АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Робота 3

В останні роки згідно рекомендаціям ВООЗ всі нативні донорські матеріали повинні бути протестовані на ВІЛ за допомогою ПЛР. Об’єктом дослідження ПЛР можуть бути любі нативні матеріали, отримані від людини.

Принцип метода полягає в ампліфікації нуклеотидних послідовностей, які досліджують, при участі термофільної ДНК-полімерази.

Реакція проводиться в 3 етапи.

На першому етапі матеріал (клітина чи ізольована клітинна ДНК) піддається термічній денатурації при 95ºС для поділу двохспіральної ДНК на однонитчасті молекули.

На другому етапі короткі олігонуклеотидні послідовності (затравки, праймери) гібридизуються з комплементарними послідовностями, фланкіруючими невеликий фрагмент ДНК.

На третьому етапі (елонгації) термофільна ДНК-полімераза добудовує ампліфікований фрагмент.

Зазвичай проводять 30 – 40 циклів ампліфікації, що дозволяє розмножити визначальний фрагмент в 10⁶ разів. Далі продукт реакції піддають електрофорезу в агаразному гелі і порівнюють розмір отриманого фрагмента з очікуванням. У випадку необхідності переносять цей продукт на мембранний фільтр і гібридизують із специфічним зондом.

ПЛР дозволяє виявити одну копію вірусного геному в 10⁵ – 10⁶ клітинах через 24 год. після інфікування.

Студент повинен зробити оцінку реакції на основі знань про механізм даної реакції, зарисувати її схему у протоклі та написати висновок.

Дата добавления: 2015-09-03 | Просмотры: 455 | Нарушение авторских прав