АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Основы кинетики ферментативного катализа

Прочитайте:
  1. V. Нарушение ферментативного спектра миокарда.
  2. Акт катализа складывается из трех последовательных этапов.
  3. Анатомические основы остеопатии
  4. Биохимические основы развития аллергических реакций.
  5. В отличие от основ для мазей основы для суппозиториев должны
  6. Взаимосвязь фармакокинетики и фармакодинамики
  7. Вопрос 1. Основы Микробиологии. Классификация Микроорганизмов
  8. Вопрос 22. ГЕНЕТИЧЕСКИЕ ОСНОВЫ ИММУННОГО ОТВЕТА
  9. Вопрос2. Теоретические основы маркетинговых коммуникаций Коммуникационные модели
  10. Вопр№61 Основы сердечно-легочной реанимации

Ферментативная кинетика исследует влияние химической природы реагирующих веществ и условий их взаимодействия на скорость ферментативной реакции.

Л. Михаэлис и М. Ментен разработали общую теорию ферментативной кинетики. Они исходили из предположения, что ферментативный процесс протекает в виде следующей химической реакции:

[E] + [S] ↔ [ES] → [P] + [E]

Фермент [E] образует с субстратом [S] фермент-субстратный комплекс [ES], распадающийся с образованием продукта реакции [P] и свободного фермента [E].

К ферментативным реакциям применимы общие принципы кинетики химических реакций. Любая химическая реакция характеризуется константой равновесия Кр. Для реакции, представленной на схеме, константа равновесия равна отношению произведения концентраций образующихся веществ к произведению концентраций исходных веществ:

В состоянии равновесия скорость прямой (v+1) и обратной (v–1) реакций равны:

v+1 = k + 1[ А ] • [ B ]

v–1 = k 1 [ С ] • [ D ],

v+1 = v–1

Соответственно k+1[А]•[B] = k–1[С]•[D], или

Таким образом, константа равновесия равна отношению констант скоростей прямой и обратной реакций.

В случае ферментативной реакции величину, обратную константе равновесия, называют субстратной константой или константой диссоциации фермент–субстратного комплекса и обозначают символом KS.

KS определяет степень сродства субстрата и фермента: чем ниже значение KS, тем выше сродство.

Скорость катализируемых ферментами реакций зависит отприроды фермента, обладающего низкой или высокой активностью, а также от концентрации субстрата, наличия в среде активаторов или ингибиторов, т емпературы и реакции среды (рН).

При условии избытка субстрата скорость ферментативной реакции прямо пропорциональна концентрации фермента:

Важным отличием ферментативных реакций от обычных химических реакций является насыщение фермента субстратом. При низкой концентрации субстрата зависимость скорости реакции от концентрации субстрата (рис. 6 (а)) является почти линейной, подчиняется кинетике первого порядка и в любой момент времени t определяется следующим кинетическим уравнением:

где [S] – молярная концентрации субстрата; –d[S]/dt – скорость убыли субстрата; k' – константа скорости реакции, которая в данном случае имеет размерность, обратную единице времени (мин–1 или с–1).

При высокой концентрации субстрата скорость реакции максимальна, становится постоянной и не зависящей от концентрации субстрата [ S ]. В этом случае реакция подчиняется кинетике нулевого порядка v = k" (при полном насыщении фермента субстратом) и целиком определяется концентрацией фермента.

Рис.6.Теоретический график зависимости скорости ферментативной реакции от концентрации субстрата при постоянной концентрации фермента:

(а) - реакция первого порядка (при [ S ] < Кm скорость реакции пропорциональна концентрации субстрата);

(б) - реакция смешанного порядка;

(в) - реакция нулевого порядка, когда v = Vmax и скорость реакции не зависит от концентрации субстрата.

. В стационарном состоянии, при котором образование фермент-субстратного комплекса ES уравновешивается его превращением в продукт P, зависимость скорости (v) ферментативного превращения субстрата от его концентрации [S] описывается уравнением Михаэлиса – Ментен:

где KS – субстратная константа, характеризующая активность фермента, Vmax – максимальная скорость реакции при данной суммарной концентрации фермента. Из этого уравнения следует, что при малых [S] скорость реакции возрастает пропорционально концентрации субстрата. Однако при достаточно большом увеличении последней эта пропорциональность исчезает: скорость реакции перестает зависеть от [S] – наступает насыщение, когда все молекулы фермента оказываются занятыми субстратом. Позднее было предложено усовершенствованное уравнение Бриггса-Холдейна:

где Кm представляет собой константу Михаэлиса, являющуюся экспериментально определяемой величиной. Она может быть представлена следующим уравнением:

Рис. 4.13. Кривая уравнения Михаэлиса-Ментен: гиперболическая зависимость начальных скоростей катализируемой ферментом реакций от концентрации субстрата.

В числителе представлены константы скоростей распада комплекса ES в двух направлениях (в сторону исходных Е и S и в сторону конечных продуктов реакции Е и Р). Отношение k–1/ k+1представляет собой константу диссоциации фермент-субстратного комплекса KS, тогда:

Для определения численного значения Кm обычно находят ту концентрацию субстрата, при которой скорость ферментативной реакции v составляет половину от максимальной Vmax, т.е. если v = 1/2 Vmaх. Подставляя значение v в уравнение Бриггса–Холдейна, получаем:

Разделив обе части уравнения на Vmах, получим

Таким образом, константа Михаэлиса численно равна концентрации субстрата моль/л), при которой скорость данной ферментативной реакции составляет половину от максимальной. При этом в комплексе с субстратом находится половина молекул фермента. Определение величины Кm имеет важное значение при выяснении механизма действия эффекторов на активность ферментов и т.д.

Для более удобного графического представления экспериментальных данных Г. Лайнуивер и Д. Бэрк преобразовали уравнение Бриггса–Холдейна по методу двойных обратных величин исходя из того принципа, что если существует равенство между двумя какими-либо величинами, то и обратные величины также будут равны. В частности, если

или

то после преобразования получаем уравнение:

которое получило название уравнения Лайнуивера–Бэрка. Это уравнение прямой линии: у = ах + b. Если теперь в соответствии с этим уравнением построить график в координатах 1/v (y) от l/[S] (x), то получим прямую линию (рис. 4.14), тангенс угла наклона который будет равен величине Km/Vmax; отрезок, отсекаемый прямой от оси ординат, представляет собой l/Vmax(обратная величина максимальной скорости). Если продолжить прямую линию за ось ординат, тогда на абсциссе отсекается отрезок, соответствующий обратной величине константы Михаэлиса – 1/Кm (см. рис. 4.14). Таким образом, величину Кm можно вычислить из данных наклона прямой и длины отрезка, отсекаемого от оси ординат, или из длины отрезка, отсекаемого от оси абсцисс в области отрицательных значений.

Рис. 4.14. График Лайнуивера-Бэрка.

Данный метод нашел широкое применение в современной энзимологии.

Следует отметить некоторые ограничения применения уравнения Ми-хаэлиса–Ментен, обусловленные множественными формами ферментов и аллостерической природой фермента. В этом случае график зависимости начальной скорости реакции от концентрации субстрата - кинетическая кривая) имеет не гиперболическую форму, а сигмоидный характер (рис.).

Рис. Сигмоидная кинетическая кривая насыщения субстратом.

Это означает, что связывание одной молекулы субстрата в одном каталитическом центре повышает связывание субстрата с другим центром, т.е. имеет место кооперативное взаимодействие.


Дата добавления: 2015-08-06 | Просмотры: 1164 | Нарушение авторских прав



1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 |



При использовании материала ссылка на сайт medlec.org обязательна! (0.005 сек.)