 |
|
АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология |
Бактериоскопический метод исследования. Этапы. Методика окрашивания бактерий по Граму1 Применяется темнопольная микроскопия при увеличении в 300-400.Положительный результат- обнаружение бактерий.2 Метод окрашивания по Грамму 1.препарат окрашиваем генцианом или кристаллом фиолета 2мин;2.обрабатываем раствором Люголя 1мин;3.обрабатываем этиловым спиртом 30сек;4.промываем водой;5.окрашиваем фуксином 2мин.
13.Типы питания у МиО: 1)автотрофии- МиО,кот. сам питательные среды:Пентон,Агар-агар,Желтин,Панкреатин,КровянойМПА,ЖСА(желтковосолевой агар),МПА(мясопентонный агар),Среда Плоскирева,Бульон Готингера,Лужная пентоно вода Требования к П.С.:1полноценность по хим. Составу2наличие стимуляторов роста3определённая реакция рН4буферность,5соответствующий,окислително-вост6Потенциал6изотоничность7 вязкость 8влажность9прозрачность10стерильность Классификация П.С.:1.По консистенции:1)твёрдые2)полужидкие3)жидкие2.Попроисхождению:1.ПриродныеА)Асцитическая жидкостьБ)Сыворотка кровиВ)ЖелчьГ)ЯйцаД)МолокоЕ)КартофельЖ)Морковь и др.1.Искусственные2.Синтетические3.По назначению и составу:1.Основные:-МПБ-МПА1.Дифференционно-диагностические-для выявления ферментации углеводов(Среда Гиса,Среда Эндо и др.)-селективные среды(Среда плоскирева,среда Левина,Висмут-сульфит агар,жлточно-солевой агар)-среды,содержащие индиферентные в-ва(цитратный агар Симонова)-для выявления протиолетичских и гемолетиеских свойств(свёрнутая сыворотка МПЖ,агар с кровь)-для выявления окислит.-востановит. Способности(среды с нитратами,с краскамисреда Ротберга)1.Специальные:-желчный бульон-сахарный булон-агар с кровью-асцитический бульон-асцитический агарВ процессе метаболизма выделяют два вида обмена:1) пластический (конструктивный):а) анаболизм (с затратами энергии);б) катаболизм (с выделением энергии);2) энергетический обмен (протекает в дыхательных мезосомах):а) дыхание;б) брожение.В зависимости от акцептора протонов и электронов среди бактерий различают аэробы, факультативные анаэробы и облигатные анаэробы. Для аэробов акцептором является кислород. Факультативные анаэробы в кислородных условиях используют процесс дыхания, в бескислородных – брожение. Для облигатных анаэробов характерно только брожение, в кислородных условиях наступает гибель микроорганизма из-за образования перекисей, идет отравление клетки. 14). химический состав бактерий! Органические и неорганические вещества. Белки: 50 -70% сухого остатка. Простые и сложные: липопротоиды, гликопротоиды, нуклеопротоиды.Функции: структурные, ферментивные, токсическая и антигенная. Нуклеиновая кислота: 10-30%Ф-и: участие в синтезе белка, информационная, изменчивость. Липиды: 5-10% до 40%Ф-ции: структурная, токсическая, защитная, енергетическая Углеводы: 16% простые и сложные!Ф-ции: структурная, энергетическая!Неорганические соиденения: Вода: 80% свободная и связанная.Ф-ции: ростворение питатильных веществ, источник водородных, гидроксильных групп для хим.реакций. Другие н.с. или соли: хим.реакц., для поддерж. Буферности соли, для изотоничности, они вхолят в состав ферментов! Типы питаний у микроорганизмов: 1.Автотрофы-сами синтезируют сложноорганичные вещества из неорганичных. Они получают энергию путем фотосинтеза -они назыв. Фотоавтотрофии, энергию хим. реакц.- хемоавтотрофии.2.Гетеротрофы - синтезируют сложноорганичные вещества из органических. Они получают энергию путем хемогетеротрофии. Источники органических веществ:Гетеротрофии сапрофиты – использ. мертвые организмыГетеротрофии паразиты – исп. живые организмы Поступление питательных средств в клетку: 1.Пассивный транспорт (диффузия)2.Активный транспорт (прходят с помощью ферментов) 15) Дыхание микробов -это собой биологическое окисленразличных органических соединений и некоторых минеральных веществ, в результате чего образуется энергия в виде (АТФ), часть которой используется микробной клеткой в физиологических процессах жизнедеятельности, а остальное количество выделяется в окружающую среду. Биологическое окисление протекает путем дегидрирования (отщепления водорода) от окисляемого соединения и последующего присоединения его к активному кислороду или к другому акцептору (если окисление идет в анаэробных условиях). Совокупность окислительно-восстановительных ферментных реакций, осуществляющих последовательный перенос водорода с окисляемого продукта на кислород, называют тканевым дыханием. Брожение — серия окислительно-восстановительных реакций, в ходе которых образуются нестабильные молекулы, с которых остаток фосфорной кислоты переносится на АДФ с образованием АТФ (субстратное фосфорилирование). При этом возможно внутримолекулярное окисление и восстановление. Культивирование анаэробов: Для культивирования анаэробов применяют особые методы, сущность которых заключается в удалении воздуха или замены его специализированной газовой смесью (или инертными газами) в герметизированных термостатах — анаэростатах[6].Другим способом выращивания анаэробов(чаще всего микроорганизмов) на питательных средах — добавление содержащих редуцирующие вещества(глюкозу, муравьинокислый натрий и др.), уменьшающие окислительно-восстановительный потенциал. Общие методы культивирования для анаэробных организмовGasPak — система химическим путем обеспечивает постоянство газовой смесиприемлемой для роста большинства анаэробных микроорганизмов. В герметичном контейнере, в результате реакции воды с таблетками боргидрида натрия и бикарбоната натрия образуется водород и диоксид углерода. Водород затем реагирует с кислородом газовой смеси на палладиевом катализаторе с образованием воды, уже вторично вступающей в реакцию гидролиза боргидрида. Метод Цейсслера применяется для выделения чистых культур спорообразующих анаэробов. Для этого производят посев на среду Китт-Тароцци, прогревают 20 мин при 80 °C (для уничтожения вегетативной формы), заливают среду вазелиновым маслом и инкубируют 24 ч в термостате. Затем производят посев на сахарно-кровяной агар для получения чистых культур. После 24-часового культивирования интересующие колонии изучаются — их пересеивают на среду Китт-Тароцци (с последующим контролем чистоты выделенной культуры). Метод Фортнера — посевы производят на чашку Петри с утолщенным слоем среды, разделённым пополам узкой канавкой, вырезанной в агаре. Одну половину засевают культуру аэробных бактерий, на другую — анаэробных. Края чашки заливают парафином и инкубируют в термостате. Первоначально наблюдают рост аэробной микрофлоры, а затем (после поглощения кислорода) — рост аэробной резко прекращается и начинается рост анаэробной. Метод Вейнберга используется для получения чистых культур облигатных анаэробов. Культуры, выращенные на среде Китта-Тароцци, переносят в сахарный бульон. Затем одноразовой пастеровской пипеткой материал переносят в узкие пробирки (трубки Виньяля) с сахарным мясо-пептонным агаром, погружая пипетку до дна пробирки. Засеянные пробирки быстро охлаждают, что позволяет фиксировать бактериальный материал в толще затвердевшего агара. Пробирки инкубируют в термостате, а затем изучают выросшие колонии. При обнаружении интересующей колонии на её месте делают распил, материал быстро отбирают и засеивают на среду Китта-Тароцци (с последующим контролем чистоты выделенной культуры). Метод Перетца — в расплавленный и охлаждённый сахарный агар вносят культуру бактерий и заливают под стекло, помещённое на пробковых палочках(или фрагментах спичек) в чашку Петри. Метод наименее надежен из всех, но достаточно прост в применении. классификация микроорганизмов по типу дыхания: 1. облигатные аэробы (только при наличии кислорода)2. облигатные анаэробы (без кислорода, при не они погибают, потому что не имеют фермента каталазы или пероксидазы, которая розрушает Н2О2 – токсины для бактерий)3. факультативные анаэробы 4. микроаэрофилы (небольшое к-во кислорода)5. капняические (небольшое к-во СО2Аэробное дыхание – окисление. Анаэробное дыхание – брожение. 16. ферменты микроорганизмов: 1. Экзоферменты / эндоферменты(по связи с клеткой)2. конститутивные и адаптивныеЗ. ферменты патогенности(характеризуют патогенные микробы)4. по типу хим.реакцийОксидоредуктазы(окислит-востановит. Ферменты)Трасферазы(пернос функциональныхгрупп)Гидролазы(ращепление)Лиазы(негидролетическое ращепление)Лигазы(соединение 2 молекул)Изомеразы(перенос или поворот молекул)ФЕРМЕНТЫ ПАТОГЕННОСТИ Токсины — не единственный фактор развития болезни. Размножаясь в теле насекомого, бактерии при участии своего интенсивно функционирующего ферментативного аппарата взаимодействуют с процессом обмена веществ в клетках инфицированного организма; при этом ферменты способны не только нарушать течение биохимических процессов в оккупированном организме, но и вызывать нарушение целостности клеточных структур, участвовать в их разрушении. Нередко их условно выделяют, называя ферментами патогенности. Ферменты патогенности, так же как токсины, являются белками те и другие способны проявлять свое действие в весьма малых дозах после сравнительно длительного бессимптомного периода. Действие ферментов, так же как токсинов, осуществляется при участии активных центров молекулы, которые представлены в ней особой конфигурацией пространственного расположения отдельных участков поли-пептиднои цепи. И все-таки отождествлять оба этих фактора патогенности бактерий не следует. Прежде всего они отличаются рядом специфических черт участия в патогенезе инфекционных заболеваний. idK, токсины принято считать основным фактором пагогеннссти, действие их носит детерминирующий характер, определяющий главные черты проявления болезни. Ферменты же чаще гсего служат сопутствующим фактором в патогенезе, они ответственны за проявление отдельных симптомов заболевания. В развитии болезни участвует весь комплекс факторов патоген-ности: токсины, ферменты патогенности, а также некоторые продукты метаболизма патогена и продукты распада клеток самого пораженного организма. 17.размножение- это способность МиО к самовоспроизведению и повешению колличества особей. Способы размоножения бактерий: 1.Делени- бакрерий и д.р. МиО2.Ферментация3.У бактерий бывает аналог полового процесса-пресексуаьный процесс Процесс деления бактерий: 1)ДНК присоединяется к мезосомам-начинается деление ДНК и расщепление нуклеоида2)после окончания репликации ДНК происходит формироване перегородки,которая делит клетку на 2 части.Настоящая перегородка образуется и Грамм+,она состоит из пептидогликана.У Грам- образуется притяжение.В этот период клетки интенсивно растут.3)отделение дочерней клетки от малетнской.Процесс деления имеет разную скорость –это зависит от вида,питательной среды,температурыЮконцентрации О2 или СО2.Примером у могих бактерий является скорость деления 15-20 минут(кишечная палочка.стафилококки)Есть медленно растущие-микробактерии туберкулёза(одно деление происходит за 18-24 часа). Фазы размножения бактерий в стационарных условиях(описал Моно): 1)исходная стационарная фаза-это время от посева в среду,продолжительностью 1-2 часа;2)фаза задержки размножения-2 часа.В первой и второй фазах происходит адаптация бактерий к условиям питательной среды;3)логарифмическая фаза размножния-характер-ся интенсивным повышение кол-ва бактерий (5-6 часов).В этой фазе бактерии особенно чувствительны к действию физико-химических факторов;4)фаза отрицательного ускорения- скорости размножения падает и это длится около 2 часов.Начинается потому,что в среду выделяются и накапливаются прдукты метаболизма;5)фаза стационарного максимума-характеризуется тем,что кол-во бактерий,кот. Размножаются и погибают,одинаково,для каждого вида существует индивидуальная хар-ка или максимальная концентрация;6)фаза ускорения гибели;7)фаза логарифмической гибели-происходит 5-6 часов.Кол-во бакерий,которое погибает увеличивается в логарифмической прогрессии;8)фаза уменьшения скрости гибели.Бактерии достигают стационарной фазы и затем поддерживаются в ней при добавлении питательных в-в и удалении продуктов метаболизма. 18. Бактоериологический метод. Бактериологический метод по частоте обнаружения возбудителя уступает бактериоскопическому. При одновременном использовании обоих методов частота подтверждения диагноза достигает 70 %. Отрицательные результаты бактериологического исследования не исключают менингококковой природы заболевания. П. П. Чибирас предложена бактериоскопия мазков крови или толстой капли крови в целях обнаружения менингококка. Метод прост и высоко результативен, является экспресс-методом. Мазки крови окрашиваются после фиксации по Романовскому-Гимзе, а препараты толстой капли - без фиксации 1%-ным водным раствором метиленовой синьки в течение двух минут. В мазках крови почти в каждом поле зрения удается обнаружить 5-20 менингококков, фагоцитированных нейтрофильными лейкоцитами. Аналогичным методом предлагается исследовать спинномозговую жидкость. Методы идентификации: 1)морфологическая-изуч. Морфологию при иммерсионной,темнопольной микроскопии2)изучает подвижность(наличие жгутиков)-метд раздавленной каплив темном поле3)тинктуральные свойства-окраска по Граму4)культурные свойства-это признаки вида5)ферментативные свойства-изучают при посеве на ДДС,Гисса.6)изучение АГ свойств назыв. Серологическая идентификация7)изучение патогенности8)изучение чувствительности к б.ф. 26.Генетическая инженерия — это раздел молекулярной генетики, связанный с целенаправленным созданием новых комбинаций генетического материала. Основа генетической инженерии — теория гена. Созданный генетический материал способен размножаться и синтезировать конечные продукты обмена. Микробиологические основы генной инженерии 1)получение нужного видаА)выделение из генома при помощи плазмид или ферментов рестириктазБ) синтез ДНк гена на РНК клетки или искусственный синтез2) соединение гена с вектором для переноса – с бактериофагом, плазмидой, транспозонами3) встраивание гена в клетку реципиента. Сшивка в геноме при помощи фермента лигоз4) создание условий для активного или пассивного размножения клеток реципиента и выделение новых веществ. В роли реципиента используют кишечную палочку condida или дорожки как эукаритический геном. Достижение генной инженерии: получены препараты – инсулин. Соматотропин, интерфероны (противовирусные и противоопухолевые)
28.Химиотерапия- это учение о лечении инфекционных заболеваниях при помощи препаратов, которые избирательно подавляют в организме размножение патогенных микроорганизмов или рост опухоли. Эти препараты называются химиотерапевтическими. При химиотерапии происходит взаимодействие трёх элементов: химиотерапевтического препарата, макроорганизма имикроорганизма. Основателем учения о химиотерапии является Пауль Эрлих. Он изучал действие трепаносомы. На спирохеты анилиновых красителей и препаратов на основе мышьяка. Эрлих получает ряд новых препаратов: сальварсан и другие. Эрлих изложил принципы химиотерапии:1.Рецепторное взаимодействие препарата и возбудителя2.Химические изменения препаратов позволяет получить новые варианты, которые отличаются по своей активности(он или растёт или снижается)3.Химиотерапевтические препараты могут изменятся в организме, их активность растёт или уменшается4.Эрлих предложил развитие лекарственной устойчивости5.Эрлих ввёл понятие о химиотерапевтическом индексе ХТИ=МАХ переносимая доза препарата МИМ терапевтическая доза Механизмы действия сульфил амидов(САМ): изучили что по химической природе САМ очень похож на парааминобензойную кислоту(ПАБК) – фактор роста для многих бактерий, используется при синтезе фолиевой кислоты. Поэтому проникая в клетку САМ включается в метаболизм клетки вместо ПАБК. Это приводит к гибели клетки. Такой механизм действия-антиметаболический.
19.Влияние физических.химических и биологических факторов на МО: 1.темпераура:-пирографы- рост при темп. 5-10*С до 20*С-мезофилы-20-40*С-термофилы-50-75*С некоторые 100*С2.рН оптимум нейтальная или слабощелочная 7,2-7,43.Соли-оптимальная концентрация соли создаёт изотонические условия NaCl=0,85% 4.Ультразвук(УЗ)5.Ультрафиолетовое излучене(УФ)6.Действие химических в-в используется для антицептиков дезинфекции.Антицептика-это комплекс методов,направленных на предотващение развития инфекции в ране,используют такие препараты-спитр 70%,перекись водорода,спиртовые растворы йода,бриллиантовая зелень,перманганата калия. Химические в-ва: 1)Поверхностно активные в-ва(ПАВ)-связываются с цитоплпзматической мембраной,изменяют её поерхностное натяжение,приводят к нарушению функций цитоплазматич. Мембраны и клеточной стенки(моющие средства)2)Соли тяжелых металлов-вызыват коагуляцию белка в клетке,изменяют заряд ионов металлов и нарушают проницаемость цитоплазм мембраны3)окислители-действуют на сульфо-гидридные группы активных белков,вызывают их денатурацию.4)Соединения фенола и крзола-повреждают кл. стенку,а затем и белки кл.5)формальдегид(формалин 40%)6)анилиновые красители-имеют бактерицидные св-ва;вызыв.нарушения цитоплазматической мембраны,кл. стенки и белкового синтеза Действие биологических факторов на МО: -это влияние антибиотиков.Чаще всего используют антибиотики для лечебных целей.По механизму действия могут быть анбиотики,кот. Влияют на синтез компонентов клеточной стенки,рибосом,цитоплазматич. Мембраны и др.Также в в вирусологии антибиотики используют для стерилизации. Стерилизация -это полное уничтожение вегетативных и споровых формвсех МО на предметах,материалах,в пит. Средах. Контроль стерильности. Существует 3 группы способов контроля: 1.Физический: берется пробирка, куда насыпают какое-либо вещество, плавящееся при температуре около 120 градусов - сера, бензойная кислота. Недостаток этого способа контроля состоит в том, что мы видим что порошок расплавился и значить необходимая температура достигнута, но мы не можем быть уверены что она была такой на протяжении всего времени экспозиции. 2.Химический контроль: берут фильтровальную бумагу, помещают ее в раствор крахмала, после чего погружают в раствор Люголя. Она приобретает темно-бурый цвет. После экспозиции в автоклаве крахмал при температуре свыше 120 градусов разрушается, бумажка обесцвечивается. Метод имеет тот же недостаток что и физический. 3.Биологический контроль: это метод самый надежный. Берут образцы стерилизовавшегося материала и сеют на питательные Среды, не нашли микробов - значит все в порядке. Нашли микробы - значит необходимо повторно провести стерилизацию. Недостаток метода в том, что ответ мы получаем только спустя 48 часов, а материал считается стерильным после автоклавирования в биксе в течение 48 часов. Значит, материал используются еще до получения ответа из бактериологической лаборатории.Наиболее опасный источник контактной инфекции - руки хирурга. Для стерилизации кожи неприменимы физические методы, кроме того, сложность еще состоит в том, что после обработки рук они опять загрязняются за счет секрета сальных, потовых желез. Поэтому применяют дубление кожи спиртом, танином, при этом наблюдается резкий спазм выводных протоков потовых, сальных желез и инфекция, которая там находится неспособна выйти наружу. Дата добавления: 2015-09-03 | Просмотры: 953 | Нарушение авторских прав |