АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Билет 22

1. Тинкториальные свойства бактерий: методы окраски, красители, механизмы взаимодействия
красителей с отдельными бактериальными структурами. Окраска по Грамму

Красители и их виды

Тинкториальные свойства – это отношение бактерий к красящим веществам или способность вступать в реакцию с красителями

и окрашиваться определенным образом. Механизм окраски микроорганизмов – сложный физико-химический процесс, в

котором большую роль играют свойства адсорбции, капиллярности,

химического сродства красителя и микроорганизма и pH среды, в которой

он определяется. Изнутри клетки бактерий окрашиваются основными красителями, так как ее содержание имеет кислую среду, а кислыми красителями – некоторые органеллы, несущие положительный заряд, или фон. Простые методы окраски бактерий – применяется один краситель, а в сложных методах окраски используют несколько красителей,

дифференцирующих средств. Например, метод окраски грам+ и грам-

бактерий, метод окраски Циля-Нильсона.

Виды красителей

1) Основные:

а) метиленовый синий;

б) фуксин основной;

в) генциан виолет;

г) везувин;

д) хризаидин;

е) метиленовый фиолетовый;

ж) малахитовый зеленый;

з) гематоксилин.

2) Нейтральные:

а) нейтральный красный.

3) Кислые:

а) фуксин кислый;

б) конго желтый;

в) нигрозин черный;

г) эозин.

Виды растворов

Рабочие – это такие растворы, которые применяются непосредственно для работы. Они готовятся из всех остальных видов растворов.

Водные растворы.

Спиртовые растворы.

Концентрированные растворы.

Протравы

Протравы служат для повышения силы красителя. К протравам можно отнести кислоты, щелочи. Так как бактериальная клетка заряжена отрицательно, то щелочи используются для разрыхления клеточной стенки бактерии.

Для того чтобы увидеть микроорганизмы, их необходимо окрасить. Существуют простые и сложные способы окра- шивания микроорганизмов. При простом способе окрашивания на мазок наносится один краситель, при сложном способе окрашивания — 2 или более красителей. К таким способам окрашивания относится окраска по Граму. Соответственно выделяют формы бактерий грамположительные (окрашиваются в фиолетовый цвет) и грамотрицательные (окрашиваются в красный цвет). Грамположительные бактерии имеют несложно организованную, но мощную клеточную стенку, состоящую из множественных слоев пептидоглика-на, включающих уникальные полимеры тейхоевых кислот. Грамотрицательные бактерии имеют более тонкую клеточную стенку, включающую бимолекулярный слой пептидо-гликана и не содержащую тейхоевой кислоты.

Окраска препарата по Граму

1. Небольшое количество генцианвиолета напить на препарат; время окраски — 2 мин.

2. Избыток краски слить в лоток, на препарат нанести пипеткой несколько капель раствора Люголя на 1 минуту.

3. На препарат налить несколько капель спирта, обесцвечивание проводить до отхождения фиолетовых капель — струи краски, но не более 30 с.

4. Мазок тщательно промыть водой.

5. Мазок докрасить разведенным фуксином — 2 мин.

Микроскопирование препарата

1. Установить освещение: конденсор должен быть поднят до упора, настройку производить с объективом малого увеличения 8-х — необходимо белое освещенное поле.

2. Препарат поместить на предметный столик.

3. Макровинтом опустить объектив на расстояние 0,5 см от препарата.

4. Глядя в окуляр, получить изображение препарата, вращая макровинт против часовой стрелки (на себя).

5. Произвести точную фокусировку с помощью микровинта.

6. Переместить револьвер на большое увеличение (объектив 40-х) и провести дефокусировку только микровинтом.

7. После просмотра препарата перевести револьвер на увеличение 8-х (малое) и только после этого снять препарат с предметного столика.

Дата добавления: 2015-09-03 | Просмотры: 2118 | Нарушение авторских прав