АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Современныевзгляды на природу и происхождение вирусов. Место вирусов в системе живого. Методы культивирования вирусов и ихоценка

1. Современные представления о вирусах складывались постепенно. Послеоткрытия вирусов Д. И. Ивановским (1892) их считали просто очень мелкими микроорганизмами, не способными расти на искусственных питательных средах.Вскоре после открытия вируса табачной мозаики была доказана вирусная природа ящура [Fler F, Frosch P. 1898], а еще через несколько лет были открыты бактериофаги [d'Herrelle F., 1917]. Таким образом, были открыты три основные группы вирусов, поражающие растения, животных и бактерии.Однако в течение длительного времени эти самостоятельные разделы вирусологии развивались изолированно, а наиболее сложные вирусы —бактериофаги — долгое время считались не живой материей, а чем-то вродеферментов. Тем не менее, уже к концу 20-х — началу 30-х годов стало ясно,что вирусы являются живой материей, и примерно тогда же за ними закрепилисьнаименования фильтрующихся вирусов, или ультравирусов 2. Положение вирусов в системе живого.Вирусы являются одной из самых распространенных форм существования органической материи на планете по численности: воды мирового океана содержат колоссальное количество бактериофагов (около 1011 частиц на миллилитр воды).Вирусы имеют генетические связи с представителями флоры и фауны Земли. Согласно последним исследованиям, геном человека более чем на 30 % состоит из информации, кодируемой вирус-подобными элементами и транспозонами. С помощью вирусов может происходить так называемый горизонтальный перенос генов, то есть передача генетической информации не от отца к сыну и так далее, а между двумя неродственными (или даже относящимися к разным видам) особями. Так в геноме высших приматов существует белок синцитин, который, как считается, был привнесен ретровирусом. 3. Для культивирования вирусов используют ряд методов. Это культивирование в организме экспериментальных животных, развивающихся куриных вибрионах и культурах тканей (чаще — эмбриональные ткани или опухолевые клетки). Для выращивания клеток тканевых культур используют многокомпонентные питательные среды (среда 199, среда Игла и др.). Они содержат индикатор измерения рН среды и антибиотики для подавления возможного бактериального загрязнения.О размножении вирусов в культуре ткани также можно судить по методу "бляшек" (негативных колоний). При культивировании вирусов в клеточном монослое под агаровым покрытием на месте пораженных клеток образуютсязоны деструкции моно-сом — так называемые стерильные пятна, или бляшки.Это дает возможность не только определить число вирионов в 1 мл среды (считается, что одна бляшка является потомством одного вириона), но и дифференцировать вирусы между собой по феномену бляшкообразования.Следующим методом, позволяющим судить о размножении вирусов (только гемагглютинирующих) в культуре ткани, можно считать реакцию гемадсорбции.При культивировании вирусов, обладающих гемагглютжирующей активностью, может происходить избыточный синтез гемагглютининов. Эти молекулы экспрессируются на поверхности клеток культуры ткани, и клетки культуры ткани приобретают способность адсорбировать на себе эритроциты — феномен гемадсорбции. Молекулы гемагглютинина накапливаются и в среде культивирования, это приводит к тому, что культуральная жидкость (в ней накапливаются новые вирионы) приобретет способность вызывать гемагглютинацию. Наиболее распространенным методом оценки размножения вирусов в культуре ткани является метод "цветной пробы". При размножении в питательной среде с индикатором незараженных клеток культуры ткани вследствие образования кислых продуктов метаболизма она изменяет свой цвет. При репродукции вируса нормальный метаболизм клеток нарушается, кислые продукты не образуются, среда сохраняет исходный цвет.

42. Принципыклассификации вирусов. Основные свойства вирусов человека и животных.1.Классификация вирусов,Основные принципы 1.тип и характеристика нуклеиновой кислоты,2.размер вириона в(нм),3.наличие или отсутствие суперкапсидной оболочки,4. Тип симметрии нуклеотида,5. Характреистика Вирусных ферментов,6.Антигенная характеристика вириона,7. Место и характер размножения в клетке..Вирусы отнесены к царству Vira. В основу их классификации положен тип нуклеиново кислоты, образующей генов…Для вирусов предложены следующие таксономические категории (по восходящей): Вид (Species) —> Род (Genus) —> Подсемейство (Subfamilia) —> Семейство (Familia). Но категории подсемейств и родов разработаны не для всех вирусов. м. Соответственно выделяют рибовирусы (РНК-вирусы) и дезоксирибовирусы (ДНКвирусы).ДНК7видов1.Poxviridae,2.Herpesviridae,3.Adenoviridae,4.Poliomaviviridae,5.Papillomaviridae,6.Parvoviridae,7.Cercenoviridae……РНК14видов,1.Retroviridae,2.Hepadnoviridae,3.Arenaviridae,4.Bunyaviridae,5.Orthomyxoviridae,6.Rabdoviridae,7.Raromixoviridae,8.Filovaridae,9.Tagovaridae,10.Flaviridae,11.Coronaviridae,12.Astroviridae,13.Picornoviridae,14.Reoviridae… 2. Бактерии - это одноклеточные организмы растительной природы, размеры которых колеблются в пределах от 0,3 - 0,5 до 8 -10мкм (10-6 см). Так, возбудитель туляремии имеет размер от 0,7 до 1,5 мкм, а сибирской язвы - от 3 до 10 мкм. Масса одной клетки при размере в 2-3 мкм составляет 3*10-9мг. Подсчитано, что в 1 мл жидкой рецептуры может содержаться более 550 млрд бактерий. Размножение бактерий происходит путем их деления. При благоприятных условиях бактериальная клетка делится на 2 через каждые 20-30 мин. По внешнему виду различают три основных формы бактерии: шаровую (кокки), палочковидную и извитую. Типичными представителями бактерий являются возбудители сибирской язвы, туляремии, чумы, холеры и др. Отдельные болезнетворные бактерии в процессе жизнедеятельности выделяют продукты, обладающие токсическими свойствами - токсины (яды белкового характера) Бактерии весьма чувствительны к воздействию высокой температуры, солнечного света, резким колебаниям влажности и дезинфицирующим средствам, сохраняют достаточную устойчивость при пониженных температурах до -15 - 25°С Некоторые виды бактерий способны покрываться защитной капсулой или образуют спору. Микробы в споровой форме обладают очень высокой устойчивостью к высыханию, недостатку питательных веществ, действию высоких и низких температур и дезинфицирующих средств.. Отличительной особенностью вирусов является неспособность к самовоспроизведению вне организма. Вирусы способны жить и размножаться только в живых клетках, поэтому они являются клеточными паразитами. Вирусы - обладают высокой устойчивостью к низким температурам и высушиванию. Солнечный свет, особенно ультрафиолетовые лучи, а также температура выше 60°С и дезинфицирующие средства (формалин, хлорамин и др.) действуют на вирусы губительно. Различают три вида вирусов: 1 - вирусы бактерий (бактериофаги); 2 - вирусы, поражающие высшие растения;3 - вирусы, патогенные для человека и животных.В природе существуют две формы вирусов: 1 - кубовидная, 2 – палочковидная. Вирусы являются причиной более 200 заболеваний, представители вирусов - возбудители таких инфекционных заболеваний, как о а, желтая лихорадка, венесуэльский энцефаломиелит лошадей (ВЭЛ).

43 Методыкультивирования вирусов и их оценка. Методы определения репродукции вирусов в курином эмбрионе и культуреклеток. 1. Для культивирования вирусов используют ряд методов. Это культивирование в организме экспериментальных животных, развивающихся куриных вибрионах и культурах тканей (чаще — эмбриональные ткани или опухолевые клетки). Для выращивания клеток тканевых культур используют многокомпонентные питательные среды (среда 199, среда Игла и др.). Они содержат индикатор измерения рН среды и антибиотики для подавления возможного бактериального загрязнения.О размножении вирусов в культуре ткани также можно судить по методу "бляшек" (негативных колоний). При культивировании вирусов в клеточном монослое под агаровым покрытием на месте пораженных клеток образуютсязоны деструкции моно-сом — так называемые стерильные пятна, или бляшки.Это дает возможность не только определить число вирионов в 1 мл среды (считается, что одна бляшка является потомством одного вириона), но и дифференцировать вирусы между собой по феномену бляшкообразования.Следующим методом, позволяющим судить о размножении вирусов (только гемагглютинирующих) в культуре ткани, можно считать реакцию гемадсорбции.При культивировании вирусов, обладающих гемагглютжирующей активностью, может происходить избыточный синтез гемагглютининов. Эти молекулы экспрессируются на поверхности клеток культуры ткани, и клетки культуры ткани приобретают способность адсорбировать на себе эритроциты — феномен гемадсорбции. Молекулы гемагглютинина накапливаются и в среде культивирования, это приводит к тому, что культуральная жидкость (в ней накапливаются новые вирионы) приобретет способность вызывать гемагглютинацию. Наиболее распространенным методом оценки размножения вирусов в культуре ткани является метод "цветной пробы". При размножении в питательной среде с индикатором незараженных клеток культуры ткани вследствие образования кислых продуктов метаболизма она изменяет свой цвет. При репродукции вируса нормальный метаболизм клеток нарушается, кислые продукты не образуются, среда сохраняет исходный цвет. 2. КУРИНЫЙ ЭМБРИОН…Куриные эмбрионы широко используются для выделения и размножения вируса еще со времени первого описания заражения в полость амниона (Burnet, 1940). Классическая работа Beveridge и Burnet по культивированию вирусов и рик-кетсий в курином эмбрионе была опубликована в 1946 г. С тех пор почти не было получено существенных дополняющих данных. В 40чх тодах для выделения вирусов гриппа типов А и В рекомендовалось заражение 13—14-дневных эмбрионов в полость амниона, а для адаптированных в лаборатории штаммов — заражение в полость аллантоиса 10— 12-дневных эмбрионов. Вплоть до 1968 г. выделение вирусов гриппа А и В можно было осуществить, как правило, лишь посредством заражения в полость амниона и для успешной адаптации требовалось много пассажей. Очень редко выделяли штамм путем заражения в полость аллантоиса, трудно предсказать заранее предрасположение штамма того или другого вируса к размножению при определенном способе введения, в качестве стандартной процедуры рекомендуется заражение 11-дневных эмбрионов в полость как амниона, так и аллантоиса.Неадаптированные вирусы, введенные в амнион 13-дневных эмбрионов, размножаются первоначально в трахее и легких. Они могут вызывать гибель эмбриона, но могут и не вызывать ее.Вирусы, многократно пассированные этим путем, размножаются в амниотической оболочке и эпителиальных покровах эмбриона, а также в респираторных путях, вызывая множественные кровоизлияния и быструю гибель его. Штаммы, не адаптированные к куриному эмбриону (фаза О—от original, т. е. исходная), нередко дают более высокие титры гемагглютинина с эритроцитами морской свинки или человека, чем с куриными эритроцитами. 'После адаптации (фаза D — от derived, т. е. производное) вирус обычно агглютинирует куриные эритроциты до тех же титров, что эритроциты млекопитающих. Этот переход из фазы О в фазу D (Burnet, Bull, 1943) наблюдается не 'всегда. Большинство штаммов вирусов гриппа А и В, выделенных после 1968 г., агглютинируют эритроциты морокой свинки и куриные эритроциты до одинаковых титров.

44. Реакциивирусной гемаглютинации и гемадсорбции. Механизм, практическое применение.

1. Реакция геммагглютинации или РГА не относится к серологическими реакциям, так как в ней не участвует иммунная сыворотка, то есть антитела. В основе РГА лежит агглютинация или склеивание эритроцитов человека, животных и птиц под действием вируса.Некоторые вирусы имеют на своей оболочке рецепторы, комплементарные рецепторам поверхности эритроцитов опредаленных животных,и при добавление суспензии вирусов эритроцитов,последнии склеиваються. Впервые РГА была описана в 1941 году Херстом, который показал, что эритроциты цыплят способны агглютинироваться под воздействием аллантоисной жидкости, содержащей вирус гриппа.. Реакция гемадсорбции (Ргад) ставится на культурах ткани при некоторых вирусных болезнях с целью обнаружения вируса в клетках зараженных культур ткани на ранних стадиях размножения вируса, то есть до появления цитопатогенного действия (ЦПД). По своей сущности эта реакция не является серологической и основана на способности зараженных вирусом клеток культуры ткани адсорбировать на себе эритроциты…. 2. РГА используется для индикации (обнаружения) вирусов при проведении ориентировочной диагностики, для титрования вирусов по гемагглютинирующим свойствам (установление гемагглютинирующих единиц - АЕ). С помощью РГА нельзя типировать и идентифицировать вирусы, ибо в ней не участвует сыворотка (антитело). Гемагтлютинацией обладают не все вирусы. Миксовирусы агглютинируют эритроциты многих видов животных, кур и человека. При постановке РГА нужно знать, какие эритроциты данным вирусом агглютинируются.

Дата добавления: 2015-09-03 | Просмотры: 635 | Нарушение авторских прав