Методические указания для студентов к практическому занятию № 3.

Модуль 3. Общая и специальная вирусология.

Содержательный модуль 16. Специальная вирусология.

Тема 3: Лабораторная диагностика аденовирусных инфекций.

Актуальность темы: Актуальность представляет отдельные биологические аспекты аденовирусной инфекции, а именно, способность вызывать онкогенную трансформацию у животных, способность к длительной латенции у некоторых типов клеток хозяина, возможность интерференции с другими вирусами с образованием гибридных вирусов, обладающих особенными биологическими свойствами, в том числе и усиление онкогенности.

На модели аденовирусов изучают важные молекулярно-биологические факторы.

Аденовирусные заболевания (adenovirosis, pharyngoconjunctival fever- PCF - англ.) - острые вирусные болезни, протекающие с преимущественным поражением органов дыхания, глаз и лимфатических узлов.

Аденовирусы впервые были выделены американскими учеными Р.Дж. Хюбнером, У.П. Роу, Л. Гилмором, Р. Паррот, Т.Е. Уордом в 1953 году из ткани миндалин, аденоидов и лимфатических узлов, полученных от практически здоровых детей во время операций. Немного позже у лиц с заболеваниями верхних дыхательных путей, сопровождающихся конъюнктивитами, были выделены другие типы аденовирусов. Сам термин "аденовирусы" предложен К. Эндерсом, T. Френсисом в 1956 г. Болезни, вызываемые данной группой вирусов, получили название аденовирусных заболеваний.

Аденовирусы относятся к семейству Adenoviridae, в которое входят два рода – аденовирусы млекопитающих (в том числе и человека) и аденовирусы птиц. В настоящее время известны 94 серовара, из них 32 - выделены от человека. Очевидно, аденовирусы – основная группа вирусов, которые можно выделить из лимфатической ткани ротоглотки и испражнений любого, практически здорового человека. Вспышки заболеваний чаще обусловлены типами 3, 4, 7, 8, 14 и 21. Тип 8 вызывает эпидемический кератоконъюнктивит. Диаметр вирионов аденовирусов 60–90 нм, они содержат двунитчатую дезоксирибонуклеиновую кислоту (ДНК), покрытую капсидом. ДНК формирует сердцевину вируса, видную в электронный микроскоп. В составе всех аденовирусов обнаружены 7 антигенов, но не все они имеют одинаковое значение: А-антиген групповой – общий для всех сероваров аденовирусов, обладает комплементсвязывающей активностью; В-антиген токсический; С-антиген токсический, типоспецифический, способствующий абсорбции вирусов на эритроцитах.

Аденовирусы устойчивы к воздействию факторов внешней среды. Так, при температуре 36-37^оС они сохраняют активность в течение 7 дней, при 22-23^оС - 14 дней, при 4^оС - 70 дней. Инактивируются аденовирусы нагреванием до температуры 56^оС в течение 30 мин, а также при воздействии 5% раствора фенола, 1% раствора хлорамина, 3% раствора перекиси водорода - в течение 15-30 мин. Устойчивы к эфиру.

Источник инфекции: больные с клинически выраженными или стертыми формами заболевания, меньшее значение в распространении имеют вирусоносители. Заражение может произойти, в том числе, и при купании в природных водоёмах и бассейнах.

Механизм передачи инфекции: вирус выделяется в острый период болезни с носовой и носоглоточной слизью, а в более поздние сроки – с фекалиями. Основной путь передачи инфекции воздушно-капельный и контактный. Не исключена возможность и алиментарного пути передачи инфекции (фекально-оральный механизм заражения).

Заболеваемость повышается в холодное время года. Наиболее восприимчивы к инфекции дети от 6 мес до 5 лет. На этот возраст приходится 2/3 всех случаев аденовирусной инфекции. Подавляющее большинство новорожденных и детей до 6 мес не болеют ввиду наличия у них пассивного естественного иммунитета. У 95% взрослого населения в сыворотке крови обнаруживаются антитела к наиболее распространенным сероварам вируса. Среди взрослых высока заболеваемость во вновь сформированных коллективах (в первые 2 -3 мес).

Развитие аденовирусной инфекции: Воротами инфекции являются преимущественно слизистые оболочки верхних дыхательных путей, реже – глаз (конъюнктива). Аденовирусы размножаются в слизистой оболочке с постепенным последовательным распространение инфекции на нижележащие отделы дыхательного тракта (трахея, бронхи). Размножение аденовирусов может происходить в ткани кишечника, лимфатических узлах. При этом лимфатические узлы различных групп увеличиваются в размерах. Помимо местных изменений, аденовирусы оказывают общее токсическое воздействие на организм в виде лихорадки и симптомов общей интоксикации. Выход аденовирусов из зараженной клетки приводит к её гибели. За один цикл размножения образуется от 10000 до 1млн. новых вирусов. К счастью человека, только 1-5% новых возбудителей способны проникать в здоровые клетки. В том случае, если размножение аденовирусов протекает медленно, окружающие здоровые клетки успевают нормально делиться и выполнять свои обычные функции. В таком случае явных признаков заболевания не обнаруживается и человек не чувствует себя больным. Так протекает персистирующая (бессимптомная) аденовирусная инфекция.

Симптомы и течение заболевания: Инкубационный период колеблется от 4 до 14 дней (чаще 5-7 дней). Основными клиническими формами являются: ринофарингиты, ринофаринготонзиллиты, фарингоконъюнктивальная лихорадка, конъюнктивиты и кератоконъюнктивиты, аденовирусная пневмония. Аденовирусы могут вызывать и иные клинические формы – диарею, острый неспецифический мезаденит и др. Для любой из клинических форм аденовирусной инфекции характерна сочетание признаков поражения респираторного тракта и других симптомов (конъюнктивит, диарея, мезаденит и др.). Исключение составляет кератоконъюнктивит, который может протекать изолированно, без поражения дыхательных путей. Аденовирусные заболевания начинаются остро с повышения температуры тела, симптомов интоксикации (познабливание, головная боль, слабость, снижение аппетита, мышечные боли и др.). Но даже при высокой лихорадке общее состояние больных остается удовлетворительным и не ухудшается в той мере, которая свойственна гриппу. Лихорадка, как правило, продолжается до 6-14 дней. При аденовирусных заболеваниях, протекающих только с поражением верхних дыхательных путей, температура сохраняется 2-3 дня и нередко не превышает субфебрильных цифр. Чаще всего появляется насморк и першение в горле (ринофарингит), у некоторых больных присоединятся боль в горле при глотании (ринофаринготонзиллит). Редко возникают признаки ларингита, трахеита и бронхита. Острый ларинготрахеобронхит наблюдается у детей младшего возраста. Основные его признаки: осиплость голоса, появление грубого "лающего" кашля, развитие стенотического дыхания (затруднённое, шумное, свистящее). Нередко возникает синдром ложного крупа без нарушения речи. Воспалительные проявления со стороны дыхательных путей могут сочетаться с воспалением конъюнктив (слезотечение, чувство песка в глазу, светобоязнь и т.д.). У многих больных увеличиваются периферические лимфатические узлы, особенно передне- и заднешейные, иногда - подмышечные и паховые. Гастроэнтериты наблюдаются обычно у детей младшего возраста. Аденовирусная инфекция протекает более тяжело и длительно у детей раннего возраста с наличием повторных волн заболевания, сравнительно частым присоединением пневмонии. Лица пожилого возраста болеют аденовирусной инфекцией редко. Осложнения могут возникнуть на любом сроке аденовирусного заболевания и зависят от присоединения бактериальной флоры. Наиболее часто встречаются пневмония, тонзиллит (ангина), реже - гайморит, фронтит.

Диагностика: Для раннего лабораторного подтверждения диагноза используют обнаружение вирусного антигена в эпителиальных клетках слизистой оболочки носоглотки с помощью иммунофлуоресцентного метода. Применяют и серологический метод (РСК с аденовирусным антигеном). Диагностическим считается нарастание титра антител в парных сыворотках в 4 раза и больше.

Лечение и профилактика: Лечение неосложненных форм аденовирусной инфекции проводится также, как и при гриппе и других ОРЗ. В том случае, если у больного развился конъюнктивит, кератит или кератоконъюнктивит, используют: дезоксирибонуклеазу 0,05% раствор по 1-2 капли в конъюнктивальную складку; полудан в виде глазных капель и/или инъекций под конъюнктиву. Закапывают в конъюнктивальный мешок больного глаза 6-8 раз в день. По мере стихания воспалительных явлений - 3-4 раз в день; бонафтан в виде таблеток для приема внутрь и 0,05% глазной мази в тубах по 10г; теброфен (0,25-0,5% глазная мазь в тубах); флореналь (0,25-0,5% глазная мазь в тубах). Глазные мази закладывают за веки 3 раза в день, к концу лечения – 1-2 раза в день. Длительность лечения 10-14 дней.

Для профилактики заболеваний дыхательных путей разработаны эффективные живые вакцины, включающие в себя ослабленные вирусы наиболее часто вызывающие заболевания человека. Их широкое применение останавливают имеющиеся в распоряжении ученых данные о возможной способности аденовирусов вызывать злокачественное перерождение клеток организма человека.

Конкретные цели:

· Изучить возбудителей аденовирусных инфекций.

· Ознакомиться с методами культивирования аденовирусов.

· Делать выводы по микроскопии препаратов (ЦПД вирусов).

· Изучить лабораторную диагностику аденовирусов.

· Ознайомиться с техникой заражения тканевых культур.

· Ознайомиться с ЦПД аденовирусов и их идентификацией.

Уметь:

● Определять цитопатическое действие аденовирусов при микроскопии микропрепаратов.

● Проводить дифференциальную диагностику аденовирусов.

● Делать учет серологических реакций, используемые при диагностике аденовирусов.

Теоретические вопросы:

1. Характеристика аденовирусов. Особенности репродукции.

2. Методы культивирования аденовирусов. Идентификация и типирование.

3. Пути передачи и патогенез аденовирусных инфекций.

4. Проявление аденовирусных заболеваний и выбор материала для исследования.

5. Серологическая диагностика аденовирусных инфекций.

Практические задания, которые выполняются на занятии:

1. Изучение ЦПД аденовирусов на культуре ткани на демонстрационных препаратах.

2. Студенты просматривают культуру ткани в пробирках под малым увеличением и определяют состояние клетки.

3. Разбор и запись в протокол схемы лабораторной диагностики аденовирусных инфекций.

4. Микроскопия и зарисовка демонстрационных препаратов в протокол занятия.

5. Оформление протокола.

Литература:

1. Пяткін К.Д., Кривошеїн Ю.С. Мікробіологія з вірусологією та імунологією.– Київ: Вища школа, 1992.– 431 с.

2. Воробьев А.В., Быков А.С., Пашкола Е.П., Рибакова А.М. Микробиология.– М.: Медицина, 1998.– 336 с.

3. Медицинская микробиология /Под редакцией В.И. Покровского.– М.: ГЄОТАР-МЕД, 2001.– 768 с.

4. Медицинская микробиология, вирусология и иммунология /Под редакцией академика А.А. Воробьева, М.: Медицинское информационное агентство, 2004.– 691 с.

5. Конспект лекции.

Дополнительная литература:

1. Збірник завдань для підготовки до тестового екзамену Крок-1. Загальна лікарська підготовка.– Київ.: Медицина, 2004.- С. 300-333.

2. Методические указания для преподавателей к практическим занятиям по медицинской микробиологии, вирусологии и иммунологии.– Харьков,1986.– 125 с.

3. Сборник тестовых заданий для самоподготовки по медицинской микробиологии и вирусологии.– Харьков, 2005.– 28 с.

Дата добавления: 2015-09-27 | Просмотры: 549 | Нарушение авторских прав