а в 1936—1938 гг. ее широко использовал в коневодческой практике X. И. Животков.

^ Получение спермы посредством спермособирателей. Спермособиратели для жеребцов и быков сконструированы А. А. Зальцманом и В. К. Миловановым. Спермособиратель представляет собой прибор, состоящий из тонкой резиновой трубки, один конец которой наглухо закрыт, а свободный конец растянут на широком резиновом кольце. Посредством спермособирателя сперму получают двумя способами: 1) без введения его во влагалище и 2) с введением во влагалище самки.

^ Получение спермы методом мастурбации — путем механического раздражения головки полового члена трением о нее препуциального мешка. Этот метод дает хороший эффект только у собак. Практика показала, что у собак быстро развивается рефлекс на мастурбацию, в силу которого при помещении собаки на стол и уже при подготовке к мастурбации у животного появляется эрекция, а после нескольких соприкосновений препуция с головкой полового члена происходит эякуляция. У копытных животных этим методом получать сперму не удается

^ Получение спермы методом массажа. У быка перед получением спермы волосы на препуциальном мешке подстригают. Без предварительного контакта производителя с коровой (без возбуждения) получить сперму не удается. Поэтому быка подводят к корове для общего возбуждения, под влиянием которого сперма из придатка семенника передвигается в ампулы спермиопровода. После этого руку, обильно смазанную вазелином, вводят в прямую кишку быка — за ампуловидное ее расширение, а затем отводят назад вместе со свободно перемещающимся участком прямой кишки в тазовую полость, где нащупывают шейку мочевого пузыря и расположенные кпереди ампулы спермопроводов, в форме утолщенных шнуров, и пузырьковидные железы. Простым поглаживанием рукой их содержимое выдавливают и по мере выделения собирают в стеклянный сосуд или в обычный спермоприемник.

^ Метод электроэякуляции. В лаборатории искусственного осеменения Украинского научно-исследовательского института животноводства степных районов имени М. Ф. Иванова «Аскания-Нова» был разработан метод электроэякуляции у баранов и козлов. Самцу, укрепленному в станке, вводят через прямую кишку серебряный электрод и располагают над мочевым пузырем. Вторым электродом служит пинцет Пэана, слагаемый на верхушку мошонки. Источником тока служит батарея. После установки прибора замыкают и размыкают электроцепь сначала короткими импульсами, а потом дают несколько удлиненных импульсов. Под влиянием электротока ампулы спермиопроводов сокращается и находящиеся в них спермин выделяются.

В настоящее время предложены методы электроэякуляции у животных разных видов (быков, баранов, кроликов, птиц).

^ Влагалищные методы получения спермы.

Губочный метод получения спермы предложил И. И. Иванов и в первые годы применения искусственного осеменения был самым распространенным. Его применяли для получения спермы от быков, баранов и жеребцов. Для свиней он оказался совершенно непригодным, так как вследствие узости вульвы и вагины во влагалище свиньи можно ввести только небольшую губку, которая не может впитать в себя весь эякулят. В настоящее время губочный метод в практике искусственного осеменения не применяется.

Сущность метода заключается в использовании губки, которую после соответствующей обработки вводят во влагалище самки, находящейся в состоянии половой охоты, а затем допускают коитус с производителем. После эякуляции губку извлекают из влагалища, а эякулят, выделившийся во время полового акта и впитавшийся в губку, отжимают руками или специальным прессом.

У свиней Е. Ингер и Н. Н. Михайлов предлагают получать сперму после введения стерильного тампона в переднюю часть влагалища. В этом случае во время эякуляции сперма вытекает из вульвы.

Влагалищный метод получения спермы предельно прост по технике, но он не применяется ввиду следующих недостатков: 1) сперма теряется в складках слизистой оболочки влагалища; 2) эякулят загрязняется влагалищной слизью, что снижает качество спермиев; 3) так же как и губочный, этот метод не исключает возможности распространения инфекции через сперму.

6. Метод замораживания сᴨȇрмы в облицованных гранулах. По этому методу для замораживания используют свежеполученную сᴨȇрму, разбавленную средами следующего состава:

Среда № 1. 11%-ный раствор лактозы или сахарозы 63 мл

Желток куриных яиц 30 мл

Глицерин 7 мл

Среда № 2. Вода дистиллированная 100 мл

Лактоза или сахароза 6 г

Натрий лимоннокислый трехзамещенный пятиводный 1,4 г

Глицерин 5 мл

Приготовленные среды наливают в стерильные полиэтиленовые емкости по 200--400 мл, которые подсоединяют к сᴨȇциальному устройству для разбавления сᴨȇрмы. После получения сᴨȇрмы ее разбавляют средой № 1 в соотношении 1: 1 и выдерживают при комнатной темᴨȇратуре 5--10 мин. Затем проводят дополнительное разбавление сᴨȇрмы средой № 2 до требуемой концентрации (20--25 млн. в дозе). Сᴨȇрму разбавляют с помощью сᴨȇциального устройства, позволяющего дозирование вводить среды в отделенную часть одноразового полиэтиленового сᴨȇрмоприемника со сᴨȇрмой. Сᴨȇрмоприемник соединяют с тонкостенной полимерной трубкой и выдавливают в нее разбавленную сᴨȇрму. Заполненную сᴨȇрмой трубку разделяют с помощью автомата АРС-2 на отдельные дозы по 0,33 мл с их герметизацией. Облицованные (герметизированные) гранулы помещают в алюминиевые контейнеры, которые закрывают пробками. Контейнеры закрепляют в обоймы сᴨȇциального устройства для эквилибрации и замораживания сᴨȇрмы. Это устройство помещают в холодильник для охлаждения до 2--5°. После 5--6-часовой выдержки при такой темᴨȇратуре обойму аппарата с контейнерами погружают в емкости с жидким азотом на 8--10 мин.

Замораживание сᴨȇрмы в соломинках (пайеттах). При замораживании используют полипропиленовые или поливинилхлоридные трубочки длиной 100 мм с внутренним диаметром 2,4 мм, одни конец котоҏыҳ предварительно закрывают сᴨȇциальным герметизирующим составом: парафин ГОСТ 13577--12,0, ᴨȇнтаэритритовый эфир канифоли -- 44,8, тальк -- 10,1, каучук натуральный -- 1,5, глицерин ГОСТ 6259--71--8,0, краситель -- 0,1. Сᴨȇрму разбавляют трисбуферной средой, содержащей 6,056 г трисбуфера (трисгидрооксиметиланометан), 3,4 г лимонной кислоты, 2,5 г фруктозы, 166,3 мл бидистиллированной воды. Раствор делят на две равные части, к ᴨȇрвой добавляют 15,8 мл бидистиллированной воды, 25 мл свежего яичного желтка, 100 тыс. ЕД антибиотиков, ко второй-- 19,7 мл глицерина, желток и антибиотики в тех же количествах. Первый разбавитель добавляют к эякуляту, предварительно доведенному до темᴨȇратуры 25°. Вторую среду медленно добавляют к предварительно разбавленной сᴨȇрме с таким расчетом, чтобы в соломинке (пайетте) содержалось 20--25 млн. подвижных сᴨȇрмиев. После разбавления сᴨȇрму расфасовывают по 0,4 мл в стерильных условиях вакуумным способом. Для этого необходимое количество промаркированных соломинок (от 100 до 500 шт. в зависимости от количества сᴨȇрмы) ставят открытыми концами вниз в стеклянную плоскодонную посуду со сᴨȇрмой помещают в анаэростат, из которого насосом вначале откачивают воздух до давления 0,95 атм., а затем впускают его. Воздух нагнетает сᴨȇрму в соломинку. Заполненные сᴨȇрмой пайетты зажимают в сᴨȇциальном держателе, при темᴨȇратуре 25° погружают в герметизирующий состав и закрывают второй конец. После герметизации соломинки помещают на медное сито (корзинку) и ᴨȇреносят в пары жидкого азота стационарного хранилища. Корзинку с соломинками опускают в хранилище до соприкосновения с поверхностью азота. Вскипание азота образует ток холодного газа, который охлаждает и замораживает сᴨȇрму до 100--130° в течение 5 мин. Соломинки с замороженной сᴨȇрмой ᴨȇреносят в стаканчики, помещают в каʜᴎϲтры и закладывают в хранилище с жидким азотом. Замороженную в соломинках сᴨȇрму ᴨȇред использованием оттаивают в стерильном полиэтиленовом мешочке, помещенном в теплую воду (38--40°) в течение 12--14 с. Независимо от метода замораживания сᴨȇрму оттаивают и проверяют на подвижность сᴨȇрмиев сразу после замораживания, второй раз -- через сутки, третий -- через 7--10 дней и четвертый раз -- через 14--20 дней. Замороженная сᴨȇрма для дальнейшего хранения допускается при подвижности сᴨȇрмиев не ниже 4 баллов. Для оценки оттаянной сᴨȇрмы в пайеттах (выборочно) производят смешивание ее из одной соломинки с равным количеством изотонического раствора лимоннокислого или бикарбоната натрия. Для этого один конец соломинки обрезают ножницами и опускают в раствор, а затем этими же ножницами обрезают и второй ее конец. Полученную смесь сᴨȇрмы и раствора ᴨȇремешивают соломинкой и с ее помощью берут каплю для оценки. Для осеменения используют сᴨȇрму не раньше 14--20 дней после замораживания. Оттаявшую сᴨȇрму вновь замораживать нельзя.

7. При визуально-цервикальном способе коров и телок осеменяют с использованием влагалищного зеркала и шприца-катетера. Сперму вводят в цервикальный канал на глубину 3-4 см под визуальным контролем.

Выявляют корову в охоте посредством быка-пробника. Заводят ее в манеж пункта искусственного осеменения, фиксируют в станке. Приступают к туалету наружных половых органов: обмывают их теплым раствором фурацилина (1:5000) из кружки Эсмарха. Насухо вытирают вульву стерильной салфеткой. Влагалищное зеркало обрабатывают следующим образом: моют в теплом 2-3%-ном растворе бикорбаната натрия; обильно промывают водой; насухо вытирают стерильным полотенцем; фламбируют. Перед введением во влагалище проверяют температуру влагалищного зеркала, касаясь его тыльной стороной руки, орошают стерильным 0,9%-м раствором NaCI.

Шприц-катетер стерилизуют, используя растворы, налитые в четыре флакона. В первом, третьем и четвертом флаконах находится 0,9%-й стерильный раствор NaCI, в третьем и четвертом – при температуре 38-400С согревания инструмента, во втором флаконе – 70%-й этиловый спирт. После каждого осеменения шприц-катетер протирают снаружи стерильной салфеткой, затем тампоном, смоченным 96%-м этиловым спиртом. Потом его промывают 5-6 раз во флаконе №1, набирая 0,9%-й раствор NaCI и выливая его в сливную чашу. Далее 3-4 раза промывают из флакона №2,3 и 4. Набирают сперму в шприц-катетер.

При помощи влагалищного зеркала раздвигают наружные половые губы и под визуальным контролем вводят шприц-катетер в цервикальный канал на глубину 3-4 см. Затем нажимают на поршень, вводя дозу спермы.

Повторно корову осеменяют через 10-12 ч.

Преимущество этого способа: введение спермы под визуальным контролем.

Основной недостаток состоит в том, что влагалищное зеркало сильно раздражает половые органы коровы.

8. Мано-цервикальным способом осеменяют только коров, телок не осеменяют по причине узости влагалища. Выявляют корову в охоте посредством быка-пробника. Заводят ее в манеж, фиксируют в станке. После туалета наружных половых органов, насухо вытирают вульву стерильной салфеткой (рисунок 6).

Используют набор стерильных одноразовых инструментов: полиэтиленовые ампулу, катетер длиной 75 мм и трехпалую перчатку. Кончик ампулы обрезают, присоединяют к ней катетер. Набирают дозу спермы (1 мл). На правую руку надевают перчатку, опрыскивают ее 0,9%-м стерильным раствором NaCI. В левую руку берут инструмент со спермой, правую вводят во влагалище, находят шейку матки и массируют ее. Руку отводят назад, но пальцы не вынимают из влагалища. Левой рукой подают инструмент со спермой в правую, которую продвигают вперед, нащупывают канал шейки матки и вводят катетер на глубину 6-8 см. Выдавливают из ампулы сперму и, не разжимая пальцев, отводят назад руку, инструмент опускают на дно влагалища. Затем находят шейку матки и повторяют массаж. Захватывают инструмент и выводят руку из влагалища.

Преимущества данного способа: обеспечивается массаж шейки матки, инструменты стерильны, способ нетрудоемкий, удается ввести сперму в цервикальный канал на большую глубину. Оплодотворяемость выше на 6-8%, чем при визо-цервикальном способе.

Недостаток: телок, мелких коров с узким влагалищем осеменять этим способом нельзя.

11. Способы искусственного осеменения овец включают в себя визуально-цервикальный и влагалищный.

После выявления овцы в половой охоте бараном-пробником ее перегоняют в манеж пункта искусственного осеменения и фиксируют в станке.

Наружные половые органы обрабатывают тампоном, смоченным кипяченой теплой водой.

При визуально-цервикальном способе используют влагалищное зеркало и шприц-катетер небольшого размера (микрошприц). Влагалищное зеркало после осеменения каждой овцы обрабатывают горячим 3%-м раствором бикарбоната натрия, обильно промывают водой, насухо вытирают стерильным полотенцем. Микрошприц после каждого осеменения обрабатывают в следующем порядке, смоченным 96%-м этиловым спиртом. Затем набирают в микрошприц 1 мл спермы барана. При помощи влагалищного зеркала открывают наружные половые губы и под визуальным контролем вводят микрошприцем в канал шейки матки на глубину 1-2 см дозу спермы. Доза свежеприготовленной спермы составляет 0,05 мл, разбавленной – 0,1-,015 мл. После осеменения каждой овцы шприц-катетер снаружи вытирают стерильной салфеткой, а затем тампоном, смоченным 96%-м этиловым спиртом. Повторно овцу осеменяют через 10-12 ч.

Влагалищным способом осеменяют ярок. Из-за узости влагалища сперму в него вводят (парацервикально) без применения влагалищного зеркала. Используют стеклянный шприц-катетер (микрошприц) или шприц-полуавтомат. Объем вводимой спермы увеличивают в 2-3 раза по сравнению с тем, который рекомендован для визуально-цервикального способа.

12. Способы искусственного осеменения свиней. Животных осеменяют как разбавленной, так и неразбавленной спермой.

Способ осеменения разбавленной спермой (способ ВИЖа) заключается в следующем. После выявления свиноматок в половой охоте хряком-пробником их перегоняют в манеж и размещают в индивидуальных станках. Наружные половые органы свиньи обмывают раствором фурацилина (1:5000).

Дозу спермы вводят из расчета 1 мл/кг массы свиньи, но не более 150 мл. используют набор ПОС-5 (полиэтиленовый для осеменения свиней). Флакон со спермой подогревают на водяной бане 7-10 мин при температуре 370С, соединяют с полиэтиленовым катетером полиэтиленовой муфтой. Катетер вводят в половые пути свиньи на глубину 35-40 см. приподнимают флакон выше спины на глубину 35-40 см. Приподнимают флакон выше спины животного, переворачивают его и, слегка сжимая рукой, вводят сперму. Повторно свиней осеменяют через 24 ч.

Способ осеменения разбавленной спермой (фракционный) состоит в том, что после подготовки животного в матку вводят катетер прибора УЗК-5 (универсальный зонд-катетер) до упора (глубина 35-40см). Сначала вводят сперму в объеме 50 мл (первая фракция), затем 100 мл глюкозо-солевого раствора или заполнителя (вторая фракция), после чего в матку накачивают воздух (третья фракция). Способ обеспечивает максимальное продвижение спермиев к яйцепроводам. Повторно свиноматку осеменяют через 24 ч.

10. Способы искусственного осеменения кобыл. Включают в себя мануальный и визуальный.

Мануальный способ: после выявления жеребцом-пробником кобылы в половой охоте ее фиксируют в станке. Бинтуют хвост и отводят его в сторону. Наружные половые органы обмывают кипяченой теплой водой и вытирают насухо салфеткой. Используют резиновый катетер Иванова и шприц на 50 мл, а также стерильные одноразовые полиэтиленовые перчатки.

После оценки спермы в шприц набирают дозу объемом 20-40 мл. техник-осеменатор надевает на правую руку стерильную перчатку и орошает ее 1%-м стерильным раствором NaCl. Рукой в перчатке берет катетер Иванова и продвигает его в матку на глубину 10-12 см. Широкий конец катетера поднимает левой рукой чуть выше крупа кобылы. Помощник присоединяет шприц со спермой к широкому концу катетера и вводит сперму. Повторно кобылу осеменяют через 24ч.

Визуальный способ: после выявления половой охоты у кобылы жеребцом-пробником ее фиксируют в станке. Хвост бинтуют и отводят в сторону. Наружные половые органы обмывают кипяченой теплой водой и вытирают насухо стерильной салфеткой.

При визуальном способе осеменения используют влагалищное зеркало и стеклянный или эбонитовый катетер длиной 50 см. Стерилизованное, увлажненное влагалищное зеркало вводят в половые пути, раскрывая наружные половые губы. Под визуальным контролем катетер вводят в матку на глубину 10-12 см. К стеклянному катетеру присоединяют шприц и вводят дозу спермы от 20 до 40 мл. повторно кобылу осеменяют через 24 ч.

9. Ректоцервикальный способ. Корове или телке сперму вводят с помощью стерильных одноразовых пластмассовых или стеклянных инструментов в шейку матки, фиксируя ее рукой через прямую кишку.

Положительное влияние на оплодотворяемость коров и телок оказывает массаж половых органов в процессе осеменения, который снимает ответную реакцию самки на введение инструментов в половые пути, а также усиливает моторику матки, что способствует продвижению спермиев к яйцеводам и наступлению овуляции.

Для осеменения коров и телок спермой в облицованных гранулах применяют специальный инструмент, который состоит из металлического трубчатого корпуса, проволочного стержня с дисковым упором и защитного чехла. Один конец корпуса снабжен круглым фланцем для фиксации удлинителя пальцами, а другой - наружной резьбой для соединения с инструментом.

Перед осеменением инструмент собирают в такой последовательности. Подготовленную гранулу со спермой вкладывают в канал одноразового катетера, который присоединяют к удлинителю. Поршнем толкателя спермодозу досылают до переднего упора. В таком виде удлинитель с наконечником помещают в тонкостенный полимерный чехол, один конец которого запаян и имеет сужение, а другой - фиксируют в подвижном замке. Через выходное отверстие наконечника инструмента делают прокол гранулы со спермой стерильной иглой.

Подготовленный инструмент вводят в половые пути самки. После прохождения влагалища наконечник устройства освобождают от чехла, одновременно вводя его в цервикальный канал самки. Снятие чехла производят путем сдвигания его в направлении, противоположном движению инструмента при помощи подвижного замка, в котором зафиксирован свободный конец полимерного чехла.

При введении наконечника в цервикальный канал на достаточную глубину выдавливают сперму путем нажатия на упорную кнопку толкателя.

После осеменения катетер вместе с чехлом удаляют, а удлинитель используют для последующих осеменений в том же порядке без дополнительной стерилизации. При использовании упрощенного удлинителя защитный чехол не применяют.

Если сперма расфасована во флаконы или другие емкости, из них в пипетку набирают дозу объемом 1 мл.

Для осеменения коров и телок спермой в соломинках применяют осеменительный инструмент, состоящий из металлической трубки с держателем и фиксатором, стержня и защитного чехла.

Перед осеменением оператор берет пакет с одноразовыми пипетками, протирает тампоном, смоченным 96°-ным спиртом, один из углов пакета и надрезает его стерильными ножницами или прорывает концом пипетки. Выдвинув пипетку да 1\3 длины, соединяет ее со стерильным шприцем при помощи муфты (полиэтиленовой, резиновой) или с полиэтиленовой ампулой, предварительно срезав ее колпачок. Затем он пипетку извлекает полностью, а надрезанный конец ампулы запаивает.

Уголок мешка с защитными чехлами, обработанный спиртовым тампоном, отрезают ножницами так, чтобы из отверстия можно было взять один чехол, конец которого выдвигают на 20-30 мм, при этом остальная часть его остается стерильной.

Левой рукой берут инструмент для осеменения, а правой - соломинку с оттаянной спермой. Соломинку следует слегка встряхнуть, держа за кончик, чтобы воздушный пузырек поднялся к пробке. Обычно встряхивают 2 раза. Поршень инструмента для осеменения оттягивают примерно на 90 мм и в трубку до упора вставляют соломинку со спермой. Конец ее отрезают продезинфицированными ножницами строго перпендикулярно у самой пробки (или стеклянного шарика) после воздушного пузырька. Ножницы должны быть острыми и использоваться только для отрезания соломинок. При отрезании пробки недостаточно острыми ножницами кончик соломинки сдавливается и становится овальным. В таком случае часть спермы при выталкивании из соломинки остается в защитном чехле.

Оператор одной рукой в перчатке, увлажненной теплой водой (лучше мыльной), раскрывает у животного наружные половые губы, другой - вводит пипетку во влагалище. Чтобы не попасть в отверстие мочеиспускательного канала, пипетку сначала продвигают на 10-15 см снизу вверх и вперед под углом 20-30°, далее - горизонтально до упора в шейку матки. Затем оператор вводит руку в перчатке в прямую кишку и фиксирует шейку матки для выравнивания складок влагалища, подводит пипетку к каналу шейки матки, продвигая ее несколько вперед.

Ректально фиксируя шейку матки между указательным и средним пальцами, большим ощупывает отверстие канала шейки с помощью этого пальца вводит в канал пипетку или, зафиксировав шейку матки кистью, направляет ее под контролем мизинца. Можно, наконец, шейку матки пальцами прижать к дну влагалища и под контролем ладони ввести пипетку в отверстие шейки. Убедившись, что пипетка попала в отверстие канала шейки, захватывает ее всей ладонью, приподнимает над дном таза и осторожными вращательными движениями надвигает ее на пипетку. Под контролем пальцев руки оператор продвигает пипетку на 6-10 см медленным давлением на поршень вводит сперму. После этого осеменительный инструмент осторожно извлекают из влагалища, а руку - из прямой кишки животного.

13. Трансплантация эмбрионов животных (animal embryo transplantation) [лат. transplantare — пересаживать; греч. embryon — зародыш] — метод ускоренного воспроизводства высокопродуктивных животных (доноров) путем получения и пересадки их эмбрионов менее ценным животным (реципиентам).

Отбор коров-доноров и реципиентов для трансплантации

Эффективность применения метода трансплантации эмбрионов во многом зависит от клинического и физиологического состояния коров, их способности реагировать на экзогенные гонадотропины и выделять достаточное число качественных зародышей. Следовательно, одним из наиболее существенных моментов в технологии трансплантации эмбрионов, способных повысить эффективность метода является отбор доноров и реципиентов.

Исходя из того, что донор - животное высокой племенной ценности, то первое, на что обращают внимание при их отборе - это молочная продуктивность, которая за ряд лактаций должна быть на 50-60% выше стандарта данной породы, а содержание жира в молоке - на20% и более. Число учитываемых признаков может быть расширено в зависимости от поставленных селекционных целей. Например, содержание белка в молоке, пригодность к машинному доению (форма вымени, скорость молокоотдачи), крепость конституции, экстерьер и т.д. Племенная ценность донора, наряду с оценкой собственного генотипа, должна подтверждаться продуктивностью родителей. Коровы-доноры должны иметь известное происхождение, подтвержденное документально по системам групп крови. В большинстве случаев в качестве доноров используют лактирующих или выбракованных коров (не связанных с гинекологической патологией), в возрасте от 4 до 8 лет, живой массой 500-650 кг, с удоем по наивысшей лактации не ниже 7 тыс. кг молока, жирностью 3,7% и более.

Не менее важным, а может и определяющим фактором при отборе доноров является состояние репродуктивных органов. Поэтому для гормональной обработки следует отбирать животных не ранее, чем через 2,5-3 месяца после отела. При этом уменьшение размеров матки до физиологически необходимых размеров не может служить гарантией готовности давать эмбрионы высокого качества. Такой гарантией может быть только проведение клинического обследования предполагаемого донора, которое при необходимости дает возможность определить направление восстановления функций размножения на основе экзогенной гормонотерапии.

Целесообразно проводить разовую индукцию полиовуляции потенциальных доноров с целью выяснения ответной реакции яичников на введение гонадотропина, после чего делается окончательное заключение о пригодности животного к использованию в технологии трансплантации. Коровы и телки с положительной ответной суперовулирующей реакцией (10 и более овуляций) и давшие не менее 4-х жизнеспособных эмбриона за первую обработку переводятся в группу постоянных доноров.

Оптимальный интервал между повторными обработками животных - 60-70 дней, в этом случае от донора можно извлекать эмбрионы до 5 раз в год. В технологии трансплантации эмбрионов коров-доноров с уровнем реакции полиовуляции до 6 желтых тел можно использовать повторно через 35-45 дней.

Дополнительными критериями отбора животных для трансплантации эмбрионов являются гормональный статус и метаболическая активность потенциальных доноров. Для получения от донора не менее 10 овуляций и 6 жизнеспособных эмбрионов необходимо, чтобы в крови коров содержание эстрадиола было на уровне 15,4 пг/мл, тестостерона - 0,18 нг/мл, ЛГ - 1,46 МЕ/л на 0-й день полового цикла, а также прогестерона - от 2,0 до 5,0 нг/мл (в среднем 3,55) и ЛГ - 1,54 МЕ/л на 10-й день полового цикла. Вызывание суперовуляции может быть эффективным при содержании в крови холестерина не менее 3,55 ммоль/л, β-каротина - 8,88 мкмоль/л, витамина А - 4,36 мкмоль/л, активность аланинаминотрансферазы не ниже 0,24 мкмоль/л.(4)

Сервис-период более точно и намного раньше, чем интервал между отелами, выявляет потенциальные возможности воспроизводительной функции у коров. Он тесно связан с межотельным периодом (коэффициент корреляции составляет 0.9). Оптимальный сервис-период не должен превышать 80 дней. Однако анализ сервис-периода, проведенный в ведущих племенных стадах черно-пестрой породы, показал, что данный показатель воспроизводительной функции коров имеет высокий коэффициент изменчивости, который составил 61%.

Сервис-период в основном зависит от интервала между отелом и первым осеменением, и интервала между первым и последним, т.е. эффективным осеменением. Высокопродуктивных коров следует осеменять на втором месяце после нормального отела. Это обусловлено тем, что первый половой цикл проявляется слабо, половая охота клинически плохо определяется или вовсе не обнаруживается.

Первое осеменение коров на втором месяце после отела не удлиняет сервис- и межотельный период. При оптимальном сервис-периоде до 80 дней после первого и второго осеменений средняя оплодотворяемость коров составляет 95-98%, а продолжительность межотельного периода не превышает одного года.

Для оценки воспроизводительных способностей коров, отобранных в качестве потенциальных доноров, необходимо анализировать такие параметры как оплодотворяемость от первого осеменения и индекс осеменения. При правильной технике осеменения и своевременном определении половой охоты оплодотворяемость коров от первого осеменения должна составлять в среднем 60%.

Важным показателем воспроизводительной способности коров является индекс осеменения, т.е. количество осеменений на одно оплодотворение. Индекс осеменения характеризуется высокой степенью изменчивости - коэффициент вариабельности может достигать 70%.

Существенное влияние на изменчивость индекса осеменения оказывают такие факторы, как продолжительность периода от отела до первого осеменения, своевременное выявление коров в половой охоте, оплодотворяющая способность спермы быка и др. Индекс осеменения коров, выделенных в группу потенциальных доноров, не должен превышать 1.5. В идеальном случае потенциальная корова-донор должна иметь индекс осеменения равный 1. У коров-доноров при всех отелах должны отсутствовать осложнения (мертворождаемость, задержание последа, послеродовые заболевания половых органов).(1)

В качестве реципиентов используются телки случного возраста (16-18 месяцев) не представляющие племенной ценности, живой массой 380-400 кг. Не рекомендуется использовать телок с низкой живой массой.

Реципиенты должны быть клинически здоровы, внутренние и наружные половые органы хорошо развиты, половой цикл должен соответствовать физиологическим параметрам. При ректальном исследовании матка и яичники реципиента должны находиться в тазовой полости. Шейка матки должна быть четко выражена, длиной 7-12 см, диаметром 2,5-3,0 см. Длина рогов матки от 20 до 35 см. Яичники должны иметь округлую или овальную форму, плотную консистенцию, размер 3х2 см у коров и 2,0х1,5 см у телок.

Исследованиями выявлена зависимость приживляемости зародышей от морфофункционального состояния органов воспроизведения реципиентов. У телок-реципиентов с нормально развитой половой системой уровень стельности в среднем составляет 57%, в то время как при отклонениях в развитии половой системы - 20%.

При отборе потенциальных реципиентов следует также учитывать параметры половой цикличности. В качестве реципиентов следует использовать телок с продолжительностью полового цикла 19-22 дня, поскольку у животных с менее (16-18) или более (23-26дней) продолжительным циклом отмечено достоверное снижение приживляемости зародышей на 15-20%.

При отборе потенциальных реципиентов для трансплантации существенное значение имеет определение качества желтого тела животного. Если на яичнике реципиента пальпируется желтое тело отличного качества (размер 1,0-1,5 см, выступает над поверхностью яичника, имеет грибовидную форму) или хорошего качества (размер 0,7-1,0 см, округлая или грибовидная форма), то уровень приживляемости зародышей составляет 53-57%. При удовлетворительном желтом теле (размер 0,5 см, округлая форма) уровень стельности находится в пределах 28-30%. Не рекомендуется использовать для пересадки эмбриона реципиента, на яичниках которого имеется одновременно желтое тело и фолликул до 1,0 см.

Для более объективной оценки функциональной активности яичников и снижения эмбриональной смертности при трансплантации, наряду с диагностированием качества желтых тел, следует проводить определение концентрации стероидных гормонов и биохимических показателей крови реципиентов на 6-7 день естественного или индуцированного полового цикла.

Пересадку эмбрионов следует проводить реципиентам, независимо от качества желтого тела, с уровнем прогестерона в крови от 2,0 до 4,9 нг/мл. Соотношение прогестерона к эстрадиолу должно быть 1:10. В случае использования телок в качестве реципиентов с уровнем прогестерона свыше 5 нг/мл приживляемость снижается на 10-17%, а с уровнем ниже 2,0 нг/мл - на 25-30%. Содержание холестерина должно быть в пределах от 2,60-3,90 мкмоль/л, β-каротина - 12,2-17,3 мкмоль/л.

После ветеринарных обработок коров и телок для трансплантации эмбрионов их можно использовать только через 3 недели. На каждого донора следует готовить 5-6 реципиентов.

Диагностика стельности реципиентов проводится ректальным методом спустя 2-3 месяца после эмбриопересадок.

Кормление доноров и реципиентов должно быть биологически полноценным. Недостаточный уровень кормления, несбалансированность рациона по общей питательности и другим жизненно важным элементам, использование кормов низкого качества ведут к нарушению обмена веществ, что оказывает отрицательное влияние на эффективность гормонального вызывания суперовуляции, качество полученных эмбрионов и их приживляемость.

Вызывание суперовуляции у коров-доноров

Для вызывания суперовуляции у крупного рогатого скота используются гонадотропные препараты (гонадотропин сыворотки жеребых кобыл - ГСЖК и фолликулостимулирующий гормон - ФСГ - гипофиза животных), для синхронизации половых циклов - аналоги простагландина Ф2-альфа (эстрофан, магэстрофан, клопростенол, суперфан, ремофан, клатрапростин, эстуфалан и др.). Препараты ГСЖК обладают комплексной фолликулостимулирующей и лютеинизирующей активностью. Период полураспада экзогенного ГСЖК у коров составляет около 6 дней. Соотношение ФСГ и ЛГ в различных партиях неодинаковое, что сказывается на результативности суперовуляции. Стимуляция роста фолликулов препаратами ГСЖК сопровождается, как правило, увеличением массы яичников, образованием после овуляции разного числа и величины желтых тел. Из-за длительного распада ГСЖК в крови животных накапливаются повышенные концентрации гормонов. Изменение эндокринного статуса при индукции суперовуляции может оказывать неблагоприятное действие на оплодотворяемость яйцеклеток, развитие зародышей, а также на физиологическое состояние половых органов (в частности, наблюдается кистозное перерождение яичников). Для исключения длительной стимуляции роста фолликулов применяется анти-СЖК. Обработка антисывороткой в день проявления охоты нейтрализует циркулирующую в крови животных ГСЖК и тем самым прекращает дальнейшую стимуляцию роста фолликулов в яичниках. Это создает более благоприятный фон для овуляции, оплодотворяемости яйцеклеток и последующего развития зародышей. В практике используются стандартные гонадотропные препараты высокой степени очистки: сергон (Чехия), фоллигон (Голландия), прегмагон (Германия). Эти препараты инъецируют донорам на 11-12-ый день полового цикла, однократно, в дозе 50 И.Е. на 100 кг живой массы животного. Применение этих гонадотропинов обеспечивает вызывание множественной овуляции у 75-78% животных и получение в среднем 3,5-4,0 жизнеспособных эмбриона на донора.

Опыт работы по вызыванию суперовуляции у коров-доноров сывороточными и гипофизарными препаратами показал, что при использовании гипофизарных гормонов (ФСГ-п, ФСГ-супер, фолликотропин, фоллитропин) получаются более стабильные и высокие результаты суперовуляции и эмбриопродукции (табл.1). Так, процент коров-доноров, реагирующих на обработку сывороточными гонадотропинами, составил 75,0-78,3%, гипофизарными препаратами - 85,3-88,8%, число овуляций на донора - соответственно 8,3-9,7 и 10,2-12,0, количество пригодных эмбрионов - 3,5-4,0 и 5,5-6,1.

Синхронизация половых циклов доноров и реципиентов

Синхронность проявления эструса между донором и реципиентом - важнейшее условие высокой приживляемости эмбрионов. Для синхронизации охоты используют простагландин ПГФ2-альфа или его синтетические аналоги (эстрофан, магэстрофан, ремофан, клопростенол, клатрапростин, суперфан, эстуфалан и др.).

По технологии трансплантации на каждого донора следует подготавливать не менее 5 реципиентов, причем день охоты реципиента должен совпадать с днем первого осеменения суперовулирующего донора. В случае использования в технологии трансплантации постоянных доноров (проверенных на гормональную обработку и имевших стабильный выход качественных эмбрионов) число реципиентов можно увеличить до 10.

Перед гормональной обработкой животных исследуют ректально (определяют размеры и форму яичников, наличие и выраженность желтого тела). Лютеиновая фаза цикла соответствует оптимальному времени для инъекции препаратов. Простагландины вводят внутримышечно в дозах, указанных в наставлениях по их применению. Как правило, животные приходят в охоту через 48-72 часа после инъекции препарата. Не пришедших в охоту животных обрабатывают повторно через 10-11 дней с момента первого введения ПГФ2-альфа. Двукратное введение препарата (в любую фазу полового цикла) с 10-ти дневным интервалом эффективно использовать на большом поголовье доноров и реципиентов, так как это способствует увеличению числа животных, проявивших признаки половой охоты, и снижает трудоемкость операций обслуживающего персонала.

Исследованиями установлено, что комплексное использование гормональных препаратов ФСГ, ПГФ2альфа Гн-РГ для синхронизации эструса у самок крупного рогатого скота существенно повышает эффективность работ по трансплантации. Из 50 телок, обработанных в опыте, клинически выраженную охоту проявили 88% животных, что на 11,4% больше, чем в контроле, а число реципиентов, пригодных для эмбриотрансплантации, и приживляемость пересаженных зародышей увеличилась соответственно на 15,0 и 12,2%.

Эффективность способов подготовки животных для эмбриотрансплантации

Аналогичная закономерность наблюдалась по группе коров-доноров. Количество животных, пригодных для использования в качестве доноров, увеличилось на 15,5, а число коров, положительно реагирующих полиовуляцией, на - 14,8%. В опытной группе по сравнению с контрольной повысился выход полноценных эмбрионов от донора на 24%, а выход зародышей, пригодных для пересадки, от общего числа извлеченных зародышей --14,7%.

Таким образом, комплексное использование гормональных препаратов для синхронизации эструса самок крупного рогатого скота позволяет повысить количество телок-реципиентов и коров-доноров, пригодных для эмбриотрансплантации, соответственно на 15 и 15,5%, уровень приживляемости зародышей - на 12,2%, выход полноценных эмбрионов от числа извлеченных - на 14,7%.(4)

Осеменение коров-доноров.

Результаты суперовуляции определяются эффективным осеменением коров-доноров. Проблема оплодотворения яйцеклеток и получения биологически полноценных эмбрионов все ещё остается открытой. Как показывают результаты исследований, только 60-65% эмбрионов пригодны для трансплантации, остальные яйцеклетки, образовавшиеся в результате гормональной обработки гонадотропинами, оказываются либо неоплодотворенными, либо после оплодотворения отстают в развитии или дегенерируют. Причина этих нарушений остается неизвестной.

Для искусственного осеменения коров-доноров необходимо использовать сперму только выдающихся быков-производителей, достоверно оцененных по качеству потомства. Надежным критерием наследственных качеств быка служит коэффициент повторяемости, т.е. коэффициент регрессии будущих дочерей быка на число фактически имеющихся дочерей. Если генетическое превосходство дочерей быка, выраженное величиной отклонения от сверстниц, умножить на коэффициент повторяемости, то полученная величина будет характеризовать генетическое превосходство будущих дочерей быка, или предсказанную разность. Предсказанная разность является одним из наиболее объективных качеств быка, разработанных в современной селекции молочного скота.

Для искусственного осеменения коров-доноров следует использовать, как правило, сперму производителей 1-й племенной категории, т.е. таких, племенная ценность которых превышает среднюю популяционную величину на два стандартных отклонения. В этом случае существенно повышаются темпы селекции, и улучшается племенная ценность новой генерации.

Племенной подбор быков-производителей и коров-доноров осуществляется по заказному или целевому спариванию родителей. В его основе должен лежать принцип индивидуального подбора в соответствии с селекционной программой совершенствования существующих или создания новых пород, типов и линий.

Требования к оценке оплодотворяющей способности спермы быков, предназначенной для осеменения коров-доноров, должна быть значительно выше, чем при оплодотворении остальных коров. Для повышения оплодотворяемости доноров и выхода эмбрионов, наряду с использованием высококачественной спермы, необходимо определить сроки половой охоты для своевременного проведения искусственного осеменения. Как правило, коров с гормонально вызванной половой охотой осеменяют дважды: первый раз при начале появления половой охоты и второй - через 12-24 часа.

В нашей стране коров-доноров искусственно осеменяют дважды в день с интервалом 10-12 часов каждый раз двумя-тремя дозами замороженной спермы. Так как при суперовуляции повышается число овулировавших яйцеклеток, в каждой дозе спермы должно быть не менее 50 млн подвижных спермиев.

День, в который проводится искусственное осеменение коровы-донора, считается датой оплодотворения. С этого дня начинается отсчет развития эмбрионов in vivo до их извлечения.(1)

Извлечение и оценка эмбрионов.

Эффективность метода трансплантации во многом определяется способом извлечения эмбрионов. Оплодотворенные яйцеклетки от суперовулированных коров-доноров могут быть извлечены тремя способами: после убоя коровы-донора; хирургическим; нехирургическим.

Извлечение эмбриона после убоя коровы-донора. Самым простым и надежным способом извлечения эмбрионов является убой коровы-донора. Этот способ практиковался только на первых этапах освоения метода трансплантации. В настоящее время из-за потери генетически ценной коровы-донора он не используется.

Извлечение эмбриона хирургическим способом. Важным моментом, обеспечивающим эффективность извлечения эмбрионов, является определение стадии их развития и места положения в половых путях коровы-донора. Для трансплантации рекомендуется использовать бластоцисты, поэтому эмбрионы извлекают между 7-8-ми сутками после первого искусственного осеменения.

Имеется несколько способов хирургического извлечения эмбрионов: разрез верхнего свода влагалища, лапаротомия по белой линии живота и лапаротомия в области голодной ямки.

Хирургический способ извлечения эмбрионов является трудоемким, дорогостоящим и, что особенно важно, им нельзя пользоваться многократно. В настоящее время хирургический способ извлечения применяется в редких случаях, главным образом в научных целях.

Извлечение эмбрионов нехирургическим способом. Основное преимущество нехирургического способа извлечения эмбрионов заключается в простоте манипуляций. Для этого не требуется специального операционного помещения. Эмбрионы можно извлекать непосредственно в производственных условиях. С селекционной точки зрения, при правильном применении нехирургического способа воспроизводительная способность доноров не нарушается, что позволяет многократно использовать генетически ценных коров-доноров для получения от них большого числа потомков.

В общем виде извлечение эмбрионов нехирургическим методом происходит по следующей схеме. Коров-доноров обследуют на наличие желтых тел, чистят и моют, ограничивают рацион и кратность кормления, а за сутки прекращают кормление и поение. Перед самым извлечением эмбрионов дезинфицируют наружные половые органы коров-доноров. Извлекают эмбрионы под местной анестезией. В рог матки вводят продезинфицированный двухканальный резиновый или пластмассовый катетер с надувным баллончиком, в который нагнетают 10 куб см воздуха. Выход из рога матки закрывают, надувая воздухом тонкостенный резиновый баллончик. Затем в рог вводят промывную жидкость и осторожно массируют, чтобы отделить эмбрионы от стенок матки. В качестве промывной среды применяют PBS до 500 мл. Этот состав используется и для кратковременного культивирования эмбрионов.

Вымывание повторяют 5-8 раз. Основную часть эмбрионов извлекают в первых трех-четырех смывах. Промывание в обоих рогах матки, включая введение катетеров, продолжается 20-50 минут. За это время можно извлечь более 50% эмбрионов, находящихся на стадии морулы или бластоцисты.

После вымывания эмбрионов в матку вводят раствор антибиотика с целью антисептики.

Во многих странах разработаны различные устройства для нехирургического извлечения эмбрионов. В нашей стране успешно освоены нехирургические методы извлечения, позволяющие получать 60% от числа овулировавших яйцеклеток. Нужно иметь в виду, что в среднем из вымытых яйцеклеток до 25% оказываются неоплодотворенными или дезинтегрированными. Причины выхода биологически неполноценных зигот до сих пор окончательно не выяснены.

Кратковременное культивирование и хранение эмбрионов. Манипуляции с ранними эмбрионами, находящимися на предимплантационных стадиях развития, т.е. от момента их получения до введения в рога матки реципиента, занимают от 1 до 5 часов. В этот период нужно создать оптимальные условия, обеспечивающие сохранение их биологических качеств. Кратковременное хранение эмбрионов дает также возможность транспортировать их в другие хозяйства.

Эмбрионы крупного рогатого скота можно сохранить путем пересадки их в яйцепровод самок других видов млекопитающих. Лучше всего обеспечивается нормальное предимплантационное развитие эмбрионов коров в яйцепроводе крольчих. Установлено, что эмбрионы коровы в яйцепроводе крольчихи могут успешно развиваться до стадий, пригодных для трансплантации реципиентам, т.е. до морулы и бластоцисты. Недостатком этого метода является его трудоемкость и возможные потери зигот при их переносе. В настоящее время широкое распространение получил метод краткосрочного хранения эмбрионов in vitro.

После извлечения и оценки на жизнеспособность эмбрионы переносят в питательные среды с температурой 37 градусов. Большинство сред,

в которых культивируют и хранят эмбрионы, включают растворы солей, аминокислоты с бикарбонатным ионом как буферным агентом, обеспечивающим pH в пределах 7.2-7.6. Проведенные исследования показали, что продолжительность культивирования без потери биологических качеств эмбрионов возможна до 95 часов.

В последние годы проводятся исследования по краткосрочному хранению эмбрионов in vitro при их охлаждении ниже 37 градусов. Разработка этого метода имеет большое практическое значение, т.к. позволяет существенно упростить манипуляции с эмбрионами и надежнее обеспечивает их транспортировку.

Оценка эмбрионов. Оценка эмбрионов крупного рогатого скота производится несколькими методами. Наибольшее распространение получил морфологический метод. Установлено, что результаты имплантации эмбрионов зависят от того, насколько полно оценена способность оплодотворенных яйцеклеток к развитию.

Дата добавления: 2015-09-03 | Просмотры: 2133 | Нарушение авторских прав