АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Проведення розподільної хроматографії амінокислот на папері

Готовий фільтр або коло фільтрувального паперу діаметром 12 см розкреслити олівцем на 4 сектори: у трьох секторах на відстані 0,5 см від центру олівцем намітити місця старту, а у четвертому секторі вирізати вузький язичок, що доходить майже до центру (рис. 1). Із краю фільтра в трьох секторах зробити позначки: “Гл” – гліцин, “Сум” – суміш амінокислот, “Лей” – лейцин.

Гл Сум

Лей Фронт роз-

чинника

Гл

.

Лей

Місце старту

Рис. 1. Рис. 2. Хроматограма

суміші амінокислот

Потім на місця старту нанести краплі відповідних розчинів: гліцину, лейцину та суміші цих амінокислот. Краплі не повинні бути більшими, ніж 3– 4 мм у діаметрі. Нанести по 3– 4 краплі поступово, підсушуючи попередню пляму перед нанесенням наступної краплі.

У чашку Петрі налити розчинник, покласти фільтр таким чином, щоб відігнутий язичок був занурений у розчинник. Зверху папір накрити другою чашкою та поставити в термостат з температурою 45–50 ̊ С. Коли розчинник дійде майже до краю фільтра, вийняти папір, підсушити його в сушильній шафі та обробити проявником – розчином нінгідрину. Хроматограму підсушити в термостаті – на ній проявляться кольорові плями амінокислот (рис. 2).

За допомогою хроматограми визначити коефіцієнти розподілу амінокислот гліцину (R_{f гліцину})та лейцину (R_{f лейцину}). Для цього потрібно лінійкою відміряти відстань від місця старту до середини плями кожної з амінокислот (r₁ та r₂) та відстань від місця старту до лінії фронту розчинника (r_p) (рис. 2).

Розрахувати коефіцієнти розподілу (R _f) амінокислот за формулами:

де r ₁– відстань від точки старту до середини плями гліцину, см;

r ₂– відстань від точки старту до середини плями лейцину, см;

r _p – відстань від точки старту до лінії фронту розчинника, см.

Дата добавления: 2015-12-15 | Просмотры: 464 | Нарушение авторских прав