Кафедра инфекционных болезней и эпидемиологии. Для этого производится забор пищевых продуктов, рвотных масс, промывных вод
Для этого производится забор пищевых продуктов, рвотных масс, промывных вод. испражнений на бактериологические исследования.
общавшиеся в очаге в течение 2 суток после выявления больного подвергаются однократному бактериологическому обследованию на носительство (испражнения, моча).
при подозрении распространения инфекции из какого-либо пищевого объекта, данный объект временно закрывается, реализация его продукции запрещается, с оборудования, посуды и других предметов делают смывы на обнаружение сальмонелл, проводится тщательная уборка и мытьё оборудования с применением дезсредств.
Для предупреждения заболеваний сальмонеллезами в мед.учреждениях и больницах предусматриваются основные положения:
при поступлении детей в возрасте до 3 лет, состоящих на диспансерном учете по кишечным инфекциям, в детские соматические стационары обеспечить их изоляцию в диагностические палаты;
в районных и участковых больницах, где не могут быть выделены диагностические палаты, предусмотреть возможность перепрофилирования других отделений, с целью избежать перегрузки;
усилить наблюдение за людьми с повышенным риском заболевания (контроль санитарного режима, режим питания, санитарно-просветительная работа: расширить показания к бактериологическому обследованию детей и взрослых с повышенным риском заболевания;
расширить показания к бактериологическому обследованию беременных женщин и других взрослых, имеющих нарушение деятельности кишечника; у рожениц, перенесших острые кишечные заболевания в течение 3-х месяцев до родов, роды принимать в обсервационном отделении;
доноров грудного молока в родильных домах формировать из числа родильниц, не болевших сальмонеллезом в течение 3-х месяцев до родов и обследованных бактериологически;
предусмотреть в каждом родильном отделении специально оборудованный пункт сбора, разлива и пастеризации грудного молока, с закрепленным за ним медработником.
Мероприятия, направленные на предупреждение заноса инфекции в стационары и возникновение госпитальных сальмонеллезов:
раннее выявление и изоляция больных сальмонеллезом (контроль за состоянием стула ребенка);
своевременное бактериологическое обследование больных при появлении первых признаков заболевания желудка и кишечника;
полное использование методов диагностики, в том числе серологических исследований и метода гемокультуры;
рациональное, своевременное (курс применение антибиотиков (сальмонеллы могут приобретать устойчивость к антибиотику в течение одного курса лечения);
своевременно начатые и полно проведенные противоэпидемические мероприятия в связи со своевременной информацией о первых случаях заболевания и но другим причинам;
соблюдение санитарно-гигиенического и противоэпидемического режима в стационарах, правил уборки помещений, сбора, хранения, обеззараживания и стирки белья;
прекращение свободного общения больных между собой, переводы из палаты в палату или из отделения в другое отделение только строго обоснованные (по эпидемиологическим показаниям);
при наличии в лечебных учреждениях достаточного числа помещений, необходимых для изоляции выявленных больных (боксы, изоляторы и т.д.); санитарно-просветительская работа с госпитализированными и обслуживающим персоналом.
Приложение № 8
Классификация семейства Vibrionaceae
Род Aeromonas
Род Plesiomonas
Род Photobacterium
Род Vibrio
Род Vibrio
а) Вид V.cholerae 01 (2 биовара: классический и Эль-Тор)
б) Вид V.cholerae не 01 (от 02 до 0139, НАГ, RО)
в) Виды: V.metschnikovii V.vulnificus
V.harveyi V.marinus
V.parahaemolyticus V.minicus
V.alginolyticus и другие – всего 34 вида.
Возбудителями холеры являются вибрионы 01 и 0139 групп.
Остальные вибрионы вызывают острые кишечные инфекции типа гастроэнтеритов и раневые инфекции, отдельные виды – например, V.vulnificus, - септицемии, раневые инфекции, пневмонии, эндометриты, V.alginolyticus - ОКИ, отиты, раневые инфекции.
Основные дифференциальные признаки возбудителей холеры
№ п/п
| Признаки
| Азиатика
| Эль-Тор
| Серовар 0139
| 1.
| Р. Фогес-Проскауэра
| ± (чаще -)
| ± (чаще +)
| ± (чаще +)
| 2.
| Чувствительность к полимиксину В
| +
| - Ж
| -
| 3.
| Гемолиз эритроцитов барана
| -
| +
| -
| 4.
| Агглютинация куриных эритроцитов
| -
| ± (чаще +)
| ± (чаще +)
| 5.
| Чувствительность к классическому монофагу
| +
| -
| -
| 6.
| Чувствительность к монофагу Эль-Тор
| -
| +
| -
| 7.
| Гексаминовый тест
| -
| +
| -
|
Реакция Фогес-Проскауэра: В среду Кларка засеваем культуру, затем добавляем креатинин (альфа-нафтол с КОН) – в положительном случае бульон окрашивается в розовый цвет.
Среда Кларка: МПБ + 1 % глюкозы + К2НРО4. При ферментации глюкозофосфатного бульона Кларка (глюкозы) микробами образуется ацетилметилкарбинол (ацетоны), окрашивающий среду в красный цвет при взаимодействии с креатинином (альфа-нафтол с едким калием).
Тест на оксидазную активность: Оксидаза окисляет фенилендиамин,
что приводит к появлению синего окрашивания. 1 каплю 1% раствора параминодиметиланилина (гидрохлорида или оксалата) наносят на поверхность 18-часовой агаровой культуры в чашке Петри + 1 каплю 1% спиртового раствора альфа-нафтола. В положительных случаях через 1-3 минуты получаем синее окрашивание.
Гексаминовый тест: Берем глюкозо-гексаминовую среду 1% раствор гексамина (уротропина) в 100 мл МПБ + 1% глюкозы + индикатор бромтимоловый синий (исходный цвет среды зеленоватый) + засеваем культуру. Вибрион Эль-Тор через 6-8 часов окрашивает среду в желтый цвет, истинный холерный вибрион цвет среды не изменяет.
Развернутая дифференциальная характеристика
холерных 01 и основных видов холерных не 01 вибрионов
№ п/п
| Признаки
| Холерный вибрион
| Эль-Тор
| 0-139 не 01 вибр.
| НАГ не 01 вибр.
| 1.
| Рост на 1% п.в.
| Равномерное помутнение, пленка на поверхности серовато-голубоватые, гладкие, диаметр 1-1,5 мм и более.
Серо-голубые, синевато-зеленые, могут быть в центре красноватые, розоватые. Встречаются колонии с ярко-красным центром и прозрачным синевато-голубоватым краем. Колонии не играют, не сверкают, цвет приглушен.
Грам отрицательные палочки полиморфные, прямые и изогнутые.
| 2.
| Морфология колоний на щелочном агаре
| 3.
| Морфология колоний в косопроходящем свете
| 4.
| Морфология микроба в мазках по Граму
| 5.
| Подвижность
| +
| +
| +
| +
| 6.
| Среда Клиглера (двухсахарная) столбик/косяк
| к/-
| к/-
| к/-
| к/- (столбик желтый)
| 7.
| Глюкоза
| к
| к
| к
| К
| 8.
| Лактоза
| -
| -
| -
| -
| 9.
| Маннит
| к
| к
| к
| к
| 10.
| Сахароза
| к
| к
| к
| ±
| 11.
| Манноза
| к
| к
| к
| ±
| 12.
| Арабиноза
| -
| -
| -
| ±
| 13.
| Инозит
| -
| -
| -
| -
| 14.
| H2S
| -
| -
| -
| -
| 15.
| Индол
| +
| +
| +
| +
| 16.
| Диастаза
| +
| +
| +
| + на крахмал
| 17.
| Желатиноза
| +
| +
| +
| +
|
|
| Воронкообразное через 48-72 часа
| 18.
| Оксидаза
| +
| +
| +
| +
| 19.
| Лецитиназа
| ±
| ±
| ±
| ±
| 20.
| Гемотоксин
| -
-
| ±
+
| - (+)
+
| ± проба
± Грейга
| 21.
| Агглютинация с Инаба, Огава АТ
| +
| +
| -
| -
|
| В зависимости от серовара
| -
| -
| c RO
| -
| ±
| -
| -
| 22.
| Люминесцентное свечение
| ххх
| ххх
| -
| -
| 23.
| Чувствительность
к бактериофагам-классическим
| +
| -
| -
| -
| Эль-Тор
| -
| +
| -
| - (+)
| ХДФ 3, 4, 5
| -
| ±
| -
| - (+)
|
|
|
|
|
|
| 24.
| Тест Хью-Лейфсона
(расщеплен. глюкозы в аэроб/анаэроб.усл.)
| к/к
| к/к
| к/к
| к/к
| 25.
| Аргинин-дегидролаза
| -
| -
| -
| -
| 26.
| Лизин-декарбоксилаза
| +
| +
| +
| +
| 27.
| Орнитин-декарбоксилаза
| +
| + (-)
| +
| + (-)
| 28.
| Чувствительность к полимиксину (30 ед.)
| +
| -
| -
| -
| 29.
| РА с холерной агглютинирующей сывороткой 0-139
| -
| -
| +
| -
| 30.
| Р. Фогес-Проскауэра
| -
| +
| +
| +
| 31.
| Среда Олькеницкого
| к/к
| к/к
| к/к
| к/к
| 32.
| Среда Ресселя
| к/-
| к/-
| к/-
| к/-
| 33.
| Наличие полисахаридной капсулы
| -
| -
| +
| -
|
Чувствительность холерных вибрионов и 0139 к антибактериальным препаратам
Асплоксацин
Офлоксацин
Цефотаксин
Ципрофлоксацин
Гентамицин
Левомицитин
Рафампецитин
Доксициклин
Тетрациклин
Стрептомицин
Ампициллин
Фуразомидон %
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Приложение №9
СХЕМА
бактериологического исследования (начальный этап)
Материал
1.Рвотные массы 4.Кровь 6.Отделяемое ран
2.Промывные воды желудка (дефибриниров.)
3.Испражнения 5.Спинномозговая жидкость
1-2г или мл
первая среда
обогащения 1 мл
50 мл 1% п.в. Э.С.
Щ.А.М. с 1,5% NaCl
1-й день через 6-8 часов через 6-8 часов
исследования инкубации при инкубации при
37оС 9 мл 37оС п.в.
МПБ с с 1,5%
1,5% NaCl NaCl
Э.С.
вторая среда
обогащения
10 мл 1% п.в. Щ.А.М.
Щ.А.М. Щ.А.М.
вторая среда
обогащения
1% п.в. с
1,5% NaCl
__________________________________________________________________
1-й день 1. Посев на щелочной агар (Щ.А.М.) и на одну элективную среду
(Э.С.)
2-й день 2. Отбор колоний, подозрительных на вибрионы с посевов
предыдущего дня:
а) подозрительные на холерные вибрионы колонии агглютинируют холерными 01, RО и 0139 сыворотками; при
положительных результатах проводят исследования, направленные на выделение и идентификацию возбудителя холеры.
б) подозрительные на холерные не 01 группы и др.виды вибрионов колонии на щелочном агаре и элективной среде отсеивают одной петлей на среду Ресселя и в 1% пептоновую воду без NaCl и с 5-10 % NaCl.
3-й день 1. Изучение посевов со 2-го пептона и выделение подозрительных
колоний (культур) проводят так же, как и с 1-го пептона.
2. Учет роста культур в 1% пептонной воде без NaСl и на среде
Ресселя.
3. Постановка пробы на индофенолоксидазу с культурой со среды Ресселя и реакция агглютинации с холерным 01 и 0139 сыворотками на стекле с культурами, выросшими в 1% п.в. без NaCl и давшие характерные изменения на среде Ресселя.
4. Изучение морфологии клеток в мазках, окрашенных по Граму.
5. Посев отобранных культур (галофильных вибрионов) в дифференциально-диагностические среды, содержащие 1,5% NaCl.
6. Определение чувствительности культур к вибриостатику 0/129.
4-й день 1. Учет результатов тестов идентификации. Определение вида выделенных культур вибрионов.
2. Идентификация культур, выделенных со второго пептона.
5-й день Учет результатов исследования. Выдача ответа (окончательного).
__________________________________________________________________
Примечание: в связи с высокой энергией роста холерных вибрионов учет результатов на каждом этапе проводят несколько раз, через 4-8 часов.
Приложение №10
Ускоренный метод диагностики холеры
Вид: Микроскопическое изучение Кал, рвотные массы, желчь,
(рисового отвара)
I этап:
Грам «-» вибрионы Раздавленная капля Иммунофлюоресценция
Подвижность РИФ, РНИФ
Посев на комплект сред:
Б/фаг
Мукарджи IV
Пептон 1% пепт. 1% пепт. 5% кров. Щелочной МПА с
1% вода вода + вода + МПА с дисками антибиотиков
01 сывор. 0,5% эритроцитами (полимиксин) и б/фагом
крахмала барана
II этап: Учет по принципу I этапа каждые 4-6 часов в течение суток.
Пленчатый рост Агглютинат 01 При добавлении Гемолиз Индивид. рез-ты
Грам «-» вибрион вибриона йода: V.eltor Х.в. – чувств к
Подвижны Нет его – при Нет синевы при Нет его - полимиксину и
не 01 вибрионах х.в. 01 холерный б/фагу;
Синева – при вибрион Эль-Тор – нет
вибр. Эль-Тор.
За сутки этим методом можно получить окончательные результаты
Экспресс-методы диагностики вибрионов
1. Люминесцентно-серологический (РИФ, РНИФ).
2. Иммобилизация вибрионов типовыми сыворотками.
3. Иммобилизация вибрионов типовыми бактериофагами.
4. Развернутая реакция агглютинации в бульоне.
5. Метод микроагглютинации материала.
6. Выявление вибрионов в воде реакцией агглютинации.
7. Исследование воды путем подращивания на мембранных фильтрах с помощью люминесцентной микроскопии.
Особенности иммунолюминисцентной диагностики холеры –
РИФ и РНИФ
РИФ – реакция прямой иммуно-флюоресценции при холере ставится по классической методике путем микроскопического выявления возбудителя в зафиксированном и обработанном ФИТЦ – препаратом мазке. Эта особенность (обязательная фиксация) связана с эпидемической опасностью работы с ООИ.
РНИФ – непрямая реакция иммунофлюоресценции ставится в случае отсутствия меченой ФИТЦ противохолерной иммунной сыворотки, но при наличии специфической не меченой и меченой противоиммуноглобулиновой видовой к белкам того вида животного, который использован для получения иммунных противохолерных антител. Эта реакция разработана Кунсом. Она выявляет антитела к Ig в иммунной сыворотке, среагировавшие в мазке с возбудителем.
Приложение №11
Питательные среды
I. Жидкие среды обогащения:
1. 1% пептонная вода.
2. Пептонная вода с теллуритом калия.
II. Плотные среды:
1. Щелочной агар (рН = 8-8,2).
2. Щелочной агар с теллуритом калия.
3. Желточно-солевой агар (ЖАС).
4. Среда Дьедонне (щелочной МПА с дефибринированной кровью быка или барана).
5. Среда Монсура (таурохолат-теллуритовая).
6. Среда Аронсона (щелочной агар с сахарозой, сернокислым натрием, фуксином). Холерные вибрионы дают розовые колонии.
7. Среда Оттоленги (щелочной МПБ с бычьей желчью).
8. Теллурит-калиевая среда.
9. Висмут-сульфитная среда Рида.
10. Висмут-сульфитная среда с маннозой Вильсона и Рейли, рН-8,8.
III. Консервирующие среды:
1. Среда Венкатрамена и Рамакришнона (щелочной бульон с морской солью).
2. 2% раствор поваренной соли (морская соль).
3. 1% пептонная вода.
Приложение №12
Фаготипирование холерными диагностическими бактериофагами ХДФ холерных вибрионов Эль-Тор с одновременной дифференциацией их патогенности
Серотип
| Вирулентность
| Чувствительность к монофагам
| Гемолиз эритроцитов барана
| ХДФ-3
| ХДФ-4
| ХДФ-5
| Огава,
Гикошима
| Высокая
| +
+
-
+
| +
+
+
-
| +
-
+
+
| -
-
-
-
| Слабая
| +
+
+
-
| + + -
-
| +
-
+ +
| +
+
+(-)
+(-)
| Авирулентные
| -
+
-
| -
-
+
| -
-
-
| +(-)
+(-)
+(-)
| Инаба
| Высокая
| + + -
-
+
| + + + -
-
| +
-
+ + -
| -
-
-
-
-
| Слабая
| + + -
+
-
+
| + + + -
-
-
| +
-
+
+ +
-
| + + + + + +
| Авирулентные
| -
-
| -
+
| -
-
| +(-)
+(-)
| Примечание: ХДФ – холерный диагностический фаг.
Фаготипирование энтеротоксигенных неагглютинирующих вибрионов (НАГ) не 01 группы типовыми бактериями ТЭПВ к энтеропатогенным вибрионам
Фаготипы вибрионов НАГ
| Типирующие фаги
| ТЭПВ
- 1
| ТЭПВ - 2
| ТЭПВ
- 3
| ТЭПВ
- 4
| ТЭПВ
- 5
| ТЭПВ
- 6
| ТЭПВ
- 7
|
| +
|
|
|
|
|
|
|
|
| +
|
|
|
|
|
|
|
|
| +
|
|
|
|
|
|
|
|
| +
|
|
|
|
|
|
|
|
| +
|
|
|
|
|
|
|
|
| +
|
|
|
|
|
|
|
|
| +
|
Примечание: ТЭПВ – типовые фаги к энтеропатогенным вибрионам НАГ. Типируют методом агаровых слоев.
Методика: испытуемую культуру засевают в пробирку с 4 мл МПБ, инкубируют при + 37о С в течение 3 часов. Затем 0,3 мл бульонной культуры вносят в пробирку с 4 мл. 0,7% расплавленного и остуженного до + 45оС МПА, перемешивают и выливают вторым тонким слоем в стерильную чашку с первым застывшим слоем 2% МПА, после этого на поверхность МПА петлей или каплей из пипетки наносят типовые бактериофаги в цельном виде, а при необходимости – в разведении от 10-1 до 10-4. Каплям фага дают подсохнуть, впитаться, после чего пробы помещают в термостат при +37оС на 4-18 часов. Контроль – физ.раствор.
Учет результатов ведут при наличии стерильных пятен в связи с лизисом чувствительных к фагу культур. В контроле и при нечувствительности культуры лизиса нет.
Ускоренный метод. Из подготовленной бульонной культуры делают штриховой высев на 8 секторов МПА, а сверху наносят бактериофаг. Режим инкубации и учет результатов те же.
Приложение №13
Характеристика генетической основы патогенности
Кассета генов патогенности в хромосоме холерных вибрионов 01
| Реализация кассеты в тестах
| Vct+ ген патогенности
| - токсигенность Vct (in vitro, in vivo)
| TOX’T ген-код синтеза токсического белка
| - гемотоксин “Haem-tox 01” к бараньим эритроцитам
| CT+ синтез токсигена, реализует
| - патогенность для крольчат в
| TCP+ токсиноиндуцирующие пили
| изолированной клетке
| адгезии для CTXф
| - агглютинация куриных эритроцитов
| CTXф - переносчик Vct+
|
| Кассета холерных свободно живущих вибрионов не 01
|
| TOX R – передавемый код
|
| tep A – кодирует и реализует TCP с помощью восприимчивого организма.
|
|
Приложение №14
Галофильные вибрионы
К патогенным для человека вибрионам, кроме возбудителей холеры, относятся морские галофильные вибрионы, вызывающие пищевые отравления, связанные с употреблением в пищу продуктов моря, холеро- и дизентериеподобные заболевания, септицемии, раневые инфекции.
К ним относятся: V.parahaemolyticus, V.alginolyticus, V.vulnificus, V.minicus и др. Они инфицируют человека алиментарно-энтеральным и контактным (с морской водой) путями.
Основные свойства некоторых морских галофильных и не галофильных вибрионов, патогенных для человека
Признаки
| V.parahaemoly
ticus
| V.alginaly
ticus
| V.vulnifi
cus
| V.mimi
cus
| Наличие индофенолоксидазы
| +
+
| +
+
| ±
±
| +
+
| Лизиндекарбоксилаза
| +
| +
| +
| +
| Орнитиндекарбоксилаза
| -
| -
| -
| -
| Аргининдегидролаза
| -
| -
| -
| +
| Рост в 1% п.в. без NaCl
с 3% NaCl
| +
+
| +
+
| +
+т
| +
+
| Ферментация глюкозы без газа
| -
| -
| +
| -
| Лактозы
| -
| +
| -
| -
| Сахарозы
| +
| +
| +
| +
| Маннозы
| +,-
| -,+
| - т
| -
| Арабинозы
| +
| +
| +,-
| +
| Маннита
| +
| +
| +
| +
| Мальтозы
| +
| +
| +
| +
| Крахмала
| -
| -
| -
| -
| Инозита
|
|
|
|
| Образование ацетил-метил
| -
| +
| -
| -
| карбинола
| +
| +
| +
| +
| индола
| -
| -
| -
| -
| сероводорода
| +
| +
| +
| +
| лецитиназы
| -
| -
| -
| -
| уреазы
| +
| +
| +
| +
| Редукция NO3 в NO2
| +
| +
| +
| +
| Подвижность
|
|
|
|
|
Кафедра инфекционных болезней и эпидемиологии
Дата добавления: 2014-12-11 | Просмотры: 822 | Нарушение авторских прав
1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 | 13 | 14 | 15 | 16 | 17 | 18 | 19 | 20 | 21 | 22 | 23 | 24 |
|