АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Успешное лечение вируса Эбола – Заражённые яванские макаки с моноклональными антителами

В 2012 году появились методики по предотвращению заражения вирусом Эбола приматов. Однако эти методики были действенны только при их применении до или в первые минуты после инфицирования. Учёными было проведено исследование, которое показало, что комбинация трёх нейтрализующих моноклональных антител, направленная на оболочку гликопротеина Эболы, приводит к выживанию (4 из 4 яванских макак) без видимых побочных эффектов вследствие применения 3 доз препарата за 3 дня, начиная с суток после заражения. Такое же лечение, начатое через 48 часов после заражения Эболой, привело к полному выздоровлению 2 из 4 яванских макак. У выживших особей была обнаружена гуморальная и клеточно-опосредованная иммунная реакция на гликопротеин эболавируса. Данные сведения выдвигают на передний план важную роль антител в контролировании размножения вируса Эбола в организме и обосновывают использование моноклональных антител в борьбе с тяжёлой инфекцией-филовирусом.

Учёные оптимизировали лечебный протокол (на основе более ранних исследований) с помощью трёх из восьми моноклональных антител (1H3, 2G4, и 4G7), характерных для гликопротеина вируса Эбола, взятых у мышей, которым сделали прививку вакцины против вируса везикулярного стоматита с гликопротеином Эболы. При анализе иммуносорбента с иммобилизированными ферментами оказалось, что моноклональное антитело 2G4 присоединилось к GP2, 4G7 присоединилось к антигенным детерминантам C-концевого сегмента GP1 гликопротеина эболавируса, в то время как 1H3 присоединилось к растворимому сегменту гликопротеина. Каждое по отдельности, данные антитела защищали мышей и были более эффективны при их применении через 24 или 48 часов после заражения, чем за 1-4 дня до инфицирования. Отдельно эти антитела оказались менее эффективными в защите подопытных животных, чем их комбинация, которая полностью защищала подопытных при применении на 2 день после заражения.

Яванские макаки были использованы в качестве модели организма примата, чтобы исследовать, как и может ли вообще лечение ZMAb (комбинацией антител) улучшить выживаемость при заражении большими дозами частиц вируса Эбола. Обезьян разделили на группы и давали разные дозы препарата спустя различные промежутки времени после заражения. Из 8 приматов в ходе исследования выжило 4 благодаря тому, что у них был меньший титр вируса, чем у погибших.

Средства и методы исследования:

· Вирусы и пептиды

Штамм вируса Эбола был произведён на клеточной линии в цельной минимально поддерживающей среде, 2 % бычьей плодной сыворотки и 1% пенициллина/стрептомицина.

· Эксперименты над животными

Все яванские макаки женского и мужского пола получали корм для обезьян, угощения, овощи и фрукты. За особями велось ежедневное наблюдение, их рассматривали на предмет прогрессирования заболевания по внутреннему протоколу изучению филовирусов, одобренному комитетом по уходу за животными Канадского Научного Центра Здоровья Человека и Животных. Велись наблюдения за позами и активностью особей, объёмом испражнений и мочи, потреблением пищи и жидкости, весом, температурой, дыханием и такими проявлениями болезни, как видимая сыпь, кровотечения, синюшность и гиперемия.

· Формирование и очистка нейтрализующих антител гликопротеина вируса Эбола

Для очистки моноклональных антител изначальная культура бактерий клеток гибридомы были выращены в RPMI 1640 (среда для культуры клеток и тканей), 1 слизистой оболочке Л-глютамина, 10% телячьей сыворотки крови и 1 единице пенициллина/стрептомицина и затем увеличена в объёме в гибридоме без сыворотки, 1 слизистой оболочке Л-глютамина и 1 единице убивающего грибки антибиотика.

· Иммуносорбентный анализ с ферментной меткой

· Титрирование вируса Эбола

· Титрирование антител, нейтрализующих вирус Эбола

· Анализ цитокина

· Определение последовательности аминокислотных остатков в гликопротеине вируса Эбола

· Статистические методы

Дата добавления: 2015-09-18 | Просмотры: 444 | Нарушение авторских прав