 |
|
АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология |
Лабораторная работа. Определение активности аланинаминотрансферазы (АлАТ) и аспартатаминотрансферазы (АсАТ) Оборудование: 1. Штатив с пробирками
Определение активности аланинаминотрансферазы (АлАТ) и аспартатаминотрансферазы (АсАТ)
Принцип метода. Метод основан на фотометрическом определении динитрофенилгидразонов пирувата, образующегося в результате ферментативной реакции под действием АлАТ. При действии АсАТ образуется оксалоацетат, переходящий в пируват самопроизвольно. Концентрация динитрофенилгидразонов пирувата служит мерой активности обоих ферментов.
Ход работы. 1. Определение активности АсАТ. Пробирку с 0,25 мл буферно-субстратной смеси для АсАТ помещают в термостат при 37ОС на 5 мин. Затем добавляют 0,05 мл сыворотки и оставляют в термостате на 30 мин. Когда время инкубации подходит к концу, начинают готовить контроль, в котором 0,05 мл сыворотки смешивают с 0,25 мл буферно-субстратной смеси. Сразу же в опытную и контрольную пробы добавляют 0,25 мл раствора динитрофенилгидразина и оставляют пробы на 10 мин при комнатной температуре. Затем в каждую пробирку добавляют по 2,5 мл 0,4Н раствора едкого натра и через 10 мин колориметрируют пробы при сине-зеленом светофильтре в кювете толщиной 0,5 см против воды. 2. Определение активности АлАТ. Проводят точно так же, как и определение активности АсАТ, только берут субстратно-буферную смесь для АлАТ. Расчет активности АсАТ и АлАТ. Разность между оптическими плотностями контрольной и опытной проб указывает изменение оптической плотности в результате прошедшей ферментативной реакции. По этой разности определяют активность АсАТ и АлАТ по калибровочному графику. Активность ферментов выражают в мкмолях пирувата, образовавшегося за час инкубации на 1 мл сыворотки. Норма активности АлАТ – 0,1-0,7 мкмоль/мл за 1 час, АсАТ – 0,1-0,5 мкмоль/мл за 1 час.
Диагностическое значение определения активности аминотрансфераз Повышение активности аминотрансфераз в сыворотке отмечается при поражении органов и тканей, богатых данными ферментами. При инфаркте миокарда наблюдается повышение активности АсАТ (в 2-20 раз). Увеличение активности начинается через 6-12 часов и возвращается к исходному уровню через 4-5 дней. При стенокардии активность АсАТ, как правило, остается в норме. При заболеваниях печени в первую очередь и наиболее значительно по сравнению с АсАТ изменяется активность АлАТ. При инфекционном гепатите максимум повышения отмечается на 6-10 день заболевания и постепенно возвращается к норме к 15-20 дню. Повышение активности АлАТ отмечается и при безжелтушной форме болезни Боткина. Механические желтухи, холангиты и ряд других заболеваний печени обычно не сопровождаются значительным повышением активности АсАТ и АлАТ и их соотношения (коэффициент де Ритиса). В норме этот коэффициент = 1,33±0,42. При паренхиматозных заболеваниях печени происходит снижение коэффициента, а при остром инфаркте миокарда он резко возрастает.
Дата добавления: 2015-08-26 | Просмотры: 458 | Нарушение авторских прав |