Билет 22
1. Тинкториальные свойства бактерий: методы окраски, красители, механизмы взаимодействия красителей с отдельными бактериальными структурами. Окраска по Грамму
Красители и их виды
Тинкториальные свойства – это отношение бактерий к красящим веществам или способность вступать в реакцию с красителями
и окрашиваться определенным образом. Механизм окраски микроорганизмов – сложный физико-химический процесс, в
котором большую роль играют свойства адсорбции, капиллярности,
химического сродства красителя и микроорганизма и pH среды, в которой
он определяется. Изнутри клетки бактерий окрашиваются основными красителями, так как ее содержание имеет кислую среду, а кислыми красителями – некоторые органеллы, несущие положительный заряд, или фон. Простые методы окраски бактерий – применяется один краситель, а в сложных методах окраски используют несколько красителей,
дифференцирующих средств. Например, метод окраски грам+ и грам-
бактерий, метод окраски Циля-Нильсона.
Виды красителей
1) Основные:
а) метиленовый синий;
б) фуксин основной;
в) генциан виолет;
г) везувин;
д) хризаидин;
е) метиленовый фиолетовый;
ж) малахитовый зеленый;
з) гематоксилин.
2) Нейтральные:
а) нейтральный красный.
3) Кислые:
а) фуксин кислый;
б) конго желтый;
в) нигрозин черный;
г) эозин.
Виды растворов
Рабочие – это такие растворы, которые применяются непосредственно для работы. Они готовятся из всех остальных видов растворов.
Водные растворы.
Спиртовые растворы.
Концентрированные растворы.
Протравы
Протравы служат для повышения силы красителя. К протравам можно отнести кислоты, щелочи. Так как бактериальная клетка заряжена отрицательно, то щелочи используются для разрыхления клеточной стенки бактерии.
Для того чтобы увидеть микроорганизмы, их необходимо окрасить. Существуют простые и сложные способы окра- шивания микроорганизмов. При простом способе окрашивания на мазок наносится один краситель, при сложном способе окрашивания — 2 или более красителей. К таким способам окрашивания относится окраска по Граму. Соответственно выделяют формы бактерий грамположительные (окрашиваются в фиолетовый цвет) и грамотрицательные (окрашиваются в красный цвет). Грамположительные бактерии имеют несложно организованную, но мощную клеточную стенку, состоящую из множественных слоев пептидоглика-на, включающих уникальные полимеры тейхоевых кислот. Грамотрицательные бактерии имеют более тонкую клеточную стенку, включающую бимолекулярный слой пептидо-гликана и не содержащую тейхоевой кислоты.
Окраска препарата по Граму
1. Небольшое количество генцианвиолета напить на препарат; время окраски — 2 мин.
2. Избыток краски слить в лоток, на препарат нанести пипеткой несколько капель раствора Люголя на 1 минуту.
3. На препарат налить несколько капель спирта, обесцвечивание проводить до отхождения фиолетовых капель — струи краски, но не более 30 с.
4. Мазок тщательно промыть водой.
5. Мазок докрасить разведенным фуксином — 2 мин.
Микроскопирование препарата
1. Установить освещение: конденсор должен быть поднят до упора, настройку производить с объективом малого увеличения 8-х — необходимо белое освещенное поле.
2. Препарат поместить на предметный столик.
3. Макровинтом опустить объектив на расстояние 0,5 см от препарата.
4. Глядя в окуляр, получить изображение препарата, вращая макровинт против часовой стрелки (на себя).
5. Произвести точную фокусировку с помощью микровинта.
6. Переместить револьвер на большое увеличение (объектив 40-х) и провести дефокусировку только микровинтом.
7. После просмотра препарата перевести револьвер на увеличение 8-х (малое) и только после этого снять препарат с предметного столика.
Дата добавления: 2015-09-03 | Просмотры: 2230 | Нарушение авторских прав
1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 | 13 | 14 | 15 | 16 | 17 | 18 | 19 | 20 | 21 | 22 | 23 | 24 | 25 | 26 | 27 | 28 | 29 | 30 | 31 | 32 | 33 | 34 | 35 | 36 | 37 | 38 | 39 | 40 | 41 | 42 | 43 | 44 | 45 | 46 | 47 | 48 | 49 | 50 | 51 | 52 | 53 | 54 | 55 | 56 | 57 | 58 | 59 | 60 | 61 | 62 | 63 | 64 | 65 |
|