Для этого производится забор пищевых продуктов, рвотных масс, промывных вод. испражнений на бактериологические исследования.
общавшиеся в очаге в течение 2 суток после выявления больного подвергаются однократному бактериологическому обследованию на носительство (испражнения, моча).
при подозрении распространения инфекции из какого-либо пищевого объекта, данный объект временно закрывается, реализация его продукции запрещается, с оборудования, посуды и других предметов делают смывы на обнаружение сальмонелл, проводится тщательная уборка и мытьё оборудования с применением дезсредств.
Для предупреждения заболеваний сальмонеллезами в мед.учреждениях и больницах предусматриваются основные положения:
при поступлении детей в возрасте до 3 лет, состоящих на диспансерном учете по кишечным инфекциям, в детские соматические стационары обеспечить их изоляцию в диагностические палаты;
в районных и участковых больницах, где не могут быть выделены диагностические палаты, предусмотреть возможность перепрофилирования других отделений, с целью избежать перегрузки;
усилить наблюдение за людьми с повышенным риском заболевания (контроль санитарного режима, режим питания, санитарно-просветительная работа: расширить показания к бактериологическому обследованию детей и взрослых с повышенным риском заболевания;
расширить показания к бактериологическому обследованию беременных женщин и других взрослых, имеющих нарушение деятельности кишечника; у рожениц, перенесших острые кишечные заболевания в течение 3-х месяцев до родов, роды принимать в обсервационном отделении;
доноров грудного молока в родильных домах формировать из числа родильниц, не болевших сальмонеллезом в течение 3-х месяцев до родов и обследованных бактериологически;
предусмотреть в каждом родильном отделении специально оборудованный пункт сбора, разлива и пастеризации грудного молока, с закрепленным за ним медработником.
Мероприятия, направленные на предупреждение заноса инфекции в стационары и возникновение госпитальных сальмонеллезов:
раннее выявление и изоляция больных сальмонеллезом (контроль за состоянием стула ребенка);
своевременное бактериологическое обследование больных при появлении первых признаков заболевания желудка и кишечника;
полное использование методов диагностики, в том числе серологических исследований и метода гемокультуры;
рациональное, своевременное (курс применение антибиотиков (сальмонеллы могут приобретать устойчивость к антибиотику в течение одного курса лечения);
своевременно начатые и полно проведенные противоэпидемические мероприятия в связи со своевременной информацией о первых случаях заболевания и но другим причинам;
соблюдение санитарно-гигиенического и противоэпидемического режима в стационарах, правил уборки помещений, сбора, хранения, обеззараживания и стирки белья;
прекращение свободного общения больных между собой, переводы из палаты в палату или из отделения в другое отделение только строго обоснованные (по эпидемиологическим показаниям);
при наличии в лечебных учреждениях достаточного числа помещений, необходимых для изоляции выявленных больных (боксы, изоляторы и т.д.); санитарно-просветительская работа с госпитализированными и обслуживающим персоналом.
Приложение № 8
Классификация семейства Vibrionaceae
Род Aeromonas
Род Plesiomonas
Род Photobacterium
Род Vibrio
Род Vibrio
а) Вид V.cholerae 01 (2 биовара: классический и Эль-Тор)
б) Вид V.cholerae не 01 (от 02 до 0139, НАГ, RО)
в) Виды: V.metschnikovii V.vulnificus
V.harveyi V.marinus
V.parahaemolyticus V.minicus
V.alginolyticus и другие – всего 34 вида.
Возбудителями холеры являются вибрионы 01 и 0139 групп.
Остальные вибрионы вызывают острые кишечные инфекции типа гастроэнтеритов и раневые инфекции, отдельные виды – например, V.vulnificus, - септицемии, раневые инфекции, пневмонии, эндометриты, V.alginolyticus - ОКИ, отиты, раневые инфекции.
Основные дифференциальные признаки возбудителей холеры
№ п/п
Признаки
Азиатика
Эль-Тор
Серовар 0139
1.
Р. Фогес-Проскауэра
± (чаще -)
± (чаще +)
± (чаще +)
2.
Чувствительность к полимиксину В
+
- Ж
-
3.
Гемолиз эритроцитов барана
-
+
-
4.
Агглютинация куриных эритроцитов
-
± (чаще +)
± (чаще +)
5.
Чувствительность к классическому монофагу
+
-
-
6.
Чувствительность к монофагу Эль-Тор
-
+
-
7.
Гексаминовый тест
-
+
-
Реакция Фогес-Проскауэра: В среду Кларка засеваем культуру, затем добавляем креатинин (альфа-нафтол с КОН) – в положительном случае бульон окрашивается в розовый цвет.
Среда Кларка: МПБ + 1 % глюкозы + К2НРО4. При ферментации глюкозофосфатного бульона Кларка (глюкозы) микробами образуется ацетилметилкарбинол (ацетоны), окрашивающий среду в красный цвет при взаимодействии с креатинином (альфа-нафтол с едким калием).
Тест на оксидазную активность: Оксидаза окисляет фенилендиамин,
что приводит к появлению синего окрашивания. 1 каплю 1% раствора параминодиметиланилина (гидрохлорида или оксалата) наносят на поверхность 18-часовой агаровой культуры в чашке Петри + 1 каплю 1% спиртового раствора альфа-нафтола. В положительных случаях через 1-3 минуты получаем синее окрашивание.
Гексаминовый тест: Берем глюкозо-гексаминовую среду 1% раствор гексамина (уротропина) в 100 мл МПБ + 1% глюкозы + индикатор бромтимоловый синий (исходный цвет среды зеленоватый) + засеваем культуру. Вибрион Эль-Тор через 6-8 часов окрашивает среду в желтый цвет, истинный холерный вибрион цвет среды не изменяет.
Развернутая дифференциальная характеристика
холерных 01 и основных видов холерных не 01 вибрионов
№ п/п
Признаки
Холерный вибрион
Эль-Тор
0-139 не 01 вибр.
НАГ не 01 вибр.
1.
Рост на 1% п.в.
Равномерное помутнение, пленка на поверхности серовато-голубоватые, гладкие, диаметр 1-1,5 мм и более.
Серо-голубые, синевато-зеленые, могут быть в центре красноватые, розоватые. Встречаются колонии с ярко-красным центром и прозрачным синевато-голубоватым краем. Колонии не играют, не сверкают, цвет приглушен.
Грам отрицательные палочки полиморфные, прямые и изогнутые.
2.
Морфология колоний на щелочном агаре
3.
Морфология колоний в косопроходящем свете
4.
Морфология микроба в мазках по Граму
5.
Подвижность
+
+
+
+
6.
Среда Клиглера (двухсахарная) столбик/косяк
к/-
к/-
к/-
к/- (столбик желтый)
7.
Глюкоза
к
к
к
К
8.
Лактоза
-
-
-
-
9.
Маннит
к
к
к
к
10.
Сахароза
к
к
к
±
11.
Манноза
к
к
к
±
12.
Арабиноза
-
-
-
±
13.
Инозит
-
-
-
-
14.
H2S
-
-
-
-
15.
Индол
+
+
+
+
16.
Диастаза
+
+
+
+ на крахмал
17.
Желатиноза
+
+
+
+
Воронкообразное через 48-72 часа
18.
Оксидаза
+
+
+
+
19.
Лецитиназа
±
±
±
±
20.
Гемотоксин
-
-
±
+
- (+)
+
± проба
± Грейга
21.
Агглютинация с Инаба, Огава АТ
+
+
-
-
В зависимости от серовара
-
-
c RO
-
±
-
-
22.
Люминесцентное свечение
ххх
ххх
-
-
23.
Чувствительность
к бактериофагам-классическим
+
-
-
-
Эль-Тор
-
+
-
- (+)
ХДФ 3, 4, 5
-
±
-
- (+)
24.
Тест Хью-Лейфсона
(расщеплен. глюкозы в аэроб/анаэроб.усл.)
к/к
к/к
к/к
к/к
25.
Аргинин-дегидролаза
-
-
-
-
26.
Лизин-декарбоксилаза
+
+
+
+
27.
Орнитин-декарбоксилаза
+
+ (-)
+
+ (-)
28.
Чувствительность к полимиксину (30 ед.)
+
-
-
-
29.
РА с холерной агглютинирующей сывороткой 0-139
-
-
+
-
30.
Р. Фогес-Проскауэра
-
+
+
+
31.
Среда Олькеницкого
к/к
к/к
к/к
к/к
32.
Среда Ресселя
к/-
к/-
к/-
к/-
33.
Наличие полисахаридной капсулы
-
-
+
-
Чувствительность холерных вибрионов и 0139 к антибактериальным препаратам
1-й день 1. Посев на щелочной агар (Щ.А.М.) и на одну элективную среду
(Э.С.)
2-й день 2. Отбор колоний, подозрительных на вибрионы с посевов
предыдущего дня:
а) подозрительные на холерные вибрионы колонии агглютинируют холерными 01, RО и 0139 сыворотками; при
положительных результатах проводят исследования, направленные на выделение и идентификацию возбудителя холеры.
б) подозрительные на холерные не 01 группы и др.виды вибрионов колонии на щелочном агаре и элективной среде отсеивают одной петлей на среду Ресселя и в 1% пептоновую воду без NaCl и с 5-10 % NaCl.
3-й день 1. Изучение посевов со 2-го пептона и выделение подозрительных
колоний (культур) проводят так же, как и с 1-го пептона.
2. Учет роста культур в 1% пептонной воде без NaСl и на среде
Ресселя.
3. Постановка пробы на индофенолоксидазу с культурой со среды Ресселя и реакция агглютинации с холерным 01 и 0139 сыворотками на стекле с культурами, выросшими в 1% п.в. без NaCl и давшие характерные изменения на среде Ресселя.
4. Изучение морфологии клеток в мазках, окрашенных по Граму.
5. Посев отобранных культур (галофильных вибрионов) в дифференциально-диагностические среды, содержащие 1,5% NaCl.
6. Определение чувствительности культур к вибриостатику 0/129.
4-й день 1. Учет результатов тестов идентификации. Определение вида выделенных культур вибрионов.
2. Идентификация культур, выделенных со второго пептона.
5-й день Учет результатов исследования. Выдача ответа (окончательного).
6. Выявление вибрионов в воде реакцией агглютинации.
7. Исследование воды путем подращивания на мембранных фильтрах с помощью люминесцентной микроскопии.
Особенности иммунолюминисцентной диагностики холеры –
РИФ и РНИФ
РИФ – реакция прямой иммуно-флюоресценции при холере ставится по классической методике путем микроскопического выявления возбудителя в зафиксированном и обработанном ФИТЦ – препаратом мазке. Эта особенность (обязательная фиксация) связана с эпидемической опасностью работы с ООИ.
РНИФ – непрямая реакция иммунофлюоресценции ставится в случае отсутствия меченой ФИТЦ противохолерной иммунной сыворотки, но при наличии специфической не меченой и меченой противоиммуноглобулиновой видовой к белкам того вида животного, который использован для получения иммунных противохолерных антител. Эта реакция разработана Кунсом. Она выявляет антитела к Ig в иммунной сыворотке, среагировавшие в мазке с возбудителем.
Приложение №11
Питательные среды
I. Жидкие среды обогащения:
1. 1% пептонная вода.
2. Пептонная вода с теллуритом калия.
II. Плотные среды:
1. Щелочной агар (рН = 8-8,2).
2. Щелочной агар с теллуритом калия.
3. Желточно-солевой агар (ЖАС).
4. Среда Дьедонне (щелочной МПА с дефибринированной кровью быка или барана).
5. Среда Монсура (таурохолат-теллуритовая).
6. Среда Аронсона (щелочной агар с сахарозой, сернокислым натрием, фуксином). Холерные вибрионы дают розовые колонии.
7. Среда Оттоленги (щелочной МПБ с бычьей желчью).
8. Теллурит-калиевая среда.
9. Висмут-сульфитная среда Рида.
10. Висмут-сульфитная среда с маннозой Вильсона и Рейли, рН-8,8.
III. Консервирующие среды:
1. Среда Венкатрамена и Рамакришнона (щелочной бульон с морской солью).
2. 2% раствор поваренной соли (морская соль).
3. 1% пептонная вода.
Приложение №12
Фаготипирование холерными диагностическими бактериофагами ХДФ холерных вибрионов Эль-Тор с одновременной дифференциацией их патогенности
Серотип
Вирулентность
Чувствительность к монофагам
Гемолиз эритроцитов барана
ХДФ-3
ХДФ-4
ХДФ-5
Огава,
Гикошима
Высокая
+
+
-
+
+
+
+
-
+
-
+
+
-
-
-
-
Слабая
+
+
+
-
+ + -
-
+
-
+ +
+
+
+(-)
+(-)
Авирулентные
-
+
-
-
-
+
-
-
-
+(-)
+(-)
+(-)
Инаба
Высокая
+ + -
-
+
+ + + -
-
+
-
+ + -
-
-
-
-
-
Слабая
+ + -
+
-
+
+ + + -
-
-
+
-
+
+ +
-
+ + + + + +
Авирулентные
-
-
-
+
-
-
+(-)
+(-)
Примечание: ХДФ – холерный диагностический фаг.
Фаготипирование энтеротоксигенных неагглютинирующих вибрионов (НАГ) не 01 группы типовыми бактериями ТЭПВ к энтеропатогенным вибрионам
Фаготипы вибрионов НАГ
Типирующие фаги
ТЭПВ
- 1
ТЭПВ - 2
ТЭПВ
- 3
ТЭПВ
- 4
ТЭПВ
- 5
ТЭПВ
- 6
ТЭПВ
- 7
+
+
+
+
+
+
+
Примечание: ТЭПВ – типовые фаги к энтеропатогенным вибрионам НАГ. Типируют методом агаровых слоев.
Методика: испытуемую культуру засевают в пробирку с 4 мл МПБ, инкубируют при + 37о С в течение 3 часов. Затем 0,3 мл бульонной культуры вносят в пробирку с 4 мл. 0,7% расплавленного и остуженного до + 45оС МПА, перемешивают и выливают вторым тонким слоем в стерильную чашку с первым застывшим слоем 2% МПА, после этого на поверхность МПА петлей или каплей из пипетки наносят типовые бактериофаги в цельном виде, а при необходимости – в разведении от 10-1 до 10-4. Каплям фага дают подсохнуть, впитаться, после чего пробы помещают в термостат при +37оС на 4-18 часов. Контроль – физ.раствор.
Учет результатов ведут при наличии стерильных пятен в связи с лизисом чувствительных к фагу культур. В контроле и при нечувствительности культуры лизиса нет.
Ускоренный метод. Из подготовленной бульонной культуры делают штриховой высев на 8 секторов МПА, а сверху наносят бактериофаг. Режим инкубации и учет результатов те же.
Приложение №13
Характеристика генетической основы патогенности
Кассета генов патогенности в хромосоме холерных вибрионов 01
Реализация кассеты в тестах
Vct+ ген патогенности
- токсигенность Vct (in vitro, in vivo)
TOX’T ген-код синтеза токсического белка
- гемотоксин “Haem-tox 01” к бараньим эритроцитам
CT+синтез токсигена, реализует
- патогенность для крольчат в
TCP+ токсиноиндуцирующие пили
изолированной клетке
адгезии для CTXф
- агглютинация куриных эритроцитов
CTXф - переносчик Vct+
Кассета холерных свободно живущих вибрионов не 01
TOX R – передавемый код
tep A – кодирует и реализует TCP с помощью восприимчивого организма.
Приложение №14
Галофильные вибрионы
К патогенным для человека вибрионам, кроме возбудителей холеры, относятся морские галофильные вибрионы, вызывающие пищевые отравления, связанные с употреблением в пищу продуктов моря, холеро- и дизентериеподобные заболевания, септицемии, раневые инфекции.
К ним относятся: V.parahaemolyticus, V.alginolyticus, V.vulnificus, V.minicus и др. Они инфицируют человека алиментарно-энтеральным и контактным (с морской водой) путями.
Основные свойства некоторых морских галофильных и не галофильных вибрионов, патогенных для человека
Признаки
V.parahaemolyticus
V.alginalyticus
V.vulnificus
V.mimicus
Наличие индофенолоксидазы
+
+
+
+
±
±
+
+
Лизиндекарбоксилаза
+
+
+
+
Орнитиндекарбоксилаза
-
-
-
-
Аргининдегидролаза
-
-
-
+
Рост в 1% п.в. без NaCl
с 3% NaCl
+
+
+
+
+
+т
+
+
Ферментация глюкозы без газа
-
-
+
-
Лактозы
-
+
-
-
Сахарозы
+
+
+
+
Маннозы
+,-
-,+
- т
-
Арабинозы
+
+
+,-
+
Маннита
+
+
+
+
Мальтозы
+
+
+
+
Крахмала
-
-
-
-
Инозита
Образование ацетил-метил
-
+
-
-
карбинола
+
+
+
+
индола
-
-
-
-
сероводорода
+
+
+
+
лецитиназы
-
-
-
-
уреазы
+
+
+
+
Редукция NO3 в NO2
+
+
+
+
Подвижность
Направление и результат исследования материала на наличие возбудителя холеры