АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Реакция торможения гемаглютинации, ее механизм. Практическое применение

1. РТГА Основана на свойстве антисыворотки подавлять вирусную гемагглютинацию,так как нейтрализованный спецефическими антителами вирус утрачивает способность агглютинировать эритроциты..

2. РТГА широко применяется для серодиагностики вирусных инфекций с целью обнаружения спецефических антигеммаглютининов и для идентификации многих вирусов по их гемагглютининам(антигенам)

45.1.Серологические реакции. Реакции между антигенами и антителами in vitro или серологические реакции широко используются в микробиологических и серологических (иммунологических) лабораториях с самыми разнообразными целями:-серодиагностики бактериальных, вирусных, реже других инфекционных заболеваний, сероидентификации выделенных бактериальных, вирусных и других культур различных микроорганизмов Серодиагностику проводят с помощью набора специфических антигеновСероидентификацию микробных культур проводят для определения их вида, серовара с помощью наборов специфических антисывороток, также выпускаемых коммерческими фирмами. Под специфичностью понимают способность антигенов или антител реагировать только с гомологичными антителами, содержащимися в сыворотке крови, либо с гомологичными антигенами соответственно. Чем выше специфичность, тем меньше ложноположительных и ложноотрицательных результатов.В серологических реакциях участвуют антитела, принадлежащие главным образом к иммуноглобулинам классов IgG и IgM. Реакции, протекающие с укрупнением антигена Реакция агглютинации и ее варианты. Реакция агглютинации (agglutinacio - склеивание) внешне проявляется в склеивании и выпадении в осадок корпускулярных антигенов: бактерий, эритроцитовРеакция непрямой, или пассивной, агглютинации (РПА). Под непрямой, или пассивной, агглютинацией понимают реакцию, в которой антитела взаимодействуют с антигенами, предварительно адсорбированными на клетках или частицах. Реакция преципитации и ее варианты. Сущность данной реакции состоит в осаждении (преципитации) антигена, находящегося в дисперсном коллоидном состоянии, воздействием специфических антител в растворе электролита. 2.Реакции, протекающие с нейтрализацией антигена Реакции нейтрализации основаны на способности антител нейтрализовать in vitro биологически-активные антигенсодержащие субстраты: токсины, вирусы, яды змей и т.п. Реакция состоит в смешивании биологически-активного вещества с сывороткой, содержащей антитела, и выявлении нейтрализации его активности в биологическом тесте на животном или в культуре ткани.Реакция нейтрализации in vivo может быть поставлена для выявления антитоксина в организме исследуемого человека. С этой целью в область предплечья внутрикожно вводят незначительное количество токсина, измеряемое в кожных дозах. Отсутствие покраснения и припухлости в месте введения токсина свидетельствует о его нейтрализации циркулирующим в крови антитоксином. Она применяется для решения вопроса о целесообразности иммунизации детей дифтерийным анатоксином с целью профилактики дифтерии. Реакция нейтрализации вирусов. При перенесении многих вирусных заболеваний или вакцинации в сыворотке крови людей обнаруживаются антитела, нейтрализующие инфекционные свойства соответствующих вирусов. Их обнаруживают при смешивании испытуемой сыворотки с вирусом с последующим заражением чувствительного животного либо клеточной культуры. Через несколько суток регистрируют результаты опытов по гибели подопытного животного или ЦПД в пробирке с клеточной культурой. Реакция нейтрализации вирусов нашла широкое применение в вирусологической практике для определения вида (типа) исследуемого вируса и титра вируснейтрализующих антител. В этих случаях используютсоответствующие диагностические антисыворотки. Реакция торможения гемагглютинации (РТГА) является вариантом реакции нейтрализации вируса. Она основана на способности противовирусной антисыворотки подавлять вирусную гемагглютинацию эритроцитов определенных видов животных (кур, гусей и др.). Реакции, протекающие с участием комплемента Реакция связывания комплемента (РСК). Предложена Ж. Бордэ и О. Жангу в 1901 г. и, Данная реакция используется для серодиагностики и обнаружения антигена в исследуемом материале, сероидентификации выделен ных культур Реакция иммунного лизиса. В основе реакции лежит способность специфических антител образовывать иммунные комплексы с клетками, в том числе с эритроцитами, бактериями, что приводит к активации системы комплемента по классическому пути и лизису клеток..

47.Реакциясвязывания комплемента, ее суть, оценка. Особенности постановки реакциисвязывания комплемента при вирусных инфекция1-2. серологическая реакция, пригодная для обнаружения антигенов и антител. В основе ее лежит способность комплемента, многофункционального белкового фактора сыворотки теплокровных животных, связываться комплексом антиген-антитело; несвязавшийся комплемент достаточно легко определяется по лизису бараньих эритроцитов, предварительно сенсибилизированных специфическими гемолизинами. При подборе соответствующих концентраций комплемента он будет выявляться только в том случае, когда взаимодействия антигена и антител в испытуемой (или опытной) системе не происходит. Реакция связывания комплемента проста по выполнению, но требует присутствия антигена в большой концентрации при относительно высокой химической чистоте антиген-содержащего раствора. По этой причине реакция связывания комплемента широкого применения в вирусологии не получила. На ранних этапах изучения гепатита В она использовалась как метод обнаружения поверхностного антигена вируса гепатита В и антител к нему. В реакции связывания комплемента удавалось титровать антитела к вирусу гепатита А, когда в качестве антигена бралась взвесь вирусных частиц, полученная в результате сложной многоступенчатой экстракции из печени зараженных обезьян. После появления твердофазных иммунологических тестов интерес к использованию реакции связывания комплемента был полностью утрачен..Реакция связывания комплемента. Суть метода заключается в следующем: 1) антиген смешивают с антителами; 2) к образовавшимся комплексам антиген—антитело добавляют известное количество комплемента, который связывается с этими комплексами; 3) количество несвязанного комплемента оценивают в реакции гемолиза с эритроцитами барана)- коротко. Реакция связывания комплемента позволяет выявить IgG, которые появляются на поздних стадиях заболевания и могут присутствовать в сыворотке спустя много лет после перенесенного кокцидиоидоза.. Выявление IgG в титре 1:16 и более характерно для генерализованной инфекции. Титр антител определяют повторно через 3 нед. При бессимптомно протекающей легочной форме кокцидиоидоза или легочной форме, сопровождающейся образованием каверн, антитела могут не выявляться. Серологические реакции бывают также отрицательными при исследовании СМЖ больных кокцидиоидозным менингитом. Реакция протекает в две фазы. Первая фаза - взаимодействие антигена и антител при обязательном участии комплемента. Вторая - выявление результатов реакции при помощи индикаторной гемолитической системы (эритроциты барана и гемолитическая сыворотка). Разрушение эритроцитов гемолитической сывороткой происходит только в случае присоединения комплемента к гемолитической системе. Если же комплемент адсорбировался ранее на комплексе антиген-антитело, то гемолиз эритроцитов не наступает.Результат опыта оценивают, отмечая наличие или отсутствие гемолиза во всех пробирках. Реакцию считают положительной при полной задержке гемолиза, когда жидкость в пробирке бесцветна и эритроциты оседают на дно, отрицательной - при полном лизисе эритроцитов, когда жидкость интенсивно окрашена («лаковая» кровь). Степень задержки гемолиза оценивают в зависимости от интенсивности окраски жидкости и величины осадка эритроцитов на дне (++++, +++, ++, +).Реакция связывания комплемента применяется редко, поскольку ее оценка не стандартизирована. Положительным считается титр антител не менее 1:4. В период разгара заболевания он обычно повышается до 1:32. Реакция связывания комплемента остается положительной в течение нескольких месяцев или лет. Реакции с участием комплемента, в качестве которого используют свежую сыворотку крови морской свинки, основаны на способности субкомпонента комплемента Clq и затем других компонентов комплемента присоединяться к иммунным комплексам.Реакция связывания комплемента (РСК) позволяет титровать антигены или антитела по степени фиксации комплемента комплексом антиген — антитело. Эта реакция состоит из двух фаз: взаимодействия антигена с испытуемой сывороткой крови (исследуемая система) и взаимодействия гемолитической сыворотки с эритроцитами барана (индикаторная система).

48.Реакциис меченными антителами и антигенами в вирусологии. Реакция иммунофлюоресценции(РИФ). 1. Реакции с использованием химических и физических меток. Иммунофлюоресценция заключается в использовании меченных флюорохромом антител, точнее, иммуноглобулиновой фракции антител lgG. Меченное флюорохромом антитело образует с антигеном комплекс антиген антитело, который становится доступным наблюдению под микроскопом в УФ-лучах, возбуждающих свечение флюорохрома. 2. Иммунофлюоресценцию широко используют не только в бактериологии, вирусологии, паразитологии, но и в иммунопатологии для обнаружения антител к тканевым антигенам человека. (Реакция иммунофлуоресценции (РИФ) — серологическая реакция, основнаная на взаимодействии с антигеном флуоресцирующих антител. Различают прямую и непрямую РИФ При прямой РИФ специфические поли- или моноклональные антитела, меченные изоцианатфлуоресцеином, взаимодействуют с антигеном.Эта реакция используется в иммунологии (для идентификации ИКК методом проточной цитофлюорометрии); в вирусологии (для идентификации вирусов); в микробиологии (для идентификации бактерий, грибов, простейших).При непрямой РИФ антивидовые антитела, меченные изоцианатфлуоресцеином (например, античеловеческие, антикроличьи, антимышиные), взаимодействуют с комплексом специфических поли- или моноклональных антител и антигенов. Данная реакция используется для выявления в крови специфических противомикробных антител, тканевых антигенов, иммунофенотипирования ИКК, выявления фиксированных иммунных комплексов.)

49.Классификация пит,сред для культур клеток. 1) Естественные: Среда Эндерса-85-90%,коровьего эмбрионного экстракта 5-10%,конской сыворотки 5%2 )ферментативные гидролизаты: Аминопептид,гемогидролизат 3) синтетические: сбалансированные солевые Ра-ры:р-р Эрла, поддерживающие среды: среда 199,ср Игло. Среды делятся на поддерживающие и ростовые. Поддерживающие - низкое содержание сыворотки до 2%,позволяет сох, культуру клетки в сост, медленного метаболизма и период размножения. Ростовые-для образования добавляют 5-10%сыворотки крупного рогатого скота или эмбрион,телячий сыво-ки и антибиотики(пенициллин и стрептом). Питательные среды, растворы и сыворотки использ-ися в работе с кл,культурами: 1 среда 199 -включает свыше 60 компонентов, полный набор аминокислот,16 вит,коферменты,минеральные соли, 2среда Игло -содержит 13 аминокислот 8 вит,минер соли,глюкоза, 3 раствор Версена 0,02%-используют для снятия клеток для стекла. Версен -это комплекс, связывает ионы двухвалентных катионов, которые обеспечивают связь Кл.между собой и стеклом. 4 Раствор трипсина - применяют при разъединения ткани на отдельные клетки при изготовлении первично-трипсинозированых культур и для снятия клетки с стекла. Классификация клет-ых культур:Учитывают такие признаки: количество пассажей и происхождение клеток .Типы клет культур: 1 )первично трипсанизированные кл культуры получают быстрорастущих эмбриональных тканей.В них изучают взаимодействие вирусов с клетками. Вакцины не получают. 2 )пассажные или прерываемые кл – получают чаще всего из опухолевых тканей.Количество пассажей не ограничено.Клетка злокачественная.Мы не можем изучать взаимодействие с вирусом.Нельзя получать вакцины, но для выделения вирусов эти клетки удобны. 3 .полупрерываемые клетки или диплоидные клеточные штампы - получают из нормальных клеток; набор хромосом диплоидный.Это клетки кожи,легких. Количество пассажей до 100. их используют для получения вирусных вакцин.

50 Взаимодействие вирусных вакцин. Вирусы яв-ся облигатным внутриклеточными паразитами. Типы взаимодействия вируса с клетками:1) продуктивный тип взаимодействия- хар-ся те, что в рез-те проникновения и репродукции клетка гибнет,из нее выходит много вирусов (вирусное потомство)2) интегративный-хар-ся тем, что происходит объединение или интеграция генома вируса и клетки.Наиболее характерен такой тип для ДНК геномных вирусов (герпеса, аденовирусов),для РНК геномных интеграция возможно при помощи ферментов обратной транскерпитазы,(О Т) от неё переписывают информацию с РНК вирусов, синтезирует его ДНК- копия.Она интегрирует с генома клетки.Вирус в таком состоянии наз-ся провирус 3абортивный тип - репродукция прерывается на каком-то этапе. Этапы продуктивного взаимодействия вирусов с клетками: 1) Адсорбция - это прикрепления вируса на пове-ти чувс-ых клеток 2-ве фазы:а) Обратимая - она происходит в рез-те электростатического взаимодействия, клетки имеют отрец-ый потенциал,а вирус полож-ый.Эту фазу можно прервать встряхиванием. Обработкой АТ. Изменением pH б) необратимая -это взаимодействие между собой рецепторов вируса и клетки. У вирусов рецепторы имеют разную химич природу.Лучше для абсорбции проходит при 37*,но возможна при+4.Энергия для абсорбции используется за счет процессов гликолиза. Длительность адсорбции разная:15-20мин у вирусов полиомиелита,2 часа –вирус гриппа. Можно блокировать рецепторы- это один из методов терапии и вирусных инфекций 2 )проникновение или пенитрация – большинство вирусов проникают в клетку полностью путем,которые называют виролексиз. Иногда проникновение происходит путем слияния суперкапсида вмруса и мембраны клетки.Исключение составляют бактериофаги- у них в клетку попадает только НК 3) депротеинизация (раздевание)-это освобождение генома вируса из белкового капсида или суперкапсида Для этого процесса нужны ферменты, синтез которых индуцирует вирус в клетки 4) переключение генетической информации клетки на вирус- вирус становится генетическим хозяином клетки.Вирус индуцирует в клетки белков репресеров, которые подавляют клеточный геном. 5) Синтез вирусных компонентов – НК и Белков.Для НК синтезирует репликативный, информационные и вибрионные НК,которые остаются неиспользованные 6) Сборка вируса проходит путе м объединения белков и НК,благодаря их пространственной конфигурации.Это наз – самосборка. Иногда бывает сборка при помощи ферментов. В процессе сборки часто синтезируется избыточное кол-во белков или НК,кот остаются неиспользованными. 7) выход вирус а из клетки 2 способа: а) взрыв-клетка разрушается б) почкование –процес выхода из клетки сложных вирусов,при этом происходит изменение клеточной мембраны. Так о бразуется суппер кабсид.

Дата добавления: 2015-09-03 | Просмотры: 1199 | Нарушение авторских прав