Эта реакция наиболее широко применяется в лабораторной практике для серологической диагностики бактериальных инфекций и для серологической идентификации выделенных микробов. Этому в значительной степени способствуют простота постановки реакции. РА протекает в две фазы:
1) Соединение антигена с антителом
2) Выпадение образовавшегося комплекса антиген + антитело
(агглютината) в растворе солей (электролите).
Антигеном в РА с сывороткой крови может служить взвесь живой (18-24 часовой) культуры в изотоническом растворе хлорида натрия или микробы, убитые формалином, спиртом, прогреванием. Взвеси убитых микробов (диагностикум) являются наиболее стабильными антигенами.
Существуют два метода постановки РА:
1) Пробирочный, при котором ставят развернутую Ра в пробирках.
2) Пластинчатый – на предметном стекле.
Второй метод применяют при использовании адсорбированных сывороток и при постановке ускоренных серологических реакций.
Реакцию агглютинации на предметном стекле ставят следующим образом:
пастеровской пипеткой наносят на обезжиренное стекло капли сыворотки в нужных разведениях. В каждую каплю сыворотки вносят петлю 24 часовой агаровой живой культуры или пастеровской пипеткой вводят каплю взвеси убитых микробов (диагностикума), тщательно перемешивают. Учет реакции производят через 5-10 минут. При положительной РА образуется комплекс АГ + АТ, который виден невооруженным глазом в виде «снежных хлопьев».
Надосадочная жидкость прозрачна, при отрицательной РА в капле сыворотки сохраняется гомогенная мутность.
Приложение №3
Демонстрационная, развернутая РА Райта.
1. В штативе устанавливается 7 (семь) пробирок, на каждой пробирке указывается разведение сывороток больного: 1:50; 1:100; 1:200; 1:800; 1:1600; на пробирках контролей пишут КС - «контроль сывороток», КА - «контроль антигена».
2. Во все пробирки, кроме одной и пробирки КС наливают по 1 мл изотонического раствора хлорида натрия.
3. В отдельной пробирке готовится исходное (основное) разведение сыворотки. Для приготовления исходного разведения 1:50 в пробирку наливают 4,9 мл изотонического раствора хлорида натрия и 0,1 мл сыворотки.
4. По 1 мл исходного разведения наливают в пробирки № 1 и № 2 и в «КС». Содержимое пробирки № 2 тщательно перемешивают и 1 мл переносят в пробирку № 3, из нее в № 4 и так далее. Из последней 1 мл выливают в дез. раствор. Во всех пробирках должен быть одинаковый объем жидкости.
5. Во всех пробирках кроме «КС» вносят по 1-2 капли антигена – диагностикума. В пробирках появляется равномерная муть, а «КС» должен оставаться прозрачным. Пробирки тщательно встряхивают и помещают в термостат при t 37°С. Предварительный учет результата производят через 2 часа, окончательный через 18-24 часа.