АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Техника исследования

В штатив устанавливают и нумеруют пробирки высотой 4-10 см с внутренним диаметром 0,5-0,8 см. Число и нумерация пробирок должны соответствовать числу и нумерации образцов эритроцитов, с которыми исследуется сыворотка.

Во все пробирки вводят по 3 капли (0,15 мл) испытуемой сыворотки.

Со дна каждой пробирки, содержащей отмытые стандартные эритроциты, очень тонкой пастеровской пипеткой или наконечником автоматической пипетки набирают маленькую каплю (0,01 мл) эритроцитов и переносят ее в пробирку с испытуемой сывороткой согласно нумерации пробирок.

В качестве отрицательного контроля используют сыворотку, заведомо не содержащую антиэритроцитарные антитела. В качестве положительного контроля используют сыворотку, заведомо содержащую антитела к антигенам стандартных эритроцитов.

Содержимое пробирок тщательно перемешивают путем встряхивания и помещают для инкубации в термостат на 45 минут при температуре +37°С. За это время резус-антитела, если они имеются в испытуемой сыворотке, фиксируются на эритроцитах.

После инкубации в пробирки доливают доверху изотонический раствор NaCI, содержимое пробирок перемешивают и центрифугируют, после чего надосадочную жидкость отсасывают. Такое отмывание эритроцитов повторяют 3-4 раза.

В каждую пробирку к отмытым таким образом эритроцитам добавляют 4-7 капель изотонического раствора NaCI для получения 5%-ой взвеси (так как при отмывании эритроциты частично захватываются, интенсивность взвеси контролируют глазом).

Одну каплю (0,05 мл) взвеси эритроцитов из каждой пробирки переносят на белую фарфоровую или любую другую белую пластинку со смачиваемой поверхностью и к каждой капле прибавляют по 1 капле (0,05 мл) антиглобулиновой сыворотки для пробы Кумбса.

Сыворотку тщательно перемешивают с эритроцитами (стеклянной палочкой или углом предметного стекла), после чего пластинку слегка покачивают. При этом наблюдают результат (наличие или отсутствие агглютинации эритроцитов).

Агглютинация обычно начинается в течение первых 10-30 секунд, но при слабом титре резус-антител – может наступить до 20 минут.

Трактовка результата

Наличие агглютинации в каплях с образцами резус-положительных эритроцитов и отсутствие ее с резус-отрицательными и собственными эритроцитами указывает на наличие в сыворотке неполных резус-антител.

Отсутствие агглютинации со всеми образцами эритроцитов указывает на то, что неполные резус-антитела - анти-D, С, Е, с и е – не выявлены.

Дата добавления: 2015-11-28 | Просмотры: 346 | Нарушение авторских прав