АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЧАСТЬ. Устройство микроскопа

1. Оптическая часть: окуляр, объектив, конденсор Аббе, осветительный прибор (зеркальце).

2. Механическая часть: штатив, подставка, предметный столик, тубус, тубу-содержатель, макровинт, микровинт. Увеличение микроскопа равно произведению увеличения объектива на увеличение окуляра.

Все микробиологические исследования по выявлению и идентификации микроорганизмов осуществляются в научно-исследовательских институтах и бактериологических лабораториях центров Госсанэпиднадзора.

Для обеспечения требований безопасности при работе с микроорганизмами III—IV групп патогенности (см. приложения 7.1) и поточности продвижения потенциально инфицированного материала в бактериологической лаборатории выделяют «чистую» и «заразную» зоны.

В состав бактериологической лаборатории входят:

*регистратура (приемная) — производится прием и регистрация поступившего для исследования материала, дается номер отобранной пробе;

* средоварная — приготовление питательных сред из сухих;

* препараторская — подготовка лабораторной посуды, ватно-марлевых пробок, тампонов и т. д.;

* стерилизационные — стерилизация питательных сред, растворов, посуды;

* «заразные» стерилизационные — служат для обеззараживания патологического материала; посевная — производится первичный посев материала на питательные среды;

* лабораторные комнаты — служат для исследований на капельную, кишечную группы бактерий, для санитарно-бактериологических исследований. Лабораторное помещение оборудуется столами лабораторного типа, шкафами и полками для хранения необходимой при работе аппаратуры, посуды, красок и реактивов.

Приложение 7.1 (обязательное)

Санитарные правила СП 1.2.731-99

Классификация патогенных для человека микроорганизмов

III и IV групп патогенности (извлечение из приложения 5.1 к

СП 1.2.011-94)

Бактерии III группа

1. Bordetella pertussis

2. Borrelia recurrentis

3. Campylobacter fetys

4. Campylobacter jejuni

5. Clostridium botulinium

6. Clostridium tetani

7. Corynebacterium diphteriae

8. Erysipelothrix rhusiopathiae

9. Helicobacter pylori

10. Leptospira interrogans

11. Listeria monocytogenes

12. Mycobacterium leprae

13. Mycobacterium tuberculosis Mycobacterium bovis Mycobacterium avium коклюша возвратного тифа абсцессов, септецимий энтерита, холецистита ботулизма столбняка дифтерии эризепелоида гастрита, язвенной болезни желудка и 12-перстной кишки лептоспироза листериоза проказы туберкулеза

14. Neisseria gonorrhoeae

15. Neisseria meningitidis

16. Nocarolia asteroides

17. Proactinomyces israelii

18. Salmonella paratyphi A

19. Salmonella paratyphi В

20. Salmonella typhi

21. Shigellaspp.

22. Treponema pallidum

23. Yercinia pseudotuberculosis

24. Vibrio cholerae 01

IV группа

1. Aerobacter aerogenes

2. Bacillus cereus

3. Bacteroides spp.

4. Borrelia spp.

5. Bordetella bronchiseptica

Bordetella parapertussis

6. Campylobacter spp.

7. Citrobacter

8. Clostridium perfringens Clostridium novyi Clostridium septicum Clostridium histolyticum Clostridium bifermentans

9. E. coli

10. Eubacterium endocarditidis

11. Eubacterium lentum Eubacterium ventricosum гонореи менингита нокардиоза актиномикоза паратифа А паратифа В брюшного тифа дизентерии сифилиса псевдотуберкулеза нетоксигенной диареи энтерита пищевой токсикоин-фекции абсцессов легких, бактериемии клещевого спирохетоза бронхосептикоза паракоклюша гастроэнтерита, гингивита, периодонтита местных воспалительных процессов, пищевой токсикоинфекции газовой гангрены энтерита септического эндокардита вторичных септеце-мий, абсцессов

12. Flavobacterium meningoseptium

13. Haemophilus influenza

14. Hafnia alvei

15. Klebsiella ozaenae

16. Klebsiella pneumoniae

17. Klebsiella rhinoscleromatis

18. Mycobacterium spp. Photochromogens Scotochromogens Nonphotochromogens Rapid growers

19. Micoplasma hominis 1

Micoplasma hominis 2 Micoplasma pneumoniae

20. Propionibacterium avidum

21. Proteus spp.

22. Pseudomonas aeruginosa

23. Salmonella spp.

24. Serratia marcescens

25. Staphilococcus spp.

26. Streptococcus spp.

менингита, септецемий менингита, пневмонии, ларингита холецистита, цистита озены пневмонии риносклеромы микробактериозов местных воспалительных процессов, пневмонии сепсиса, абсцессов пищевой токсикоинфекции, местных воспалительных процессов местных воспалительных процессов, сепсиса сальмонеллезов местных воспалительных процессов, сепсиса пищевой токсикоинфекции, септецемий, пневмонии пневмонии, тонзиллита, полиартрита, септецемий энтерита, колита актиномикоза

27. Yersinia enterocolitica

28. Actinomyces albus

Для того чтобы увидеть микроорганизмы, их необходимо окрасить. Существуют простые и сложные способы окрашивания микроорганизмов. При простом способе окрашивания на мазок наносится один краситель, при сложном способе окрашивания — 2 или более красителей. К таким способам окрашивания относится окраска по Граму. Соответственно выделяют формы бактерий грамположительные (окрашиваются в фиолетовый цвет) и грамотрицательные (окрашиваются в красный цвет). Грамположительные бактерии имеют несложно организованную, но мощную клеточную стенку, состоящую из множественных слоев пептидогликана, включающих уникальные полимеры тейхоевых кислот. Грамотрицательные бактерии имеют более тонкую клеточную стенку, включающую бимолекулярный слой пептидогликана и не содержащую тейхоевой кислоты.

Грам +

Грам -

Мембрана

Мукопептиды (муреины)

Мембрана

Лишшолисахариды и белки

Рис. 2. Схема строения клеточной стенки грамположительных и грамотрицательных микроорганизмов

Приготовление мазка из зубного налета

1. Небольшое количество зубного налета снять острым концом спички.

2. Растереть на предметном стекле размером с пятикопеечную монету.

3. Мазок зафиксировать путем трехкратного проведения над пламенем горелки.

4. Мазок окрасить по Граму.

5. Промыть водой.

6. Высушить фильтровальной бумагой и на воздухе.

7. Микроскопировать.

Окраска препарата по Граму

1. Небольшое количество генцианвиолета напить на препарат; время окраски — 2 мин.

2. Избыток краски слить в лоток, на препарат нанести пипеткой несколько капель раствора Люголя на 1 минуту.

3. На препарат налить несколько капель спирта, обесцвечивание проводить до отхождения фиолетовых капель — струи краски, но не более 30 с.

4. Мазок тщательно промыть водой.

5. Мазок докрасить разведенным фуксином — 2 мин.

Микроскопирование препарата

1. Установить освещение: конденсор должен быть поднят до упора, настройку производить с объективом малого увеличения 8-х — необходимо белое освещенное поле.

2. Препарат поместить на предметный столик.

3. Макровинтом опустить объектив на расстояние 0,5 см от препарата.

4. Глядя в окуляр, получить изображение препарата, вращая макровинт против часовой стрелки (на себя).

5. Произвести точную фокусировку с помощью микровинта.

6. Переместить револьвер на большое увеличение (объектив 40-х) и провести дефокусировку только микровинтом.

7. После просмотра препарата перевести револьвер на увеличение 8-х (малое) и только после этого снять препарат с предметного столика.

Кроме окраски по Граму к сложным дифференциальным методам окраски относятся:

1. Окраска кислотоустойчивых бактерий по Цилю— Нильсену фиксированный на пламени горелки мазок окрашивают 3—5 мин раствором карболового фуксина Циля или окрашенной фуксином бумажкой с подогреванием до появления паров, но не доводя краску до кипения;

* дают препарату остыть, бумажку снимают, сливают избыток краски, препарат промывают водой;

* окрашенный препарат обесцвечивают 5% H2SO4 (серной кислотой) в течение 3—5 с или 96° этиловым спиртом, содержащим 3% по объему соляной кислоты, несколько раз погружая в стаканчик с раствором;

* после обесцвечивания остаток кислоты сливают, препарат промывают водой;

* докрашивают дополнительно метиленовой синью Леффлера 3—5 мин, промывают водой, подсушивают и микроскопируют.

Результаты окраски: при окраске препаратов по методу Циля—Нильсена кислотоустойчивые бактерии окрашиваются фуксином в красный цвет.

2. Окраска по Романовскому—Гимзе

Краска Романовского—Гимзы состоит из смеси азура, эозина и метиленовой сини. Перед употреблением к 10 мл дистиллированной воды прибавляют 10 капель краски Романовского—Гимзы. Приготовленный раствор краски наносят на фиксированный мазок и оставляют на 1 ч. Затем краску сливают, препарат промывают водой и высушивают на воздухе. Краска Романовского—Гимзе окрашивает микробы в фиолетово-красный цвет.

Дата добавления: 2015-09-03 | Просмотры: 747 | Нарушение авторских прав