АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Возбудители парантеральных гепатитов (В,С,,Д)

Впервые частицы вируса гепатита В были обнаружены Д. Дейном в 1970 г. и впоследствии названы частицами Дей-на.

Структура и химический состав. Вирионы, или частицы Дей-на, имеют сферическую форму диаметром 42 нм. Сердцевина вириона — нуклеокапсид в форме икосаэдра — состоит из 180 капсомеров. Снаружи он окружен липосодержащей внешней оболочкой (рис. 21.15). В состав вириона входят ДНК, белки, ферменты, липиды и углеводы.

Структура генома HBV необычна. Он состоит из кольцевой двунитевой молекулы ДНК, которая в отличие от ДНК других вирусов имеет однонитевой участок (см. рис. 21.15). Его длина непостоянна и составляет 15—60 % длинной цепи. Кольцевая мо­лекула ДНК может принимать линейную форму. В изолирован­ном виде она не обладает инфекционными свойствами. В составе вирусного генома обнаружено около 6 генов, которые конт­ролируют образование антигенов, структурных белков и не менее двух ферментов (ДНК-полимераза, протеинкиназа).

Антигены. В составе вируса гепатита В обнаружено 4 анти­гена: HBs, HBc, НВе и НВх.

HBs-антиген (ранее именовался австралийским антигеном) представляет собой гликопротеин с липидным компонентом, ко­торый содержится во внешней оболочке вириона. В его составе обнаружено два полипептидных фрагмента. Один из них (preS₂) является полиглобулиновым рецептором, ответственным за адсорбцию вируса на аналогичных рецепторах гепатоцитов. Он связывается с сывороточным альбумином, который при поли­меризации превращается в полиальбумин. Таким образом, в составе внешней оболочки вируса гепатита В имеются те же полиальбумины, которые содержатся в сыворотке крови челове­ка. Второй фрагмент (preSi) обладает выраженными иммуно-генными свойствами. Этот пептид, полученный генноинженерны-ми методами, может быть использован для приготовления вак­цины. HBs-антиген обнаруживается в крови.

НВс-антиген является нуклеопротеином. Он содержится в сердцевине вирионов, находящихся в ядрах гепатоцитов, но не поступающих в кровь.

НВе-антиген отщепляется от НВс-антигена при его прохожде­нии через мембрану гепатоцитов, вследствие чего обнару­живается в крови.

НВх-антиген наименее изучен. Возможно, он имеет отноше­ние к раковой трансформации гепатоцитов.

В организме больных гепатитом В синтезируются антитела к трем антигенам HBs, HBc, НВе.

Репродукция. Вирус гепатита В не репродуцируется в куль­турах клеток и куриных эмбрионах. Репликация и транскрип­ция вирусного генома происходит в ядрах гепатоцитов. При этом короткая цепь в кольцевой молекуле ДНК достраивается по длинной цепи с помощью ДНК-полимеразы, после чего на­чинается репликация обеих нитей. Необычным является возмож­ность транскрибирования с вирусной ДНК молекулы РНК, вы­полняющей функцию матрицы для синтеза вирусной ДНК путем обратной транскрипции. Это происходит при участии имеюще­гося в зараженных гепатоцитах фермента обратной транскрип-тазы, происхождение которой неизвестно. Данный процесс, по­нятный в случае РНК-содержащих вирусов, которые с помощью обратной транскрипции получают возможность встроить свой ге­ном (ДНК-транскрипт) в хромосому клетки хозяина, остается загадочным для ДНК-содержащего вируса гепатита В.

Одновременно с вирусного генома транслируется информа­ция для синтеза на рибосомах гепатоцитов НВе- и HBs-антиге-нов, вирусспецифических ферментов и капсидных белков. Син­тезированные нити ДНК собираются в нуклеокапсиды. При вы­ходе из клетки они приобретают внешнюю оболочку с HBs- и НВс-антигенами.

Патогенез заболевания человека и иммунитет. Поскольку входными воротами инфекции при гепатите В являются крове­носные сосуды, вирус сразу же попадает в кровь, с которой разносится по всему организму, фиксируясь прежде всего на ге­патоцитах. Однако репродукция вируса не сопровождается цито­лизом данных клеток. Это свидетельствует о том, что вирус гепа­тита В не обладает прямым цитопатическим действием, а па­тологический процесс в печени возникает не с момента внедре­ния возбудителя в гепатоциты, а только после распознавания иммуноцитами его антигенов на наружной мембране этих кле­ток. Таким образом, поражение клеток печени при гепатите В является иммунообусловленным.

Многообразие патогенетических форм данного заболевания (острые, подострые, хронические или персистирующие) опре­деляется антигенами возбудителя и характером его взаимодей­ствия с гепатоцитами, в результате которого развивается про­дуктивная или интегративная инфекция, с одной стороны, фор­мой иммунного ответа и выраженностью иммунопатологических процессов — с другой.

При острых формах гепатита В подавляется активность Т-хелперов, при хронических — в процесс вовлекаются Т-супрес-. соры. При стабильном подавлении клонов Т-супрессоров форми­руются условия для развития аутоиммунных реакций, направ­ленных против собственных клеточных антигенов и прежде всего печеночного липопротеина. При ингибировании Т-хелперов нару­шается распознавание вирусных антигенов, что в конечном ито­ге приводит к подавлению антителообразования.

В то же время HBV наряду с гепатоцитами может взаимо­действовать с макрофагами и даже встраивать свою ДНК в их клеточный геном. При нормальном развитии иммунного ответа представленные на мембране макрофагов вирусные антигены ин­дуцируют гуморальный ответ, который заканчивается синтезом HBs-, HBc- НВе-антител. Это приводит к формированию на­пряженного гуморального иммунитета, вследствие чего повтор­ные заболевания встречаются редко.

При поражении HBV макрофагов так же, как и Т-хелперов, возникают дефекты в системе распознавания антигенов, что со­провождается развитием иммунодефицитных состояний, являю­щихся основной причиной персистирующих форм гепатита В.

Интеграция вирусной ДНК в геном гепатоцитов происходит как при острой, так и хронической формах гепатита. При этом она носит случайный характер, так как в каждом случае в хро­мосому гепатоцитов встраивается неопределенный участок ви­русной ДНК. При этом интегрированная вирусная ДНК может оказаться дефектной, что делает невозможным экспрессию ее генов, в том числе и тех, которые контролируют образование антигенов. При интеграции полноценной вирусной ДНК синте­зируются вирусные антигены, из которых HBs поступают в кровь. При этом реакции иммунного цитолиза не происходит вследствие отсутствия «мишени» на мембране гепатоцитов для Т-киллеров и NK-клеток. Упомянутые клетки атакуют лишь ге-патоциты, несущие НВс-антиген: чем больше данного антигена представлено на их мембране, тем интенсивнее они разрушаются в результате иммунного цитолиза. При этом происходит мас­совый выход вирусов из разрушенных клеток и генерализа­ция инфекции.

Эпидемиология. Источником инфекции являются больные лю­ди и вирусоносители. Считают, что около 5 % населения на­шей планеты являются вирусоносителями, судя по выявлению у них в крови HBs-антигенов. Заражение вирусом гепатита В часто происходит при медицинских манипуляциях в результате парентерального попадания хотя бы следов инфицированной крови в организм здорового человека. Это имеет место при пере­ливании донорской крови, использовании недостаточно просте-рилизованных шприцев и других медицинских инструментов, взятии крови для анализов, массовых прививках и т. д.

Доказана передача возбудителя при половом контакте. Кро­ме того, может произойти трансплацентарное заражение плода, а также новорожденных при прохождении через инфицирован­ные родовые пути матери.

Вирус гепатита В обладает необыкновенно высокой устой­чивостью к высоким температурам: выдерживает кипячение в течение 15—20 мин, а при 60 °С — до нескольких часов. Ин­фекционные и антигенные свойства вируса сохраняются при УФ-облучении плазмы крови и ее хранении при —20 °С. Вирус чув­ствителен к формалину и детергентам.

Лабораторная диагностика. Серологическая диагностика основана на выявлении вирусных антигенов и антител к ним иммуноферментным или радиоиммунным методом. Основное ди­агностическое значение имеет определение в сыворотке больных HBs-антигена, который появляется в инкубационном периоде и ис­чезает при благоприятном течении острого гепатита через 6—8 мес после начала заболевания. Однако при переходе заболева­ния в хроническую форму и при вирусоносительстве данный ан­тиген циркулирует в крови длительное время. Показателем острой инфекции является одновременное обнаружение в крови HBs- и НВс-антигенов.

Динамика синтеза антител против различных антигенов не­одинакова: в продромальный период появляются НВс-антитела, затем — НВе-антитела и лишь в последнюю очередь после ис­чезновения HBs-антигенов из крови — HBs-антитела. По нали­чию антител к тем или иным антигенам вируса можно судить о периоде заболевания. Для постановки диагноза острого гепа­тита В важное значение имеет обнаружение антител класса IgM против НВс-антигенов.

Специфическая профилактика. Существуют вакцины первого поколения, полученные из плазмы крови хронических носителей HBs-антигенов. Она состоит из частиц HBs-антигенов и явля­ется достаточно эффективной, хотя ее производство затрудне­но из-за ограниченных резервов исходного материала — плазмы крови. Широкое использование вакцин первого поколения позво­лило выработать тактику вакцинации.

Вакцины нового поколения получены генноинженерным пу­тем при встраивании гена, контролирующего образование HBs-антигенов, в геном клеток эукариот.или вируса осповакцины.

Дельта-вирус — возбудитель гепатита, впервые был обнару­жен в 1977 г. в ядрах гепатоцитов у больных хроническим гепатитом В. Частица вируса имеет сферическую форму диамет­ром около 36 нм. Ее сердцевина содержит РНК и внутренний белок (D-антиген), представляющий собой единственный вирус-специфический продукт генома дельта-вируса. Внешняя оболочка последнего содержит HBs-антиген.

Геном дельта-вируса представлен однонитевой молекулой РНК с молекулярной массой 5- 10° мД. Необычайно малым геномом этого вируса можно объяснить его дефектность, проявляю­щуюся в неспособности к самостоятельной репликации в гепато-цитах хозяина. Для репродукции данного вируса необходимо участие вируса-«помощника», роль которого играет вирус гепа­тита В (HBV). Облигатная связь обоих вирусов определяет возможность возникновения инфекции, которая проявляется либо при одновременном заражении этими вирусами, либо при супер­инфицировании дельта-вирусом больного гепатитом В.

Механизм повреждающего действия дельта-вируса на гепато-циты не изучен. По-видимому, он обладает прямым цитопати-ческим действием в отличие от HBV. При этом сочетанное дей­ствие обоих вирусов приводит к развитию более тяжелых форм патологического процесса.

Эпидемиология гепатита, вызываемого дельта-вирусом, прак­тически не отличается от эпидемиологии гепатита В. Дельта-вирус так же, как HBV передается гсадентерадьным путау.

Серологическая диагностика дельта-инфекции основывается на выявлении антител к антигену вируса в сыворотке крови иммуноферментным или радиоиммунным методами.

Специфическая профилактика не разработана.

Возбудитель гепатита С по ряду биохимических свойств име­ет некоторое сходство с флавивирусами. Размер вирусной час­тицы менее 80 нм. Генетический материал представлен РНК. Ви­рус гепатита С так же, как и HBV, передается парентеральным путем. Серодиагностика основывается на выявлении антител в сыворотке крови. О распространенности вирусного гепатита С свидетельствует обнаружение специфических антител в крови здоровых доноров в 0,5—1 % случаев

Билет 37

1. Антибиотики

В медицинской практике антибиотики используются для лечения многих инфекционных заболеваний. Антагонизм может развиваться в форме конкуренции за источники питания. Если один микроорганизм использует другой организм как источник питания, то такой вид антагонизма называется паразитизмом. Примером паразитизма является отношение вирус — хозяин, бактериофаг — бактерии.

2. Гуморальные неспецифические факторы защиты

гуморальные факторы — система комплемента. Комплемент — это комплекс 26 белков в сыворотке крови. Обозначается каждый белок, как фракция, латинскими буквами: С4, С2, СЗ и т. д. В условиях нормы система комплемента находится в неактивном состоянии. При попадании антигенов он активируется, стимулирующим фактором является комплекс антиген — антитело. С активации комплемента начинается любое инфекционное воспаление. Комплекс белков комплемента встраивается в клеточную мембрану микроба, что приводит к лизису клетки. Также комле-мент участвует в анафилаксии и фагоцитозе, так как обладает хемотаксической активностью. Таким образом, комплемент является компонентом многих им-мунолитических реакций, направленных на освобождение организма от микробов и других чужеродных агентов;

3. Спид

Открытию ВИЧ предшествовали работы Р. Галло и его со­трудников, которые на полученной ими культуре клеток Т-лимфоцитов выделили два Т-лимфотропных ретровируса человека. Один из них — HTLV-I (англ., humen T-lymphotropic virus type I), обнаруженный в конце 70-х годов, является возбудителем редкого, но злокачественного Т-лейкоза человека. Второй вирус, обозначенный HTLV-II, также вызывает Т-клеточные лейкозы и лимфомы.

После регистрации в США в начале 80-х годов первых боль­ных с синдромом приобретенного иммунодефицита (СПИД), тогда еще никому не известного заболевания, Р. Галло высказал предположение, что его возбудителем является ретровирус, близкий к HTLV-I. Хотя это предположение через несколько лет было опровергнуто, оно сыграло большую роль в открытии истинного возбудителя СПИДа. В 1983 г. из кусочка ткани увеличенного лимфатического узла гомосексуалиста Люк Монтенье с группой сотрудников Пастеровского института в Париже выделили в культуре Т-хелперов ретровирус. Дальнейшие иссле­дования показали, что этот вирус отличался от HTLV-I и HTLV-II — он репродуцировался только в клетках Т-хелперов и эффекторов, обозначаемых Т4, и не репродуцировался в клет­ках Т-супрессоров и киллеров, обозначаемых Т8.

Таким образом, введение в вирусологическую практику куль­тур лимфоцитов Т4 и Т8 позволило выделить три облигатно-лимфотропных вируса, два из которых вызывали пролиферацию Т-лимфоцитов, выражающуюся в разных формах лейкоза человека, а один — возбудитель СПИДа — вызывал их деструк­цию. Последний получил название вируса иммунодефицита человека — ВИЧ.

Структура и химический состав. Вирионы ВИЧ имеют сфери­ческую форму 100—120 нм в диаметре и по своей структуре близки к другим лентивирусам. Внешняя оболочка вирионов образована двойным липидным слоем с расположенными на нем гликопротеиновыми «шипами» (рис. 21.4). Каждый «шип» состо­ит из двух субъединиц (gp41 и gp!20). Первый пронизывает липидный слой, второй находится снаружи. Липидный слой происходит из внешней мембраны клетки хозяина. Образование обоих белков (gp41 и gp!20) с нековалентной связью между ними происходит при разрезании белка внешней оболочки ВИЧ (gp!60). Под внешней оболочкой расположена сердцевина вириона цилиндрической или конусовидной формы, образован­ная белками (р!8 и р24). В сердцевине заключены РНК, обрат­ная транскриптаза и внутренние белки (р7 и р9).

В отличие от других ретровирусов ВИЧ имеет сложный геном за счет наличия системы регуляторных генов. Без знания основных механизмов их функционирования невозможно понять уникальные свойства этого вируса, проявляющиеся в разнооб­разных патологических изменениях, которые он вызывает в ор­ганизме человека.

В геноме ВИЧ содержится 9 генов. Три структурных гена gag, pol и env кодируют компоненты вирусных частиц: ген gag — внутренние белки вириона, входящие в состав сердцевины и капсида; ген pol — обратную транскриптазу; ген env — типо-специфические белки, находящиеся в составе внешней оболочки (гликопротеины gp41 и gp!20). Большая молекулярная масса gp!20 обусловлена высокой степенью их гликозирования, что является одной из причин антигенной вариабельности данного вируса.

В отличие от всех известных ретровирусов ВИЧ имеет слож­ную систему регуляции структурных генов (рис. 21.5). Среди них наибольшее внимание привлекают гены tat и rev. Продукт гена tat увеличивает скорость транскрипции как структурных, так и регуляторных вирусных белков в десятки раз. Продукт гена rev также является регулятором транскрипции. Однако он контролирует транскрипцию либо регуляторных, либо структур­ных генов. В результате такого переключения транскрипции вместо регуляторных белков синтезируются капсидные белки, что увеличивает скорость репродукции вируса. Тем самым при участии гена rev может определиться переход от латентной инфекции к ее активной клинической манифестации. Ген nef контролирует прекращение репродукции ВИЧ и его переход в латентное состояние, а ген vif кодирует небольшой белок, усиливающий способность вириона отпочковываться от одной клетки и заражать другую. Однако эта ситуация еще более усложнится, когда окончательно будет выяснен механизм регу­ляции репликации провирусной ДНК продуктами генов vpr и vpu. Вместе с тем на обоих концах ДНК провируса, интегри­рованного в клеточный геном, имеются специфические марке­ры— длинные концевые повторы (ДКП), состоящие из идентич­ных нуклеотидов, которые участвуют в регуляции экспрессии рассмотренных генов. При этом существует определенный алгоритм включения генов в процессе вирусной репродукции в раз­ные фазы заболевания.

Антигены. Антигенными свойствами обладают белки серд­цевины и оболочечные гликопротеины (gp!60). Последние характеризуются высоким уровнем антигенной изменчивости, который определяется высокой скоростью замен нуклеотидов в генах env и gag, в сотни раз превышающей соответствующий показатель для других вирусов. При генетическом анализе многочисленных изолятов ВИЧ не оказалось ни одного с полным совпадением нуклеотидных последовательностей. Более глубокие различия отмечены у штаммов ВИЧ, выделенных от больных, проживающих в различных географических зонах (географиче­ские варианты).

Вместе с тем у вариантов ВИЧ имеются общие антигенные эпитопы. Интенсивная антигенная изменчивость ВИЧ происходит в организме больных в ходе инфекции и вирусоносителей. Она дает возможность вирусу «скрыться» от специфических антител и факторов клеточного иммунитета, что приводит к хронизации инфекции.

Повышенная антигенная изменчивость ВИЧ существенно ограничивает возможности создания вакцины для профилактики СПИДа.

В настоящее время известны два типа возбудителя — ВИЧ-1 •и ВИЧ-2, которые различаются между собой по антигенным, патогенным и другим свойствам. Первоначально был выделен ВИЧ-1, который является основным возбудителем СПИДа в Европе и Америке, а через несколько лет в Сенегале — ВИЧ-2, который распространен в основном в Западной и Центральной Африке, хотя отдельные случаи заболевания встречаются и в Европе.

В США с успехом применяется живая аденовирусная вакцина для иммунизации военнослужащих.

Лабораторная диагностика. Для выявления вирусного антиге­на в эпителиальных клетках слизистой оболочки дыхательных путей применяют иммунофлюоресцентный и иммуноферментный методы, а в испражнениях — иммуноэлектронную микроскопию. Выделение аденовирусов проводится путем заражения чувстви­тельных культур клеток с последующей идентификацией вируса в РНК, а затем в реакции нейтрализации и РТГА.

Серодиагностика проводится в тех же реакциях с парными сыворотками больных людей.

Билет 38

1. 1

2. Питательные среды

Микробиологическое исследование — это выделение чистых культур микроорганизмов, культивирование и изучение их свойств. Чистыми называются культуры, состоящие из микроорганизмов одного вида. Они нужны при диагностике инфекционных болезней, для определения видовой и типовой принадлежности микробов, в исследовательской работе, для получения продуктов жизнедеятельности микробов (токсинов, антибиотиков, вакцин и т. п.).

Для культивирования микроорганизмов (выращивание в искусственных условиях in vitro) необходимы особые субстраты — питательные среды. На средах микроорганизмы осуществляют все жизненные процессы (питаются, дышат, размножаются и т. д.), поэтому их еще называют «средами для культивирования».

Питательные среды

Питательные среды являются основой микробиологической работы, и их качество нередко определяет результаты всего исследования. Среды должны создавать оптимальные (наилучшие) условия для жизнедеятельности микробов.

Требования, предъявляемые к средам

Среды должны соответствовать следующим условиям:

1) быть питательными, т. е. содержать в легко усвояемом виде все вещества, необходимые для удовлетворения пищевых и энергетических потребностей. Ими являются источники органогенов и минеральных (неорганических) веществ, включая микроэлементы. Минеральные вещества не только входят в структуру клетки и активизируют ферменты, но и определяют физико-химические свойства сред (осмотическое давление, рН и др.). При культивировании ряда микроорганизмов в среды вносят факторы роста — витамины, некоторые аминокислоты, которые клетка не может синтезировать;

Внимание! Микроорганизмы, как все живые существа, нуждаются в большом количестве воды.

2) иметь оптимальную концентрацию водородных ионов — рН, так как только при оптимальной реакции среды, влияющей на проницаемость оболочки, микроорганизмы могут усваивать питательные вещества.

Для большинства патогенных бактерий оптимальна слабощелочная среда (рН 7,2—7,4). Исключение составляют холерный вибрион — его оптимум находится в щелочной зоне

(рН 8,5—9,0) и возбудитель туберкулеза, нуждающийся в слабокислой реакции (рН 6,2—6,8).

Чтобы во время роста микроорганизмов кислые или щелочные продукты их жизнедеятельности не изменили рН, среды должны обладать буферностью, т. е. содержать вещества, нейтрализующие продукты обмена;

3) быть изотоничными для микробной клетки, т. е. осмотическое давление в среде должно быть таким же, как внутри клетки. Для большинства микроорганизмов оптимальна среда, соответствующая 0,5% раствору натрия хлорида;

4) быть стерильными, так как посторонние микробы препятствуют росту изучаемого микроба, определению его свойств и изменяют свойства среды (состав, рН и др.);

5) плотные среды должны быть влажными и иметь оптимальную для микроорганизмов консистенцию;

6) обладать определенным окислительно-восстановительным потенциалом, т. е. соотношением веществ, отдающих и принимающих электроны, выражаемым индексом RH2. Этот потенциал показывает насыщение среды кислородом. Для одних микроорганизмов нужен высокий потенциал, для других — низкий. Например, анаэробы размножаются при RH2 не выше 5, а аэробы — при RH2 не ниже 10. Окислительно-восстановительный потенциал большинства сред удовлетворяет требованиям к нему аэробов и факультативных анаэробов;

7) быть по возможности унифицированным, т. е. содержать постоянные количества отдельных ингредиентов. Так, среды для культивирования большинства патогенных бактерий должны содержать 0,8—1,2 гл амин-ного азота NH2, т. е. суммарного азота аминогрупп аминокислот и низших полипептидов; 2,5—3,0 гл общего азота N; 0,5% хлоридов в пересчете на натрия хлорид; 1% пептона.

Желательно, чтобы среды были прозрачными — удобнее следить за ростом культур, легче заметить загрязнение среды посторонними микроорганизмами.

Классификация сред

Потребность в питательных веществах и свойствах среды у разных видов микроорганизмов неодинакова. Это исключает возможность создания универсальной среды. Кроме того, на выбор той или иной среды влияют цели исследования.

В настоящее время предложено огромное количество сред, в основу классификации которых положены следующие признаки.

1. Исходные компоненты. По исходным компонентам различают натуральные и синтетические среды. Натуральные среды готовят из продуктов животного и

растительного происхождения. В настоящее время разработаны среды, в которых ценные пищевые продукты (мясо и др.) заменены непищевыми: костной и рыбной мукой, кормовыми дрожжами, сгустками крови и др. Несмотря на то, что состав питательных сред из натуральных продуктов очень сложен и меняется в зависимости от исходного сырья, эти среды нашли широкое применение.

Синтетические среды готовят из определенных химически чистых органических и неорганических соединений, взятых в точно указанных концентрациях и растворенных в дважды дистиллированной воде. Важное преимущество этих сред в том, что состав их постоянен (известно, сколько и какие вещества в них входят), поэтому эти среды легко воспроизводимы.

2. Консистенция (степень плотности). Среды бывают жидкие, плотные и полужидкие. Плотные и полужидкие среды готовят из жидких веществ, к которым для получения среды нужной консистенции прибавляют обычно агар-агар или желатин.

Агар-агар — полисахарид, получаемый из определенных

сортов морских водорослей. Он не является для микроорганизмов питательным веществом и служит только для уплотнения среды. В воде агар плавится при 80— 100°С, застывает при 40—45°С.

Желатин — белок животного происхождения. При 25— 30°С желатиновые среды плавятся, поэтому культуры на них обычно выращивают при комнатной температуре. Плотность этих сред при рН ниже 6,0 и выше 7,0 уменьшается, и они плохо застывают. Некоторые микроорганизмы используют желатин как питательное вещество — при их росте среда разжижается.

Кроме того, в качестве плотных сред применяют свернутую сыворотку крови, свернутые яйца, картофель, среды с селикагелем.

3. Состав. Среды делят на простые и сложные. К первым относят мясопептонный бульон (МПБ), мясопептонный агар (МПА), бульон и агар Хоттингера, питательный желатин и пептонную воду. Сложные среды готовят, прибавляя к простым средам кровь, сыворотку, углеводы и другие вещества, необходимые для размножения того или иного микроорганизма.

4. Назначение: а) основные (общеупотребительные) среды служат для культивирования большинства патогенных микробов. Это вышеупомянутые МП А, МПБ, бульон и агар Хоттингера, пептонная вода;

б) специальные среды служат для выделения и выращивания микроорганизмов, не растущих на простых средах. Например, для культивирования стрептококка к средам прибавляют сахар, для пневмо- и менингококков — сыворотку крови, для возбудителя коклюша — кровь;

в) элективные (избирательные) среды служат для выделения определенного вида микробов, росту которых они благоприятствуют, задерживая или подавляя рост сопутствующих микроорганизмов. Так, соли желчных кислот, подавляя рост кишечной палочки, делают среду

элективной для возбудителя брюшного тифа. Среды становятся элективными при добавлении к ним определенных антибиотиков, солей, изменении рН.

Жидкие элективные среды называют средами накопления. Примером такой среды служит пептонная вода с рН 8,0. При таком рН на ней активно размножается холерный вибрион, а другие микроорганизмы не растут;

г) дифференциально-диагностические среды позволяют отличить (дифференцировать) один вид микробов от другого по ферментативной активности, например среды Гисса с углеводами и индикатором. При росте микроорганизмов, расщепляющих углеводы, изменяется цвет среды;

д) консервирующие среды предназначены для первичного посева и транспортировки исследуемого материала; в них предотвращается отмирание патогенных микроорганизмов и подавляется развитие сапрофитов. Пример такой среды — глицериновая смесь, используемая для сбора испражнений при исследованиях, проводимых с целью обнаружения ряда кишечных бактерий.

3. Гепатит (А,Е)

Возбудитель гепатита A (HAV—Hepatitis A virus) относится к семейству пикорнавирусов, роду энтеровирусов. Вызыва­ет наиболее распространенный вирусный гепатит, который имеет несколько исторических названий (инфекционный, эпидемический гепатит, болезнь Боткина и др.). В нашей стране около 70 % случаев вирусного гепатита вызывается вирусом гепатита А. Вирус впервые был обнаружен С. Фейстоуном в 1979 г. в фекалиях боль­ных методом иммунной электронной микроскопии.

Структура и химический состав. По морфологии и структуре вирус гепатита А близок ко всем энтеровирусам (см. 21.1.1.1). В РНК вируса гепатита А обнаружены нуклеотидные после­довательности, общие с другими энтеровирусами.

Вирус гепатита А имеет один вирусспецифический антиген белковой природы. HAV отличается от энтеровирусов более высокой устойчивостью к действию физических и химических факторов. Он частично инактивируется при нагревании до 60°С в течение 1 ч, при 100 °С разрушается в течение 5 мин, чувст­вителен к действию.формалина и УФ-излучению.

Культивирование и репродукция. Вирус гепатита обладает пониженной способностью к репродукции в культурах клеток. Однако его удалось адаптировать к перевиваемым линиям кле­ток человека и обезьян. Репродукция вируса в культуре кле­ток не сопровождается ЦПД. HAV почти не выявляется в куль-туральной жидкости, поскольку ассоциирован с клетками, в ци­топлазме которых он репродуцируется:

Патогенез заболеваний человека и иммунитет. HAV так же, как и другие энтеровирусы, с пищей попадает в желудочно-кишечный тракт, где репродуцируется в эпителиальных клетках слизистой оболочки тонкой кишки и регионарных лимфатичес­ких узлах. Затем возбудитель проникает в кровь, в которой он обнаруживается в конце инкубационного периода и в первые дни заболевания.

В отличие от других энтеровирусов основной мишенью по­ражающего действия HAV являются клетки печени, в цитоплазме которых происходит его репродукция. Не исключена возможность поражения гепатоцитов NK-клетками (натуральными киллера­ми), которые в активированном состоянии могут взаимодейство­вать с ними, вызывая их разрушение. Активация NK-клеток происходит и в результате их взаимодействия с интерфероном, индуцированным вирусом. Поражение гепатоцитов сопровожда­ется развитием желтухи и повышением уровня трансаминаз в сыворотке крови. Далее возбудитель с желчью попадает в про­свет кишечника и выделяется с фекалиями, в которых отме­чается высокая концентрация вируса в конце инкубационного периода и в первые дни заболевания (до развития желтухи). Гепатит А обычно заканчивается полным выздоровлением, ле­тальные исходы редки.

После перенесения клинически выраженной или бессимптом­ной инфекции формируется пожизненный гуморальный иммуни­тет, связанный с синтезом противовирусных антител. Иммуно­глобулины класса IgM исчезают из сыворотки через 3—4 мес после начала заболевания, в то время как IgG сохраняются в течение многих лет. Установлен также синтез секреторных им­муноглобулинов SlgA.

Эпидемиология. Источником инфекции являются больные люди, в том числе и с распространенной бессимптомной фор­мой инфекции. Вирус гепатита А широко циркулирует среди на­селения. На Европейском континенте сывороточные антитела против HAV содержатся у 80 % взрослого населения, достигше­го 40-летнего возраста. В странах с низким социально-экономи­ческим уровнем инфицирование происходит уже в первые годы жизни. Гепатитом А часто болеют дети.

Больной наиболее опасен для окружающих в конце инкуба­ционного периода и в первые дни разгара болезни (до появле­ния желтухи) в связи с максимальным выделением вируса с фекалиями. Основной механизм передачи — фекально-ораль-ный — через пищу, воду, предметы обихода, детские игрушки.

Лабораторная диагностика проводится путем выявления ви­руса в фекалиях больного методом иммуноэлектронной микро-скопии. Вирусный антиген в фекалиях может Оыть также обна^ ружен с помощью иммуноферментного и радиоиммунного ана­лиза. Наиболее широко применяется серодиагностика гепатита — выявление теми же методами в парных сыворотках крови анти­тел класса IgM, которые достигают высокого титра в течение пер­вых 3—6 нед.

Специфическая профилактика. Вакцинопрофилактика гепа­тита А находится в стадии разработки. Испытываются инактивированная и живая культуральные вакцины, производство которых затруднено в связи со слабой репродукцией вируса в культурах клеток. Наиболее перспективной является разработка генно-инженерной вакцины. Для пассивной иммунопрофилактики гепатита А используют иммуноглобулин, полученный из смеси донорских сывороток.

Возбудитель гепатита Е имеет некоторое сходство с кали-цивирусами. Размер вирусной частицы 32—34 нм. Генетичес­кий материал представлен РНК. Передача вируса гепатита Е, так же как HAV, происходит энтеральным путем. Серодиагно­стика проводится путем определения антител к антигену Е-вируса.

Билет 39

1. Химиотерапевтические препараты

Влияние химических веществ на микроорганизмы различно. Оно зависит от химического соединения, его концентрации, продолжительности воздействия.

В малых концентрациях химическое вещество может являться питанием для бактерий, а в больших — оказывать на них губительное действие. Например, соль NaCl в малых количествах добавляют в питательные среды. Так же существуют галофильные микроорганизмы, которые предпочитают соленую среду. В больших концентрациях NaCl задер-

живает размножение микроорганизмов. Для примера можно привести консервирование в быту: при недостаточном количестве соли баллоны с овощами могут «взрываться».

Многие химические вещества изспользуются в медицине в качестве дезинфицирующих средств. К ним относятся фенолы, соли тяжелых металлов, кислоты, щелочи. К наиболее распространенным дезрастворам относят хлоросодер-жащие соединения: хлорная известь, хлорамин Б, дихлор-1, сульфохлорантин, хлорцин и др. Активность дезинфицирующих веществ не одинакова и зависит от времени экспозиции, концентрации, температуры. В качестве контрольных микроорганизмов для изучения действия дезрастворов используют S. typhi и S. aureus. Для дезинфекции могут использоваться кислоты: 40% раствор уксусной кислоты для обеззараживания обуви. Виды дезинфекций: профилактическая— для предупреждения и распространения инфекций; текущая — при возникновении эпидемического очага и заключительная — после окончания эпидемической вспышки, (см. схему «Характеристика показаний для дезинфекции»)

Некоторые химические вещества используются в качестве антисептиков. Антисептики — это противомикробные вещества, которые используются для обработки биологических поверхностей. Антисептика — это комплекс мероприятий, направленных на уничтожение микробов в ране или организме в целом, на предупреждение и ликвидацию воспалительного процесса. К антисептикам относятся:

препараты йода (спиртовый раствор йода, йодинол, йодоформ, раствор Люголя);

* соединения тяжелых металлов (соли ртути, серебра, цинка);

* химические вещества нитрофуранового ряда (фуразо-лидон, фурациллин);

окислители (перекись водорода, калия перманганат);

* кислоты и их соли (салициловая, борная);

* красители (метиленовый синий, бриллиантовый зеленый).

Характеристика показаний для дезинфекции

2. Формы иммунного ответа

Специфическая защита организма направлена на уничтожение какого-либо конкретного антигена. Она осуществляется комплексом специальных форм реагирования иммунной системы. К этим формам относятся: антителообразова-ние, иммунный фагоцитоз, киллерная функция лимфоцитов, аллергические реакции, протекающие в виде гиперчувствительности немедленного типа (ГНТ) и гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ), иммунологическая память и иммунологическая толерантность.

Основными клетками, которые обеспечивают неспецифическую и специфическую защиту организма от чужеродных веществ, являются фагоцитирующие клетки, Т- и В-лимфоциты, антитела, комплемент, интерфероны, ферменты. Эти все клетки участвуют в иммунных реакциях макроорганизма. В зависимости от природы антигена на каждом из этапов защиты включаются наиболее эффективные формы реагирования и иммунореагенты. Например, для обезвреживания столбнячного и дифтерийного токсинов основную роль играют антитела (антитоксины), для предохранения от живых бактерий — фагоцитоз. Для противодействия клеткам злокачественных опухолей — цито-токсические Т-лимфоциты.

Результатом взаимодействия антигена с организмом человека является формирование специфической невосприимчивости организма (иммунитет), иммунологическая память к данному антигену, толерантность (терпимость) к антигену. Неблагоприятным последствием является приобретение повышенной чувствительности к антигену (аллергия).

3. ЕСНО инфекции

Название представляет собой аббревиатуру, состоящую из первых букв английских слов: enteric cytopatogenic human orphans — «кишечные цитопатогенные вирусы-сироты человека». Впервые были изолированы из фекалий людей в 1951 —1953 гг. Дж. Мельником и др. Поскольку их роль в патологии человека оставалась неизвестной, они были названы вирусами-«сиро-тами».

В отличие от вирусов полиомиелита и Коксаки вирусы ECHO не патогенны для лабораторных животных.

Антигены. В настоящее время известен 31 серотип вирусов ECHO, имеющих общий комплементсвязывающий антиген. Они дифференцируются в реакции нейтрализации.

Некоторые серотипы вирусов ECHO способны агглютиниро­вать эритроциты человека 0 группы крови.

Патогенез заболеваний человека и иммунитет. Вирусы ECHO, подобно вирусам Коксаки, являются возбудителями различных заболеваний, преимущественно детского возраста. Многие серо­типы вирусов способны поражать ЦНС, вызывая полиомиелито-подобные заболевания, асептический менингит, иногда энцефа­лит. Описаны вспышки внутрибольничного ЕСНО-вирусного энцефалита в палатах для новорожденных детей с летальным исходом. Некоторые штаммы вызывают воспалительные про­цессы в поперечнополосатых мышцах, проявляющиеся в виде эпидемической миалгии, миокардита. Возможны поражения ки­шечника (гастроэнтериты), респираторного тракта (ОРЗ у де­тей), сосудистой оболочки глаза (увеит), паренхиматозных органов. Нередко вирусы ECHO вызывают заболевания, сопро­вождающиеся лихорадкой и сыпью.

После перенесения заболевания формируется гуморальный типоспецифический иммунитет, продолжительность которого колеблется в разных пределах. /

Специфическая профилактика и лечение ЕСНО-вирусных инфекций не разработаны.

Дата добавления: 2015-09-03 | Просмотры: 892 | Нарушение авторских прав