АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ОСНОВНЫХ ФЕРМЕНТОВ ПАТОГЕННОСТИ

1. Плазмокоагулаза.

Принцип метода: В пробирку, содержащую цитратную плазму крови кролика, вносится испытуемая культура. После суточной инкубации в термостате учитываются в динамике результаты. При положительном результате плазма свёртывается (коагулируется) ферментом, несмотря на присутствие антикоагулянта.

Методика: Асептично взятую кровь стабилизируют с помощью 1-4 % цитрата или 0,1 % оксалата натрия. Для получения плазмы цитратную кровь центрифугируют на холоду. Затем плазму разводят (1:3, 1:5) 0,85 % физиологическим раствором и разливают по 0,2-0,3 мл в стерильные пробирки или лунки планшета. Испытуемую культуру вносят пипеткой по 0,1 мл. В каждом опыте должны быть контроли:

- с культурой заведомо патогенных микробов, коагулирующих плазму;

- с культурой непатогенных микробов, не коагулирующих плазму;

- плазма, не засеянная микроорганизмами.

Пробирки (опыт, контроль) ставят в термостат при 37С º на 24 часа. Учёт обязательно проводить через 15 минут, 2, 3, 6 часов и, затем, через 24 часа.

2. Фибринолизин (фибринокиназа).

Принцип метода: В пробирку со сгустком фибрина вносят кровь и испытуемую культуру. После инкубации в термостате учитывается результат. При положительном результате сгусток под влиянием бактерий растворяется, кровь приобретает вид свежей.

Определение фермента фибринокиназы ведут в крови без цитрата в свёрнутом состоянии подобно выявлению плазмокоагулазы, но с обратным эффектом.

3. Гиалуронидаза.

Принцип метода: В пробирку с гиалуроновой кислотой (экстракт пупочных канатиков новорождённых) вносят испытуемую культуру. После инкубации в термостате добавляют реактив (15 % уксусная кислота), вызывающий свёртывание гиалуроновой кислоты, и учитывают результаты. При положительном результате, вследствие расщепления гиалуроновой кислоты ферментом гиалуронидазой сгустка не образуется. При его отсутствии - образуется сгусток.

Методика определения: В начале надо приготовить гиалуроновую кислоту — субстрат, на который действует гиалуронидаза. Гиалуроновую кислоту получают из тщательно отмытых от крови пупочных канатиков новорождённых. Их взвешивают, измельчают, заливают двойным количеством дистиллированной воды, доводят до кипения, фильтруют, фильтрат титруют, то есть находят тот его объём, который с 15 % СН COOH даёт типичный сгусток.

Дата добавления: 2015-09-18 | Просмотры: 1729 | Нарушение авторских прав