АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

ПЕРОКСИДАЗА (МИЕЛОПЕРОКСИДА-

ЗА) (К. Ф. 1.11.1.7). Фермент, локализующий-

ся преимущественно в специфической зернисто-

сти цитоплазмы гранулоцитов и являющийся

маркером клеток миелоидной природы. Миелопе-

роксидаза разрушает токсическую перекись во-

дорода, образующуюся внутриклеточно в про-

цессе жизнедеятельности клеток.

Метод Грэхема — Кнолля. П р и н ц и п.

В присутствии пероксидазы бензидин окисляется

перекисью водорода в коричневый оксибензидин.

Р е а к т и в ы. 1. 4% формалиново-спирто-

вой раствор (10 частей 40 % формалина и 90 ча-

стей 96 % спирта). 2. Реактив на пероксидазу:

бензидин (на кончике ножа) растворяют в 6 мл

96 % спирта, прибавляют 4 мл воды и 0,02 мл

3 % перекиси водорода. Реактив годен к упот-

реблению в течение 5—6 дней. 3. Краситель

Романовского — Гимзы.

С п е ц и а л ь н о е о б о р у д о в а н и е. Не

требуется.

Х о д о п р е д е л е н и я. Свежие мазки (1 —

2-дневной давности) фиксируют 4 % формали-

ново-спиртовым раствором в течение 30 с. Обмы-

вают в проточной воде и высушивают. Заливают

реактивом на пероксидазу на 5 мин. Тщательно

промывают в проточной воде и высушивают.

Докрашивают красителем Романовского —

Гимзы. Пероксидаза выявляется в цитоплазме

клеток в виде коричневых гранул.

Модифицированный метод Нарциссова.

П р и н ц и п см метод Грэхема — Кнолля. Для

уменьшения инактивации фермента использова-

ны соответствующий фиксатор и небольшое ко-

личество перекиси водорода.

Р е а к т и в ы. 1. 60 % водный раствор аце-

тона. 2. 0,1 М раствор бората натрия (можно

использовать фосфатный или мединаловый бу-

ферный раствор рН 7.6). 3. 5 % водный раствор

трилона Б. 4. Насыщенный водный раствор

бензидина. 5. 0,003 % раствор перекиси водо-

рода (разводят перед употреблением из 3 % рас-

твора в два этапа). 6. Инкубационная среда:

5 п/р В. В. Меньшикова 129

мл 5 % водного раствора трилона Б, 10 мл

раствора бората натрия, 35 мл насыщенного

раствора бензидина и 2 мл раствора перекиси

водорода. 7. 0,5 % раствор метилового зеленого

на буферном растворе (рН 5,0) или 0,1 % вод-

ный раствор метиленового синего.

С п е ц и а л ь н о е о б о р у д о в а н и е.

Термостат.

Ход о п р е д е л е н и я. Свежеприготовлен-

ные мазки фиксируют в 60 % водном растворе

ацетона в течение 30 с. Промывают дистиллиро-

ванной водой. Инкубируют в инкубационной

среде в течение 1 ч в термостате при 37 °С.

Промывают дистиллированной водой. Докраши-

вают мазки метиловым зеленым или метиле-

новым синим в течение 10 мин. Можно исследо-

вать недокрашенные мазки.

Модифицированный метод [Шафран М. Г.

и соавт., 1979). П р и н ц и п см. Метод Грэ-

хема — Кнолля. Бензидин заменен О-дианизи-

дином.

Р е а к т и в ы. 1. 10% спиртовой раствор

формалина (1 мл 10 % формалина и 9 мл этило-

вого спирта). 2. Спиртовой раствор О-дианизи-

дина (можно использовать препарат Шосткин-

ского завода химреактивов; белые или желтова-

тые кристаллы препарата быстро окисляются на

воздухе, при изменении окраски он становится

непригодным). 24 мг О-дианизидина растворяют

в 5 мл метанола и доводят дистиллированной

водой до 9,9 мл. 3. 3 % раствор перекиси водоро-

да. 4. Реакционная смесь: к спиртовому раст-

вору О-дианизидина прибавляют перед употреб-

лением 0,1 мл перекиси водорода. 5. 0,25 %

водный раствор азура А или другой ядерный

краситель.

С п е ц и а л ь н о е о б о р у д о в а н и е. Не

требуется.

Х о д о п р е д е л е н и я. Мазки

фиксируют спиртовым раствором формалина

в течение 10—15 с. Споласкивают проточной

водой. На мазки наносят реакционную смесь

на 2—3 мин при комнатной температуре. Спо-

ласкивают проточной водой. Докрашивают рас-

твором азура в течение 10—15 с. Споласкивают

проточной водой и высушивают.

Н о р м а л ь н ы е в е л и ч и н ы. В крови

здоровых людей активность пероксидазы выяв-

ляется преимущественно в цитоплазме грануло-

цитов и в меньшей степени — моноцитов. Фер-

мент появляется в кровяных клетках на стадии

промиелоцитов и у ряда миелобластов (более

зрелых). Не содержат фермента недифференци-

рованные бласты, часть миелобластов и лимфо-

бласты; 3—16 % нейтрофилов окрашены резко

положительно (+ + +). 60—90 % — положи-

тельно (++) и остальные—слабоположитель-

но (+). СЦК нейтрофилов здоровых людей

равен 2,56 + 0,033. Эозинофилы характеризу-

ются резко положительной реакцией на перок-

сидазу.

К л и н и ч е с к о е з н а ч е н и е. Актив-

ность фермента в нейтрофилах снижена при

инфаркте миокарда, ревматизме, туберкулезе,

опухолях. У больных хроническим миелолейко-

зом, особенно в терминальной стадии, СЦК сни-

жается до 1,63 ・,19 ед. В бластных клетках

активность фермента высокая при остром миело-

бластном лейкозе, слабая — при остром моно-

бластном и отсутствует — при остром лимфо-

бластном лейкозе.

Л и т е р а т у р а. Нарциссов Р. П. Лаб. де-

ло, 1964, № 3, с. 150—151; Шафран М. Г., Пига-

ревский В. Е., Блинова Э. И. Цитология, 1979,

т. 21, № 10, с. 1206—1208; Тодоров И. Клини-

ческие лабораторные исследования в педиат-

рии.— София, 1963, с. 468.

НЕСПЕЦИФИЧЕСКИЕ ЭСТЕРАЗЫ. Труп

па ферментов, гидролизующих эфиры карбоно-

вых кислот; отличаются небольшой специфич-

ностью. Локализуются в цитоплазме клеток,

главным образом в лизосомах. Наибольшая

активность обнаружена в моноцитах крови. Для

определения активности ферментов используют

различные субстраты (а-нафтилацетат, нафтол-

AS-ацетат, нафтол-АS-D-хлорацетат, b-нафтил-

ацетат и др.).

а-Нафтилацетат-эстераза (метод Леффле-

ра). П р и н ц и п. Соединение а-нафтилацетата

при определенных рН и температуре под влия-

нием неспецифических эстераз гидролизуется

с образованием свободного нафтола, который

с солями диазония дает цветное окрашивание.

Р е а к т и в ы. 1. Формалин промышленного

производства (40%). 2. а-Нафтилацетат. 3.

Ацетон х. ч. 4. 0,1 М раствор фосфатного буфера

(рН 7,8—8,0). 5. Прочный синий ВВ (или проч-

ный красный ТР). 6. Ядерный краситель (гема-

лаун кислый, метиловый зеленый и пр.). 7. Ин-

кубационная среда: 10 мг а-нафтилацетата, рас-

творенного в 0,2 мл ацетона; 40 мл буферного

раствора (реактив № 4), встряхивают до раст-

ворения; 50 мг соли диазония (реактив № 5),

встряхивают до растворения и фильтруют.

С п е ц и а л ь н о е о б о р у д о в а н и е. 1.

Весы. 2. Эксикатор.

Ход о п р е д е л е н и я. Свежеприготовлен-

ные и высушенные на воздухе мазки фиксируют

в парах формалина 4 мин (фиксированные

препараты можно сохранять в холодильнике

несколько недель или 2 сут при комнатной тем-

пературе). Инкубируют в инкубационной среде

при комнатной температуре 30 мин. Промывают

в проточной воде (2—3 мин). Докрашивают

кислым гемалауном 8 мин. Промывают дистил-

лированной водой 15 мин. Активность фермента

выявляется в виде коричнево-черных (при упот-

реблении прочного синего) или красно-коричне-

вых (при употреблении прочного красного) гра-

нул в цитоплазме клеток.

Н о р м а л ь н ы е в е л и ч и н ы. В моноци-

тах периферической крови активность фермента

содержится в виде мелкой обильной зернистости.

СЦК в моноцитах составляет 0,95Ѓ}0,01. Не-

большое количество лимфоцитов (18,0Ѓ}0,4 %)

содержит активность фермента в виде единич-

ных гранул в цитоплазме; в тромбоцитах пери-

ферической крови фермент выявляется в виде

мелких гранул, в сегментоядерных нейтрофилах

его активность ничтожна.

Среди костномозговых элементов наиболь-

шую активность имеют промиелоциты, миело-

циты, мегакариоциты, моноциты, ретикулярные

клетки. В моноцитах периферической крови и

костного мозга с помощью двойной инкубации

и добавления фторида натрия (NaF) в коли-

честве 1,5 мг/мл показан NaF —чувствитель-

ный фермент.

К л и н и ч е с к о е з н а ч е н и е. Снижение

активности фермента в моноцитах и увеличение

в лимфоцитах обнаружено при диффузных пора-

жениях печени. Значительная активность фер-

мента выявлена в миеломных клетках при плаз-

моцитоме, в властных клетках при остром мо-

нобластном (гистиомонобластном) лейкозе и

при промиелоцитарном лейкозе, в то время как

при остальных формах острых лейкозов актив-

ность фермента в бластных клетках ничтожна.

При хроническом лимфолейкозе активность фер-

мента в лимфоцитах резко снижена. Фермента-

тивная активность нейтрофилов при острых лей-

козах, особенно при остром миелобластном,

снижена.

Л и т е р а т у р а. Lofjler H. Klin. Wschr.,

1961, Bd 29, H. 23, S. 1220—1227.

Дата добавления: 2015-09-03 | Просмотры: 560 | Нарушение авторских прав