АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Метод Пигаревского (модифицированный)

П р и н ц и п. Избирательная окраска кат'ион-

ного белка гранулоцитов прочным зеленым при

рН 8,1—8,2.

Р е а к т и в ы. 1. Спиртовой раствор форма-

лина (1 мл формалина и 19 мл абсолютного

этилового спирта). 2. 0,2 М раствор триса: 24,2 г

триса (оксиметил) аминометана растворяют в

1 л дистиллированной воды. 3. 0,1 н. НС1. 4. Ме-

таноловый трис-буфер (25 мл реактива № 2

смешивают с 22,5 мл реактива № 3 и 52,5 мл

метанола). 5. Забуференный спиртовой раствор

прочного зеленого (рН 8,1—8,2): 100 мг прочно-

го зеленого растворяют в 100 мл реактива № 4.

Определяют рН через сутки после приготовле-

ния реактива и выравнивают его добавлением

в раствор порошка сухого триса (при рН ниже

8,1) или слабого раствора НС1 (рН выше 8,2).

Установленная величина рН стабильна при ра-

боте в течение 4 мес. Раствор хранить в стеклян-

ной посуде с притертой пробкой (можно при

комнатной температуре). 6. 0,25 % водный раст-

вор азура А: 250 мг азура А растворяют в 100 мл

дистиллированной воды. Краситель стойкий.

С п е ц и а л ь н о е о б о р у д о в а н и е. 1.

рН-Метр. 2. Весы.

Х о д о п р е д е л е н и я. Высушенные на

воздухе мазки фиксируют в спиртовом растворе

формалина 10—15 с. Во избежание фоновой

окраски можно использовать свежеприготовлен-

ные нефиксированные мазки (не позже чем через

48 ч после приготовления, препараты более дли-

тельного срока необходимо фиксировать). Маз-

ки окрашивают забуференным спиртовым раст-

вором прочного зеленого (реактива № 5) в те-

чение 20 мин. Быстро ополаскивают дистиллиро-

ванной водой. Окрашивают водным раствором

азура А в течение 15—20 с. Смывают мазки

дистиллированной водой и высушивают. При

микроскопии с желтым или оранжевым свето-

фильтром катионный белок в цитоплазме клеток

имеет вид ярко-зеленых гранул.

В о с п р о и з в о д и м о с т ь м е т о д а: ко-

эффициент вариации V = 2,9 % для нормальных

величин и 5,2 % для патологических (не превы-

шает допустимой величины).

Н о р м а л ь н ы е в е л и ч и н ы. У взрослых

в возрасте 20—30 лет СЦК равен для мужчин

1,58 + 0,01 и для женщин 1,58 + 0,03. Более вы-

сокие значения получены у детей в возрасте

1 — 12 мес (1,89Ѓ}0,03) и 1—3 лет (1,96 + 0,03).

Дата добавления: 2015-09-03 | Просмотры: 437 | Нарушение авторских прав